鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体研制与应用

摘要：用鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）地方分离毒株ＨＢ９８株经鸡胚连续传５３～６２代适应鸡胚的鸭肝炎病毒作为种毒，制备成弱毒疫苗和灭活疫苗分别免疫伊莎产蛋鸡，经３次免疫后，收获卵黄，测定病毒中和效价可达１０３以上，经３０万只雏鸭临床应用，对未发病的雏鸭预防保护率达９０％以上，发病鸭群治疗保护率达８０％以上。

关键词：鸭病毒性肝炎（Ｄｕｃｋ ｖｉｒａｌ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ， ＤＶＨ）；高免卵黄抗体；研制

中图分类号：Ｓ８５８．３２；Ｓ８５９．７９＋７ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）17－3789-02

Development and Application of Egg Yolk Antibody for DHV

ＹＡＮＧ Ｊｕｎ，ＷＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｌｉｎｇ，ＷＥＮ Ｇｕｏ－ｙｕａｎ，ＬＵＯ Ｌｉｎ，ＬＵＯ Ｑｉｎｇ－ｐｉｎｇ，ＡＩ Ｄｉ－ｙｕｎ，ＺＨＡＮＧ Ｒｏｎｇ－ｒｏｎｇ，

ＳＨＡＯ Ｈｕａ－ｂｉｎ

（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｈｕｂｅｉ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｅｍｂｒｙｏ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，Ｗｕｈａｎ ４３００６４，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ ｍａｓｔｅｒ ｓｅｅｄ ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ５３～６２ ｓｅｒｉａｌ ｐａｓｓａｇｅ ｏｆ ｄｕｃｋ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ （ＤＨＶ） ｓｔｒａｉｎ ＨＢ９８ ｉｎ ｃｈｉｃｋ ｅｍｂｒｙｏ ａｎｄ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ ａｎｄ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ ｏｆ ＤＨＶ． Ｔｈｅ ｅｇｇ ｙｏｌｋ ｗａｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｆｔｅｒ ３ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｓａ ｃｈｉｃｋ． Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｔｉｔｅｒ ｔｅｓｔｅｄ ｗａｓ ａｂｏｖｅ １０３． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｎ ３００ ０００ ｄｕｃｋｌｉｎｇｓ， ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｅｇｇ ｙｏｌｋ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｈｅａｌｔｈｙ ｄｕｃｋｌｉｎｇ ｗａｓ ａｂｏｖｅ ９０％； ａｎｄ ｔｈｅ ｃｕｒｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅｄ ｄｕｃｋｉｎｇ ｗａｓ ａｂｏｖｅ ８０％．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｄｕｃｋ ｖｉｒａｌ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ（ＤＶＨ）； ｅｇｇ ｙｏｌｋ ａｎｔｉｂｏｄｙ； ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ

鸭病毒性肝炎（Ｄｕｃｋ ｖｉｒａｌ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ，ＤＶＨ）是引起小鸭高度致死性、传播迅速的病毒性疾病，主要感染５周龄以内的雏鸭，以２周龄内雏鸭最易感，对新生鸭可导致９０%以上死亡率。病鸭常在出现角弓反张症状后迅速死亡，病理剖检特点为肝脏肿胀与出血。该病是危害养鸭业最严重的疾病之一［１－３］。本试验通过采用分离的鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）地方毒株ＨＢ９８株免疫产蛋鸡制备抗鸭肝炎病毒高免卵黄抗体，用于预防和治疗雏鸭的病毒性肝炎，获得了理想效果。

１ 材料与方法

１．１ 试验材料

鸭肝炎病毒ＨＢ９８株：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所禽病室分离保存。鸭肝炎疫苗：鸭肝炎病毒ＨＢ９８株经鸡胚传５３～６２代，制备活疫苗和灭活疫苗。鸡胚：武汉市新洲种鸡场伊莎种蛋，实验室孵化器孵化８～９日龄用于试验。蛋鸡：武汉市新洲种鸡场90日龄伊莎商品蛋鸡，用于免疫鸭病毒性肝炎疫苗，制备高免卵黄抗体。雏鸭：武汉市春江种鸭场种蛋孵化雏鸭２周龄。

１．２ 高免卵黄抗体的制备与检验

１．２．１ 产蛋鸡的免疫 ９０日龄伊莎蛋鸡用３～５倍量鸭病毒性肝炎活疫苗肌肉注射进行首次免疫，间隔２周再用其灭活疫苗免疫２次（间隔时间为２周），１２０日龄时开始收获鸡蛋，测定卵黄中的病毒中和抗体效价。

１．２．２ 卵黄抗体的制备 收集高免鸡产的蛋，４ ℃保存，分离卵黄，混合后置组织捣碎缸中捣碎，混合物用缓冲盐水（内含不超过０．２％的福尔马林作防腐剂）稀释，分装后置４ ℃保存，有效期为１年。产品按常规方法作无菌检验和效力检验。

１．２．３ 卵黄抗体效价检测（病毒中和试验） 用固定卵黄抗体稀释病毒方法测定鸡胚中的病毒中和指数。将卵黄抗体用灭菌生理盐水作１∶４（Ｖ／Ｖ）稀释，ＤＨＶⅠ型强毒分别作１０－２、１０－３、１０－４倍稀释，将卵黄抗体和病毒液按１∶１混合，２５ ℃中和１ ｈ，同时设不中和的病毒液作对照，对照组和中和组的病毒液每个稀释度分别接种６枚８～１０日龄ＳＰＦ鸡胚，３７ ℃培养，观察９６ ｈ。以１０－３稀释度病毒中和组鸡胚全部存活、对照组鸡胚８０％死亡为合格。

１．２．４ 产品效力检验 参照文献［４］的方法进行。选择２周龄无母源抗体的雏鸭１０只，肌肉注射高免卵黄抗体１．０ ｍＬ，另一组不接种卵黄抗体作对照，２４ ｈ后用１０３ ＬＤ５０ ＤＨＶⅠ型强毒攻击每组雏鸭。如果试验组８０％雏鸭存活、对照组８０％雏鸭发病死亡，则判定产品合格。

１．２．５ 临床应用效果检验 在不同地区、不同日龄的发病雏鸭群紧急注射高免卵黄抗体，２周龄以内雏鸭注射０．５ ｍＬ，２周龄以上雏鸭注射１．０ ｍＬ，注射后１周内观察记录发病死亡情况，同时设不注射卵黄抗体雏鸭作为对照。

２ 结果与分析

２．１ 卵黄抗体的制备与检验结果

２００６～２００７年共制备５批卵黄抗体共４２．４万ｍＬ，免疫产蛋鸡１００只，收集高免蛋１０ ６００枚，经卵黄抗体效价检测和产品攻毒保护效力检测，全部合格（表１）。