香蕉和土壤中戊唑醇和咪鲜胺的HPLC分析

摘要：采用高效液相色谱-紫外检测器的方法对香蕉全蕉、蕉肉和蕉园土壤中的戊唑醇和咪鲜胺进行检测。结果表明，该方法检出限为0.02 mg/kg，平均回收率为81%～115%，相对标准偏差为1.7%～10.0%。

关键词：戊唑醇；咪鲜胺；香蕉；土壤；液相色谱

中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）12-2909-02

Analysis of Tebuconazole and Prochloraz in Banana and Soil by HPLC

LIN JING-ling，HAN Bing-jun，ZHANG Yue

（Analysis and Testing Center， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences， Haikou 571101， China）

Abstract： The residue of tebuconazole and prochlora in banana and soil was detected by HPLC-UVD. The lowest detection limits of was 0.02 mg/kg. The average recovery was in the range of 81%～115%. The relative standard deviation was 1.7%～10%.

Key words： tebuconazole； prochlora； banana； soil； HPLC

戊唑醇（Tebuconazole）和咪鲜胺（Prochloraz）均为广谱性杀菌剂，戊唑醇主要抑制甾醇的脱甲基化[1-3]，咪鲜胺主要抑制病原真菌体内麦角甾醇生物合成[4，5]，二者均可防治香蕉叶斑病。该试验通过乙腈提取，NH2固相萃取小柱净化，采用高效液相色谱-紫外检测器法对2种杀菌剂进行定量分析，并通过香蕉和香蕉园土壤的加标分析为客观评价上述杀菌剂的残留水平提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

香蕉样品、土壤样品均采集自海南省海口市秀英区永庄村绿晨香蕉基地。

咪鲜胺（1 mg/mL，农业部环境保护科研监测所），戊唑醇（1 mg/mL，农业部环境保护科研监测所），使用时稀释至相应浓度；甲醇（分析纯、色谱纯），乙腈、二氯甲烷（分析纯），氯化钠（140 ℃烘烤4 h）等，NH2固相萃取小柱（500 mg/6 mL）。

1.2 主要仪器

Waters液相色谱仪（2487紫外检测器、1525二元梯度泵和717自动进样器）、电子天平、搅拌机、匀浆机、漩涡混匀器、振荡器、旋转蒸发仪等。

1.3 方法

1.3.1 香蕉样品前处理 称取20.00±1.00 g样品置于高型烧杯中，加入40 mL乙腈，2 000 r/min匀浆2 min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5～7 g氯化钠的100 mL具塞量筒中，收集滤液40 mL左右，盖塞，剧烈振荡2 min，室温静置30 min，待乙腈相和水相分层，准确吸取上清液10.00 mL于100 mL圆底烧瓶中，减压浓缩（40 ℃）至干，加5.0 mL丙酮-二氯甲烷（95∶5，V/V，下同）混合液，待净化。

1.3.2 土壤样品前处理 称取20.00±1.00 g样品于200 mL具塞锥形瓶中，加入40.0 mL乙腈，往复振荡2 h，滤纸过滤，收集滤液于10 mL过饱和氯化钠溶液的100 mL具塞量筒中，收集滤液约40 mL，盖塞，剧烈振荡2 min，室温静置30 min，待乙腈相和水相分层，准确吸取上清液10.00 mL于100 mL圆底烧瓶中，减压浓缩（40 ℃）至干，加5.0 mL丙酮-二氯甲烷（95∶5）混合液，待净化。

1.3.3 净化 NH2固相萃取小柱用5.0 mL丙酮-二氯甲烷（95∶5）预淋洗，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用100 mL圆底烧瓶收集，以5.0 mL丙酮-二氯甲烷（95∶5）冲洗圆底烧瓶残留物，淋洗NH2小柱，重复3次，收集液减压浓缩（40 ℃）至干，用2.50 mL乙腈定容，过0.22 μm有机滤膜，待测。

1.3.4 液相色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱（150 mm×4.60 mm，5 μm），柱温40 ℃，检测波长220 nm， 进样量：10 μL，流动相见表1。

2 结果与分析

2.1 检测波长的选择

综合考虑戊唑醇和咪鲜胺在紫外光区的最大吸光度，以及杂质的干扰情况，确定检测波长为220 nm。戊唑醇和咪鲜胺标准样品的HPLC谱图见图1。

2.2 分析方法的线性相关性

采用外标法峰面积定量。用乙腈配制戊唑醇、咪鲜胺标准贮备液，用乙腈逐级稀释配制成0.020、0.200、1.000、2.000、4.000 mg/L标准系列浓度，进样量10 μL。在上述条件下注射标准工作系列溶液，绘制标准曲线，戊唑醇保留时间为8.344 min，回归方程y= 2.94×104x-1.87×103（r2=0.997 0）；咪鲜胺保留时间为9.680 min，回归方程y=3.99×104 x-1.89×103（r2=0.997 2），结果表明，在上述浓度范围内，仪器响应值与进样量呈良好的线性关系。

2.3 方法学分析

采集未施药的香蕉和土壤样品，添加3个水平的戊唑醇和咪鲜胺标准溶液（0.020、0.050、5.000 mg/kg），每个浓度水平设5个平行。测定这两种杀菌剂在香蕉（全蕉、蕉肉）和土壤中的添加回收率，结果见表2、表3和图2、图4。戊唑醇在全蕉中的回收率为95%～106%，相对标准偏差5.6%～9.3%，在蕉肉中的回收率为84%～104%，相对标准偏差6.5%～10%，在土壤中的回收率为97%～114%，相对标准偏差2.9%～5.7%；咪鲜胺在全蕉中的回收率为86%～103%，相对标准偏差3.8%～7.7%，在蕉肉中的回收率为81%～96%，相对标准偏差3.8%～10.0%，在土壤中的回收率为87%～115%，相对标准偏差1.7%～7.1%。结果表明，该方法的准确度和精密度符合农药残留试验准则要求。

3 结论

本试验通过高效液相色谱法测定了戊唑醇和咪鲜胺在香蕉和土壤中的残留量，方法回收率和相对标准偏差均符合要求，且线性关系良好，目标物质与样品中的杂质分离完全。该法准确、快速、灵敏度高，可满足农药残留检测分析的要求。

参考文献：

[1] 王向阳，段劲生，刘 伟，等.25%戊唑醇水乳剂防治桃褐腐病田间药效试验[J].现代农业科技，2010（2）：181-182.

[2] 张金树.2%戊唑醇湿拌种剂防治玉米丝黑穗病药效试[J].湖北农业科学，2005（6）：52-53.

[3] 张 舒，汪光友，吕 亮，等.八种药剂对水稻稻曲病的防效和增产作用[J].湖北农业科学，2012，51（19）：4260-4262.

[4] 赵善欢.植物化学保护[M].北京：中国农业出版社，2001.

[5] 陈 平，柳训才.咪鲜胺的应用概况及其残留检测研究[J].湖北农业科学，2007，46（3）：478-480.