“”花的组织培养产业化生产

摘要：本文阐述了“”花的产业化生产；培养技术及管理，通过实际实验操作，有效的提高了养殖技术。根据文章的中叙述到的技术，作者也是进行分析和探讨。

关键词：“”花；组织培养；产业化

“”花，株型优美，叶色浓郁，花大色艳，花大如茶花，直径可达10cm，兼有月季，牡丹等花的特色。自问世以来得到了很多专家和学者的好评，其市场潜力十分巨大，为了使其尽快面向市场，我们对它的组培快繁以及它的产业化进行了研究，建立了科学的工艺流程。现介绍如下：

1、材料与方法

①材料

选用健壮植株上的嫩叶和嫩茎段作为外殖体。

②方法

1）外殖体处理，在取材之前15d左右，把母株放在温室内，不要往叶面上喷水。在接种前选择健壮的植株上的嫩叶和嫩茎段剪下，放入广口瓶，加入少量洗衣粉，然后用自来水冲洗20min-60min。在无菌室内用70%的乙醇灭菌3s-5s，用无菌水冲洗3-5min，接着用0.1%的升汞浸泡5-8min，在用无菌水冲洗4-5次，将灭过菌的外殖体放在灭过菌的纸上，剪成1cm左右的小块。接种到灭过菌的培养基上，每个瓶只接一个外殖体。

2）培养条件，诱导分化培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+糖25g/L+琼脂6.0g/L。PH值5.8左右，光照强度1200lx左右，光照时间10-12h/d，培养温度20-25℃。

3）在增值阶段，选用分化较好的瓶苗，用单因子试验和对照实验并以增殖倍数为指标来选出最适增殖激素组合。

4）在反复继代之后，采用单因子试验，并以生根数量、长度、生根率为指标来确定最适生根激素组合。

5）在移栽阶段，我们通过实验选出适用于生产的最适炼苗方法，最适移栽基质组合，最适基质消毒法，最适移栽方式，以提高成活率。

6）在移栽后小苗的管理阶段，我们通过对小苗温度、湿度、水、肥料等各个方面的控制调控及管理，使其能够得到较好的生长环境。

2、结果与分析

2.1诱导分化

无菌外殖体接入诱导培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAAmg/L+糖25g/L+琼脂6.0g/L上，经21-28d的培养，外殖体首先形成愈伤组织随后分化出从生芽和小叶。

2.2快速繁殖

在获得较好的分化瓶苗之后，能否在较短的时间内增加无菌苗的数量，是产业化成功的关键，因此必须确定增殖的激素组合。为此我们先后接种240瓶，作了实验1、2如表一、二所示，以选出最适增殖激素组合。

1）实验1我们从表一的结果可以看出，增殖倍数随着6-BA浓度升高而增加，随NAA浓度增加而减少，而成苗率则随6-BA浓度的升高而降低，随NAA浓度的增加而升高，最后确定增值在6-BA0.5-1.0之间较好，NAA在0.1时成苗率最高。

2）通过实验2的对照实验，结果显示，KT在增殖方面略差与6-BA，同浓度的两种激素，例如：实验中做的KT0.5mg/L+NAA0.1mg/L与6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，两配方相比，成苗率都较好，但是KT的增殖倍数小于BA。

3）通过这两组实验，我们最后确定，“”花可以用MS+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1mg/L+糖25g/L+琼脂6.0g/L作为增殖配方。

以上两实验都以MS为基本培养基，30d后统计结果。

2.3生根实验

在获得健壮的瓶苗后，能否在尽可能短的时间使其生根，是“”走向产业化的又一关键步骤，因此必须确定最适生根激素组合。为此我们先后接种120瓶做实验3，如表三所示，以选出最适生根激素组合。

此实验为25天后统计结果

1）由表三可以看出，生根率在各浓度的生长素中差异不大，根大多为气生根，根多而短，在单生长素中以IBA0.5生根最佳生根率达91%。

2）由表三我们还可以看出NAA，IBA两生长素搭配后的效果明显强于单生长素的效果，其中以IBA0.5mg/L+NAA0.2mg/L较突出，在第九天便有生根表现。

3）通过比较分析，我们认为将IBA，NAA搭配作为生根配方能取得较好的效果。

2.4移栽实验

“”花的试管苗是在营养充足，温湿度适宜的情况下繁育出来的，组织十分幼嫩，抗逆能力差。因此，要成功的栽培这些苗是一项技术性很强的工作，稍有疏忽，就会导致大量死苗，要提高成活率，要注意以下几个环节。

1）在栽培过程中，基质的选择是影响其成活的非常重要的因素，为选出最适的基质组合，我们移苗达300余棵，做实验4，如表四、五所示，以选出最佳基质组合。

此实验为6个时间所观察成活率的结果（%）

①试管苗移栽30天后，由表四可以看出在单用蛭石，珍珠岩以及加入少量泥炭的三种基质的混合物中效果最好，成活率可达85%以上，其中一珍珠岩：蛭石：泥炭=3：3：1效果最好，成活率可达91.2%。而在含泥炭较多的基质组合中，成活率则较低，其中最显而易见的是单用泥炭的基质成活率较低，成活率仅为42.1%。从移栽后不同天数的成活率来看，在单用珍珠岩，蛭石以及加入少量的泥炭的三者混合物的基质中，死亡的高峰期是在10d-20d之间，在25天之后，试管苗的成活情况以稳定，成活率也较高。而加入泥炭较多的基质中在前25天皆有不同程度的死亡，在25天之后，成活情况也趋于稳定。

表5

②由表五我们可以看出，在不同实验基质中试管苗的株高并无太大差异，在单用蛭石，单用珍珠岩，以及加入少量泥炭的基质中试管苗生根数量多，长度大，显著高于其它基质。从试管苗的叶色及生长势来看，在蛭石中试管苗生长良好，叶色浓绿，生长健壮，这对以后的扦插繁殖非常有利。而在有较多珍珠岩的基质中试管苗发黄且生长势较弱，这是因为珍珠岩是火山炭岩高温发泡而成，通气性极好但不具保水能力，且比重轻对根的吸性较差，不利根系吸收水分养分。而加入泥炭较多的基质中，由于通气性不很理想，所以效果也不好。而在加入少量泥炭的三者的混合物中，效果非常好，生长健壮，叶色浓绿。

2.4.1炼苗

试管苗的移栽成活与叶片特性有关。试管苗叶片小而薄，表面蜡质少蒸腾速率，净化速率低，气孔对环境的变化反应较慢。正常的叶片在低湿环境下立即关闭气孔，而试管苗的气孔关闭速度慢，所以试管苗移栽后，幼苗死亡率高。而经过炼苗驯化可以改变试管苗保卫细胞的一些特性，使气孔适应环境的能力加强，从而提高成活率。针对以上的问题，我们对“”花炼苗的方式及时间进行了研究。（1）：在驯化室内炼苗，分别闭瓶3天、7天、10天，开瓶3天。（2）：在大棚内直射阳光下，盖上遮荫网，分别闭瓶3天、7天、10天，开瓶3天。通过两组实验我们对“”花的长势情况及炼苗期间的污染情况调查研究发现，“”花闭瓶从室内移至大棚内的直射阳光下，并盖上遮荫网，闭瓶炼苗7天，然后打开瓶盖炼苗3天，效果最好，苗子的长势较好，污染效率较低。所以我们应该很好的把握炼苗的时间。炼苗的时间太短，苗的长势弱，会导致移栽的成活率低。而时间太长，易使培养基感染，造成试管苗在培养瓶内死亡。

2.4.5移栽

在移栽过程中，我们采用了“二步法”移栽。

第一步：当试管苗高大2-3cm，且长出3-4条0.5cm-1.0cm的新根时，便可进行移栽。在移栽之前，先用前面我们选好的方法进行炼苗、基质的消毒等工作，其后从瓶中轻轻的取出小苗，然后经过筛选后，用2‰的高锰酸钾消毒约5-10min或用500倍的可湿性多菌灵溶液浸泡半小时，然后栽入已选好且灭过菌的基质中，然后搭上小拱棚，使光照强度保持在5000-10000lx以内、温度15-30℃、湿度40%-60%，每周喷10%的1/2MS营养液。

第二步：在两周后逐渐打开小拱棚，增加光照，四周后便可进行常规管理。

由于瓶苗非常幼嫩，脆性大，从培养瓶中取苗到移栽的过程中一定要注意不要损伤茎、叶柄、根系。用前面的方法，我们先后移苗5批，合计1500棵，成活率已达91.5%，而且苗子生长健壮。我们还通过实验证明，即使没有生根的试管苗移栽也能成活，但成活率相对较低。

3、结论

“”花是一种极具市场潜力的花卉，但是却迟迟不能面向大众，咎其原因是传统的扦插繁殖法不仅繁殖系数低，而且扦插繁殖往往携带病菌，会引起它的退化，极大的影响了观赏价值。我们用组织培养的方法，不仅解决了上面的问题，而且通过以上的工作，使得“”花的生产达到了产业化的水平。我们已经通过这些程序获得生长健壮的移栽苗2000多棵。相信在不久的将来，“”花的产业化将会带来极好的经济效益，也会给我们的社会和很多家庭增添一道美丽的风景。