PDTC影响骨肉瘤U-2 OS细胞凋亡的研究

150040哈尔滨医科大学第三附属医院

摘 要 目的：观察在NF-KB抑制剂PDTC诱导骨肉瘤细胞发生凋亡的过程中，NF-KB活性抑制后，Livin和aspase-3表达水平变化。方法：以不同浓度（0、50、100、200、400 μmol/L）PDTC作用于骨肉瘤U-2 OS细胞不同时间（24小时，48小时）后，采用MTT法和流式细胞仪测定U-2 OS细胞凋亡，采用Western Blot检测U-2 OS细胞Livin和caspase-3蛋白表达。结果：①不同浓度PDTC作用24小时、48小时后对U-2 OS细胞生长有明显抑制作用，并呈时间、剂量依赖性。②50、100、200和400μmol/L PDTC作用24小时后的凋亡率与对照组相比差异有显著性，且各浓度组之间差异均有显著性（P＜0.01）。③PDTC作用于U-2 OS细胞后可降低Livin蛋白的表达，增加caspase-3蛋白表达，呈现剂量依赖性。结论：PDTC可明显抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞，并使细胞周期受到阻滞，进一步诱导肿瘤细胞凋亡，抑制细胞与诱导凋亡呈剂量依赖关系。

关键词 PDTC 骨肉瘤细胞 细胞凋亡

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2011.04.092

资料与方法

一般资料：细胞株人骨肉瘤U-2 OS细胞购自北京金杉生物有限公司。

实验方法：以不同浓度（0、50、100、200、400 μmol/L）PDTC作用于骨肉瘤U-2 OS细胞不同时间（24小时，48小时）后，①采用MTT法测定其PDTC对U-2 OS细胞的抑制率;②采用流式细胞仪测定U-2 OS细胞的凋亡情况；③采用Western-blot法检测U-2 OS细胞Livin和caspase-3蛋白的表达情况。

结 果

不同浓度PDTC作用24、48小时后对U-2 OS细胞生长有明显抑制作用，并呈时间、剂量依赖性。

流式细胞仪的结果：50、100、200和400μmol/L PDTC作用24小时后的凋亡率分别为（7.18±0.98）%、（14.23±1.22）%、（21.03±1.68）%、（26.95±2.09）%，与对照组（2.76±0.45）%相比，差异有显著性，且各浓度组之间差异均有显著性（P＜0.01）。100μmol/L PDTC作用24、48小时后的凋亡率分别为（9.16±1.33）%、（15.23±1.96）%，与对照组（3.12±0.63）%相比，差异有显著性，且各时间组之间差异也均有显著性（P＜0.01）。

Westem Blot法分析：PDTC作用于U-2 OS细胞后可降低Livin蛋白的表达，增加caspase-3蛋白的表达，呈现剂量依赖性。且Livin的表达与PDTC的作用以及骨肉瘤细胞凋亡率呈剂量负相关，与caspase-3的表达也呈剂量负相关。

讨 论

研究表明，PDTC可明显抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞，并使细胞周期受到阻滞，进一步诱导肿瘤细胞凋亡，从而发挥抗肿瘤作用。抑制细胞与诱导凋亡呈剂量依赖关系。实验证明，在诱导U-2 OS细胞凋亡过程中，Livin表达水平与NF-kB抑制剂PDTC的作用以及骨肉瘤细胞凋亡率呈剂量负相关，与Caspase-3的表达水平也呈负相关。国内外的相关研究报道得知NF-kB表达和caspase-3的表达呈负相关。但是Livin、NF-kB之间的作用机制还不明确，需要进一步研究【sup】［1，2］【/sup】。

参考文献

1 Reed JC.Apoptosis-based therapies［J］.Nat Rev Drug Dis,2002,l:111-121.

2 Lopes RB,Gangeswaran R,Mcneish IA,et al.Expression of the IAP protein family is dysregulated in pancreatic cancer cells and is important for resistance to chemotherapy ［J］.Internat J Cancer,2007,120（11）:2344-2352.