葛根―丹参组方配伍对动脉粥样硬化鹌鹑脂质代谢的影响

[摘要] 采用外源性胆固醇和高脂饲料建立鹌鹑动脉粥样硬化（AS）模型，观察葛根-丹参（1∶1）组方配伍对模型动物脂质代谢、肝脏系数及载脂蛋白Apo-A1，ApoB指标等的影响。结果葛根-丹参组方配伍水提物在7.5 g・kg-1和葛根-丹参组方配伍乙酸乙酯部位在2.5～7.5 g・kg-1剂量下，能明显或部分降低AS模型鹌鹑血清TC，TG，LDL-C和VLDL-C的含量，升高HDL-C的含量；降低鹌鹑的肝脏质量和肝脏系数及模型动物ApoB的含量，升高ApoA1的含量，纠正Apo-A 1/ApoB的异常，表明葛根-丹参组方配伍能明显调节脂质代谢的紊乱，该作用可能是葛根-丹参组方配伍抗动脉粥样硬化发生发展的药理学基础。

[关键词] 葛根-丹参组方配伍；动脉粥样硬化；脂质代谢；鹌鹑

[收稿日期] 2013-05-06

[基金项目] 国家自然科学基金项目（81173594）； 四川省应用基础项目（2012JY0025）；四川省中医药管理局应用基础研究项目（2012-F-025）；国家“重大新药创制”科技重大专项（2013ZX09103-002-014）；西南民族大学研究生学位点建设项目（2013XWD-S0703）

[通信作者] 谭睿，教授，博士生导师， Tel：（028）66252318，E-mail：

[作者简介] 顾健，教授，博士生导师， E-mail：

动脉粥样硬化（AS）是诸多心脑血管疾病发生的共同病理基础，随着社会生活水平的提高和生活习惯的改变，AS已成为严重危害人类健康的常见病、多发病，早期防治临床意义显著。葛根-丹参组方来源于《施今墨药对》[1]，由葛根、丹参2味中药材组成，具有活血化瘀、去瘀生新之功效，临床上用于冠心病、心绞痛等心血管疾病的治疗。本研究拟建立鹌鹑AS动物模型，观察葛根-丹参组方配伍对动物模型脂质代谢的影响，为葛根丹参联合用药防治心脑血管疾病提供科学依据。

1 材料

1.1 受试药物 葛根、丹参均购于成都荷花池中药材市场，经西南民族大学民族医药研究院顾健教授鉴定符合《中国药典》2010年版标准。精密称取葛根、丹参各300 g，加10 倍量的75%乙醇提取，回流提取2 次，每次1 h，合并滤液，减压浓缩得浸膏，用乙酸乙酯萃取3次，浓缩成生药1 g・mL-1，得葛根-丹参组方配伍乙酸乙酯提取物；称取葛根、丹参各100 g，加10倍量水回流提取2次，每次1 h，合并滤液，减压浓缩成生药1 g・mL-1，得葛根-丹参组方配伍水提取物，备用。

1.2 动物 朝鲜种鹌鹑，雄性，体重（100±10） g，6周龄，成都新津万新鹌鹑养殖专业合作社订购。

1.3 药品、试剂及仪器 辛伐他汀片（杭州默沙东制药有限公司，批号110737）；胆固醇（成都市科龙化工试剂厂，批号20120409）；猪胆酸钠（北京奥博星生物技术有限责任公司，批号120422）；丙硫氧嘧啶（北京嘉林药业股份有限公司，批号20110812）；总胆固醇、甘油三酯、载脂蛋白A1和B、低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒（均为四川迈克生物科技股份有限公司）。SN-3001酶标仪（Thermo Formo 公司）。

2 方法

2.1 高脂饲料的制备 参照徐淑云造模方法[2]，猪油15%、胆固醇5%、猪胆酸钠0.2%、丙硫氧嘧啶0.1%，其余为基础饲料。

2.2 AS模型的制备及分组 朝鲜种鹌鹑70只，分为正常组、模型组、辛伐他汀组、葛根-丹参组方配伍乙酸乙酯部位7.5，5.0，2.5 g・kg-1剂量组和葛根-丹参组方配伍水提物7.5 g・kg-1剂量组，每组10只。各组鹌鹑按设计剂量灌胃给药，每日1次，连续16周，实验期间除正常组给予基础饲料外，其余各组鹌鹑均同步给予高脂饲料每天每只20 g，建立鹌鹑动脉粥样硬化模型。

2.3 鹌鹑的一般常规观察 实验期间定期观察并记录鹌鹑的日常状况，包括体质量、食欲、饮水、活动、皮毛、粪便以及精神状况等。

2.4 对脂质代谢的影响 第16周末次给药后1 h（禁食不禁水8 h），鹌鹑颈静脉取血，3 000 r・min-1离心10 min，分离血清，按试剂盒测定说明书分别测定血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白A1（ApoA1）和载脂蛋白B（ApoB）的含量，并依据上述测定值分别计算极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）的含量和动脉粥样硬化因子TC/HDL-C，TG/HDL-C，HDL-C/LDL-C及载脂蛋白ApoA1/ApoB的比值。

VLDL-C=TG×0.453

2.5 对肝脏系数的影响 鹌鹑取血后，立即处死，取出肝脏组织，滤纸拭擦，称重，计算鹌鹑的肝脏系数。

肝脏系数=肝脏质量/体重×100%

2.6 统计学方法 采用SPSS进行统计分析，计量资料以±s形式表示，t检验分析。

3 结果

3.1 鹌鹑的一般常规观察 造模16周后，除正常组外，其余各组动物均部分出现行动稍显迟钝，目光呆滞，进食、饮水量略有减少，粪便异常，拉稀，粪便浅绿色，但毛羽色泽更加亮丽、光滑。各组动物的体质量均有所增长，但组间无显著差异（表1）。

表1 葛根-丹参对动脉粥样硬化鹌鹑模型体重的影响（±s，n=10）

Table 1 The effects of combination of Puerariae Lobatae Radix and Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma on weight in atherosclerotic quails（±s，n=10）

3.2 对动脉粥样硬化鹌鹑脂质代谢的影响 与正常组比较，经高脂饲料饲养鹌鹑16周后，模型组鹌鹑血清TC，TG，LDL-C，VLDL-C的含量明显升高， HDL-C的含量明显降低，模型组鹌鹑表现出明显的脂质代谢紊乱。与模型组比较，葛根丹参组方配伍后，无论乙酸乙酯部位还是水提物，均能明显或部分降低大鼠血清TC，TG，LDL-C和VLDL-C的含量，升高HDL-C的含量（均P

3.3 对动脉粥样硬化鹌鹑模型动脉粥样硬化因子的影响 与正常组比较，模型组大鼠动脉粥样硬化因子TC/HDL-C，TG/HDL-C和LDL-C/HDL-C均明显升高。与模型组比较，葛根丹参组方配伍后，无论乙酸乙酯部位还是水提物，均能明显降低动脉粥样硬化因子TC/HDL-C，TG/HDL-C和LDL-C/HDL-C（均P

3.4 对动脉粥样硬化鹌鹑载脂蛋白的影响 与正常组比较，模型组载脂蛋白ApoA1的含量及其ApoA1/ApoB明显降低，ApoB的含量明显升高，表明模型动物存在着明显的脂质代谢紊乱。与模型组比较，葛根-丹参组方配伍后，无论乙酸乙酯部位还是水提物，均能明显降低ApoB的含量，升高ApoA1的含量，纠正ApoA1/ApoB的异常（均P

Table 2 The effects of combination of Puerariae Lobatae Radix and Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma on lipid metabolism in atherosclerotic quails（±s，n=10）

表3 葛根-丹参对动脉粥样硬化鹌鹑模型动脉粥样硬化因子的影响（±s，n=10）

Table 3 The effects of combination of Puerariae Lobatae Radix and Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma on atherosclerosis factors in atherosclerotic quails（±s，n=10）

表4 葛根-丹参组方配伍对鹌鹑载脂蛋白的影响（±s，n=10）

Table 4 The effects of combination of Puerariae Lobatae Radix and Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma on apolipoprotein in atherosclerotic quails（±s，n=10）

3.5 对动脉粥样硬化鹌鹑肝脏系数的影响 与正常组比较，模型组肝脏肿胀明显，肝脏质量和肝脏系数明显增加。与模型组比较，葛根-丹参组方配伍后，无论乙酸乙酯部位还是水提物，均能明显降低鹌鹑的肝脏质量和肝脏系数（均P

4 讨论

现已公认，AS的形成是由于各种损伤因素，尤其脂质的浸润，大量脂质过氧化物产生，作用于血管

表5 葛根-丹参对动脉粥样硬化鹌鹑模型肝脏系数的影响（±s，n=10）

Table 5 The effects of combination of Puerariae Lobatae Radix and Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma on liver index in atherosclerotic quails（±s，n=10）

内皮细胞，导致内皮细胞功能障碍并进一步表达和释放各种活性物质及黏附分子共同参与的慢性炎症过程[3]。在AS整个发病过程中，脂质代谢的紊乱和血管内皮细胞的功能损伤是AS发生发展过程的关键环节[4]。血脂TC转运进入细胞，依靠载体LDL，而LDL来源于VLDL的异化代谢和脏合成分泌，是AS发生的重要启动因子；相反，HDL是血浆中颗粒最小的脂蛋白，负责运载胆固醇于肝脏中代谢为胆汁酸经胆道-肠道排出体外，参与修复血管内皮细胞，维持内皮细胞正常形态功能，是重要的抗AS因子，与AS的发生呈负相关。通过本实验研究发现，葛根-丹参组方配伍能不同程度的降低血清中TC，TG，LDL-C，VLDL-C含量，升高血清中HDL-C含量，显示出一定的调节脂质代谢作用。同时，TC/HDL-C，TG/HDL-C和LDL-C/HDL-C比值的变化是动脉粥样硬化发生发展的独立危险因子，更能反映机体脂质代谢综合水平，也更能正确反映动脉粥硬化风险[5]。本实验研究表明葛根-丹参组方配伍还能明显降低动脉粥样硬化因子TC/HDL-C，TG/HDL-C和LDL-C/HDL-C，纠正其比值的紊乱，显示出较强的抗动脉粥样硬化作用。此外，载脂蛋白Apo是运载脂类物质及稳定脂蛋白结构重要物质，Apo较HDL，LDL和VLDL变化更易反映脂质代谢的紊乱[6]。ApoA1被认为是胆固醇的重要接受体， 在胆固醇逆转运过程中起到重要作用，而该逆转运是有利于外周细胞正常的胆固醇水平及清除细胞中过量的胆固醇[7]。因此，本实验研究结果表明，葛根-丹参组方配伍能明显降低ApoB的含量，升高ApoA1的含量，纠正ApoA1/ApoB的异常。综上所述，葛根-丹参组方配伍在抗动脉粥样硬化方面具有确切的临床意义，药物在2.5～7.5 g・kg-1剂量下能明显减少脂质沉积和脂质过氧化物的产生，调节脂质代谢紊乱，有效地阻止AS的发生和发展。

[参考文献]

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[4] 刘颖琳，刘耕陶.血管内皮细胞炎症反应与动脉粥样硬化的关系对药物研究的启示[J].中国药理学通报，2001，17（4）：361.

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Effects of combination of Puerariae Lobatae Radix and Salviae Miltiorrhizae

Radix et Rhizoma on lipid metabolism in atherosclerotic quailsGU Jian， LI Jia-chuan， TAN Rui， FAN Li-na， ZHANG Xin

（1.Institute of National Medicine， Southwest University for Nationalities， Chengdu 610041， China；

2.School of Life Science and Engineering， Southwest Jiaotong University， Chengdu 610031， China） [Abstract] In present study， cholesterol/high fat diet-induced atherosclerotic quails were used to evaluate the effects of combination of Puerariae Lobatae Radix and Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma （1∶1， abbreviated as PRSM） on lipid metabolism， liver index， apolipoprotein levels.The results obtained from this study indicated that oral administration of ethyl acetate extract of PRSM at doses of 7.5， 5.0， 2.5 g・kg-1 as well as aqueous extract of PRSM at dose of 7.5 g・kg-1could reduce the serum cholesterol （TC）， triglycerides （TG）， low density lipoprotein cholesterol （LDL-C） and very low density lipoprotein cholesterol （VLDL-C） levels as well as the weight of liver and liver index， and increase the serum level of high density lipoprotein cholesterol （HDL-C）.Furthermore， reduced levels of apolipoprotein B （ApoB） and elevated levels of apolipoprotein A1 （ApoA1） were observed in ethyl acetate extract and aqueous extract of PRSM treated atherosclerotic quails.All results demonstrate that PRSM possess a regulatory role on lipid metabolism disorders in atherosclerotic quails， which may be the pharmacological basis of PRSM for preventing the development of atherosclerosis.

[Key words] combination of Puerariae Lobatae Radix and Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma； atherosclerosis； lipid metabolism； quail

doi：10.4268/cjcmm20132228