卵黄抗体进展分析论文

论文关键词：卵黄抗体；仔猪腹泻；研究进展

论文摘要：介绍了卵黄体抗研究的历程和较其他抗体的优越性，阐述了卵黄抗体在治疗仔猪腹泻上的研究与应用。

1卵黄抗体研究历程

卵黄抗体的研究始于19世纪末至20世纪初。1889年，Klemperer发现了卵黄中富含抗体。1934年，Jukes的试验证明，母鸡血清中的抗体可以转移到卵黄中，从而为雏鸡提供被动免疫保护。Patterson等（1962）试验证实，相对于别的血浆蛋白，IgG被选择性地转运到卵泡中。1969年，Leslie和Clem将这种抗体命名为IgY。Roth等（1981）和Locken等（1983）提出并证实IgY转运到卵泡的过程是受体依赖性的，认为卵巢的IgY受体使得血液中所有的IgY亚群被选择性转运到卵泡中。存在于禽卵黄中的免疫球蛋白主要是IgY，IgM、IgA和IgD含量极少。

鸡IgY在功能上相当于哺乳动物IgG，但在结构上有所不同。相对于哺乳动物IgG，鸡IgY也是由2条轻链和2条重链组成，但IgY重链没有铰链区，除可变区外，有4个恒定区。Warr等（1995）利用序列比较表明，鸡IgY重链可变区Cv3、Cv4相当于哺乳动物IgG重链可变区Cy2、Cy3，而鸡IgY重链可变区Cv2在哺乳动物IgG重链中被铰链区取代。序列比较分析同样发现，相对于其他免疫球蛋白IgG、IgM和IgA，鸡IgY与哺乳动物IgE在系统发生学上更接近一些。鸡IgY可分为IgY1、IgY2和IgY33个亚类，但卵黄中只有IgY1和IgY22种。

2卵黄抗体的优越性

（1）由于鸟类与哺乳类动物种系发生学的差距，鸟类更适于生产抗哺乳动物抗原的特异性抗体。卵黄抗体不会激发补体系统，不与抗哺乳动物抗原的抗体发生反应，不与哺乳动物和细菌的Fc受体结合，这在免疫诊断中具有重要意义（Lindmark等，1983；Guss等，1986；Boscato等，1988；Kapyaho等，1989；Larsson等，1990；Lindahl等，1992）。

（2）化学性质稳定。卵黄抗体作为一种具有生物活性的免疫球蛋白，在贮存、生产、加工、摄食及消化过程中保证其稳定性是非常关键的。多项试验表明，鸡IgY具有较好的稳定性，耐酸、耐碱、耐热（Shimizu等，1992，1993；王炯等，1997；龙中儿等，1997；郭立君等，2001）。李春晖等（2002）研究了胃蛋白酶对抗狂犬病毒IgY活性的影响，结果表明：IgY经胃蛋白酶酶解24h后仍保持中和抗原的作用，其酶解片段也具有抗体活性。Hatta等（1993）研究了胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶对抗人轮状病毒IgY活性的影响，结果表明：在pH2.0条件下，抗人轮状病毒IgY在胃蛋白酶处理1h后活性几乎全部丧失；但在pH4.0条件下的活性为91%，10h后仍有63%的活性；而胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶对抗人轮状病毒IgY活性的影响不大。李学伍等（2000）试验表明，胃液对干粉抗体效价影响不大。特别对幼龄动物而言，其胃内pH值不是很低的情况下，口服卵黄抗体不会遭到太大的破坏。Hatta等（1994）用体内试验研究了鳗鱼胃肠环境对卵黄抗体的影响，结果表明：口服抗体7h后在鳗鱼肠内容物中仍可检测得到高水平的抗体活性。此外，卵黄抗体还具有良好的加工和贮存性能。李学伍等（2000）将抗仔猪大肠杆菌卵黄抗体制成喷雾干燥粉，除了黏附在管壁上的抗体滴度稍有下降外，正常喷出的干粉抗体滴度与卵黄液一致。体外试验表明，经喷雾干燥的含抗K88黏附素抗体的鸡卵黄粉能有效阻碍ETECK88与猪小肠黏膜的黏附（Jin等，1998）。卵黄抗体较易保存，4℃条件下存放5年或室温条件下存放6个月对抗体活性无明显影响（Larsson等，1993）。王炯等（1997）报道，抗脊髓灰质炎病毒IgY在25℃室温条件下保存半年，活性无明显变化。

（3）产量高，成本低，便于规模化生产。卵黄中抗体浓度能长期维持在相当于甚至超过血清抗体浓度的水平上（BarJoseph，1980；Larsson等，1993；Hatta等，1993）。1只产蛋鸡（以平均每周产蛋5~6枚，平均每枚鸡蛋蛋黄大约15mL计算）所产蛋生产的抗体量相当于90~100mL血清或180~200mL血液中抗体的量，例如1只兔子1个月可提取IgG约200mg，而1个月1只蛋鸡可从蛋中提取IgG2000mg以上。此外，在实际生产中，动物的采血不仅对动物本身是极大的应激，而且费时、费工，大规模生产是不切实际的，而利用蛋鸡生产抗体要方便的多。

3卵黄抗体的应用

在现代规模化养猪生产中，特别是大规模、高密度饲养方式下，仔猪腹泻是困扰养猪业的主要难题之一，给养猪业带来了巨大的经济损失。其中产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是导致规模化猪场仔猪腹泻的最主要的致病性大肠杆菌。ETEC感染性腹泻主要发生于集约化养猪场及种猪场，个体饲养的猪虽然也有发生，但较少见。无明显季节性，低温潮湿和寒冷季节多发。

生产上多采用ETEC的多价疫苗免疫母猪，提高初乳中的抗体水平，以防治哺乳仔猪ETEC感染性腹泻；但母乳中的抗体保护作用是有限和暂时的，在断奶后短期内将消失，而高免血清价格昂贵。因此，应用抗ETEC卵黄抗体治疗和预防新生和断奶仔猪腹泻的研究在国内外一直备受瞩目。

在卵黄抗体的研究中，国内外所用方法不尽一致，国内多采用大肠杆菌菌苗免疫母鸡，国外则采用大肠杆菌黏附素免疫。由于抗黏附素卵黄抗体在特异性、效果等方面优于抗菌体卵黄抗体（肖驰等，1998；Marquardt等，1999）。近年来，应用抗黏附素抗原特异性卵黄抗体预防和治疗仔猪腹泻已经取得了较大进展（Yokoyama等，1992；Erhard等，1996；Imberechts，1997；Marquardt等，1999）。Yokoyama等（1992）首次进行用卵黄抗体控制仔猪大肠杆菌病，他们将提纯的ETECK88、K99和987P黏附素制成黏附素蛋白疫苗，胸部肌肉注射免疫产蛋母鸡，抗体水平达到高效价后，收集鸡蛋，分离和喷雾干燥卵黄抗体，对感染不同ETEC菌株的初生未食乳仔猪进行卵黄抗体治疗，结果显示，所有仔猪接受不同菌株感染后12h内均发生腹泻；用效价为625和2500的抗体治疗仔猪全部存活，而对照组仔猪死亡率超过80%。Erhard等（1996）、Zuniga等（1997）、Imberechts等（1997）和Marquardt等（1999）都进行了相关的研究，均得到了类似的结论。肖驰等（1998）分别制备了抗K88、K99、987p和F41菌毛抗原和菌体抗原卵黄抗体，结果表明，用菌毛蛋白疫苗得到的抗体甘露糖血凝抑制（MRHI）效价要高于菌体疫苗，前者防治仔猪腹泻效果也明显好于后者。Marquardt等（1999）报道，用菌毛蛋白疫苗免疫的抗体滴度为140000，而全菌体疫苗抗体滴度仅12000。

4参考文献

[1]王红宁，刘世贵，刘书亮，等.规模化猪场仔猪黄、白痢的防治研究[J].中国预防兽医学报，1999，21（4）：264-267.

[2]王永红，刘兴汉，黄侠芳.肠毒性大肠杆菌菌毛抗原987P和F41的提纯及部分特性分析[J].中国预防兽医学院，1988，40（3）：56-58.

[3]王炯，龚春梅.鸡卵黄抗体理化特性的研究[J].中国生物制品学杂志，1997，10（3）：140-143.

[4]龙中儿，钟青萍，刘活林,等.卵黄免疫球蛋白的稳定性研究[J].中国生物制品学杂志，1997，10（4）：218-220.

[5]李学伍.仔猪大肠杆菌多价卵黄抗体粉的特性及应用[J].中国兽医杂志，2000，26（10）：56-57.

[6]李春晖，郭立君，于洪涛，等.胃蛋白酶对抗轮状病毒IgY活性的影响[J].中国生物制品学杂志，2002，15（1）：45-46.

[7]周壁君，苟万里.仔猪腹泻源大肠杆菌贵州株K88菌毛研究[J].中国预防兽医学报，2000，22（4）：291－296

[8]周德庆.微生物教程[M].北京：高等教育出版社，1993.

[9]范龙彬，杨曜中，俞建瑛，等.卵黄抗体的诱导[J].生物制品学杂志，2000，13（2）；79-81.