HPLC 测定葛根提取物中葛根素的含量

【摘 要】目的：建立高效液相色谱法测定葛根提取物中葛根素含量[1]。方法：色谱柱为Agilent tc C18（250×4.6mm，5?m）；以甲醇-水（25：75）为流动相；流速：1.0ml/min，柱温35℃；检测波长：250nm 进行实验。结果：线性回归方程为Y=-1.444549637+4148.570716X，相关系数γ=0.999999，葛根素在0.0204μg～0.4080μg 范围内呈良好线性，平均回收率为99.98% RSD=0.02%（n=6）。结论：本方法准确度高，稳定性、重现性好，适用于葛根提取物中葛根素的含量测定。

【关键词】葛根提取物；葛根素；含量测定；hplc法

【中图分类号】R284 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）04-0695-02

葛根是豆科植物野葛或甘葛藤的干燥根[1]。葛根含有多种有效成分，主要为异黄酮成分如葛根素、大豆甙、大豆甙元等[2]。有关研究表明，葛根素能降低心肌耗氧量，使冠脉血管血流量增加，明显缓解心绞痛，对视网膜动脉和静脉阻塞、突发性耳聋、冠心病、高血压都有较好疗效[3]。因此，目前葛根素被大量用于注射液及降血压药物，也是保健食品的重要原料。随着葛根素药理作用研究的深入，对其质量的研究逐渐增多，尤其是含量测定的方法研究。本实验建立的葛根素HPLC含量测定方法，经系统的方法学研究，结果方法灵敏，简便，可靠，可作为该提取物的内在质量控制方法。

1 仪器与材料

1.1 主要仪器及设备

Agilent 1100高效相色谱仪，FA-1004N 型电子分析天平。

1.2 试剂与样品

样品：由厂家提供；葛根素对照品（含测用）：中国药品生物制品检定所提供，批号110752-200511；甲醇（色谱纯）；其它试剂均为分析纯；纯化水，实验室自制。

2 测定方法

2.1 色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水（25：75）；流速：1.0ml/min，柱温35℃；检测波长：250nm；进样量：10μl；理论板数按葛根素峰计算应不低于4000。

2.2 对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加30%乙醇制成每1ml中含20?g的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备：取葛根提取物约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，称定重量，超声处理（250w，33kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加30%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

3 方法学考察

3.1 色谱条件

5 讨论

5.1 本品在测定过程中并未考察多种药材产地葛根提取物含量，如需确定葛根提取物中葛根素含量测定限度，制定内控标准，应考虑此项因素。

5.2 实验过程中，曾考察过以甲醇-水（25∶75）、甲醇-水-醋酸（25：75：0.1）、甲醇-水-醋酸（25∶75∶1）为流动相，其中以甲醇-水（25∶75）配制简便，不损伤色谱柱，分离效果较其它无显著差异，故选择此条件为HPLC测定葛根素的流动相。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010 年版2 部）[S]，化学工业出版社，北京，2010：312.

[2] 白海波，李波，宋子荣.葛根提取工艺研究[J]，中国实验方剂学杂志，2002，8（6）：14-15.

[3] 李石生，邓京振等.野葛根藤茎化学成分研究[J]，中草药，1999，30（6）：30-32.