冬凌草甲素、迷迭香酸在冬凌草植株内空间积累的动态规律

【摘要】(Henan College of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450008, China) [Abstract] Objective: To explore the content of oridonin and rosmarinic acid in the leaves and ...

[摘要] 目的:揭示冬凌草甲素、迷迭香酸在冬凌草植株内空间积累的动态规律。方法:用高效液相色谱法测定冬凌草甲素、迷迭香酸的含量。结果:在同一株植物内,从上到下随着叶位及节间的降低,冬凌草甲素、迷迭香酸的含量也逐渐降低。结论:本结果为确定冬凌草的最佳采收部位提供了依据。

[关键词] 冬凌草;冬凌草甲素;迷迭香酸

[中图分类号] R282[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2009)07(c)-005-02

Study on the dynamics of spatial accumulation of oridonin and rosmarinic acid of rabdosia rubesens (Henmsl.) Hara

SU Xiuhong, LI Xueju, DONG Chengming, WANG Weili

(Henan College of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450008, China)

[Abstract] Objective: To explore the content of oridonin and rosmarinic acid in the leaves and stem of rabdosia rubesens (Henmsl.) Hara at different leaves and stem positions. Methods: The content of oridonin and rosmarinic acid was determined by HPLC. Results: The content of oridonin and rosmarinic acid declined from top to bottom with the decrease of leaves and stem growth in the same plant. Conclusion: The results may provide references of the best fractions for collecting the rabdosia rubesens (Henmsl.) Hara.

[Key words] Rabdosia rubesens (Henmsl.) Hara; Oridonin; Rosmarinic acid

冬凌草[rabdosia rubesens (Henmsl.) Hara]为唇形科香茶菜属多年生植物,分布于我国河南、山西、陕西、贵州等地,其地上部分因含二萜类化合物(冬凌草甲素、冬凌草乙素)和多酚类化合物[1-3](迷迭香酸)而具有抗癌、抗菌作用[4-7]等。对于冬凌草的入药部位,民间习惯用其草质茎叶,或单用叶入药,文献记载也不一致,《中华人民共和国卫生部药材标准》中冬凌草以“干燥叶及地上部分”入药,其他文献记载冬凌草多以“干燥地上部分”入药[8]。据报道,冬凌草甲素及迷迭香酸在冬凌草叶中含量最高,其次为其草质茎中[9]。但因冬凌草为多年生半灌木植物,其地上部分往往可高达70~90 cm,其不同部位的叶子及茎间因所处位置不同,可能会导致其接受光照程度及其他生态因子的不同,从而最终导致次生代谢产物含量的差异。前人对冬凌草的研究主要侧重于其化学成分和药理、药效等方面[10]。到目前为止,有关其不同叶位及不同节间中主要次生代谢产物积累的规律尚未见相关报道。因此,本研究对冬凌草中的有效成分冬凌草甲素及迷迭香酸在不同叶位及不同节位的积累规律进行研究,以期为冬凌草的合理采收与生产及合理用药提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

采自河南中医学院药用植物园内,经河南中医学院董诚明教授鉴定为唇形科植物碎米桠。选择生长健壮的植株进行采样,采样时,从每株的东、南、西、北4个方位分别采取4个枝条,共采集5株。因心叶太小,故未进行采集,采集后将枝条自上而下分为第1对叶、第2对叶、第1节茎、第2节茎等依次类推(注意叶子采集时心叶除外,茎主要采取节间部分)。采集时间为2007年6月15日。

1.2 次生代谢产物(冬凌草甲素、迷迭香酸)测定

1.2.1 样品的处理取各叶位的冬凌草叶片及各节冬凌草茎间,置于烘箱中,80℃烘至恒重,用研钵研成粉末。精密称定粉末0.25 g,置于50 ml三角瓶中,每次加甲醇溶液20 ml,超声提取30 min,提取2次,合并滤液,回收溶剂,用甲醇溶液溶解残渣,定容于5 ml容量瓶中,用0.45 μm微孔滤膜过滤,备用。

1.2.2 色谱条件

1.2.2.1 冬凌草甲素的测定日本岛津LC-20A,色谱柱:ODS C18柱(4.6 mm×250 mm);流动相:甲醇-水(55∶45);检测波长:238 nm;流速:0.8 ml/min;柱温:30℃。

1.2.2.2 迷迭香酸的测定日本岛津LC-20A,色谱柱:ODS C18柱(4.6 mm×250 mm);流动相:甲醇-0.5%磷酸水溶液(40∶60);检测波长:335 nm;流速:1.0 ml/min;柱温:25℃。

1.2.3 标准曲线的制备精密吸取冬凌草甲素对照品溶液5.0,7.5,10.0,12.5,15.0,17.5 μl,分别测定峰面积,以峰面积Y对对照品X(μg)进行线性回归,得冬凌草甲素的回归方程:Y=1 009 010.26X+774 167.61,r=0.998 9,冬凌草甲素在5.70～19.95 μg时进样量与峰面积线性关系良好。

精密吸取迷迭香酸对照品溶液5.0,7.5,10.0,12.5,15.0, 17.5 μl,分别测定峰面积,以峰面积Y对对照品X(μg)进行线性回归,得迷迭香酸的回归方程:Y=2 447 526.68X-7 443 410.80,r=0.999 1,迷迭香酸在2.550～8.925 μg时进样量与峰面积线性关系良好。

2 结果

2.1冬凌草甲素及迷迭香酸在冬凌草不同叶位中的积累分布

冬凌草甲素在整个植株叶片中积累的规律性较强,从表1可以看出,第2对叶中冬凌草甲素含量最高,为0.94%,之后由上而下冬凌草甲素含量逐渐降低,最下端的叶中冬凌草甲素的含量为0.81%。而迷迭香酸虽然也主要积累于植株顶端第2对叶中(含量为1.24%),之后逐渐下降,但到第9对叶、第10对叶时又略上升。总的来看,冬凌草甲素及迷迭香酸主要积累分布于植株顶部,尤其植株顶端的第2对叶和第3对叶中。

表1 冬凌草不同叶位中冬凌草甲素及迷迭香酸的积累分布动态(%)

2.2 冬凌草甲素及迷迭香酸在冬凌草不同节间中的积累分布

由表2可知,由上而下冬凌草不同节位中冬凌草甲素及迷迭香酸呈现出逐渐下降的趋势,第1节的茎中冬凌草甲素及迷迭香酸含量最高,分别为0.130%和0.200%。随着冬凌草节位向下,其含量也逐渐下降,第10节茎中的冬凌草甲素及迷迭香酸含量最低,分别为0.032%和0.058%。由此可以看出,冬凌草甲素及迷迭香酸也主要积累分布于冬凌草茎的顶端部分。

3 讨论

前人对芦荟的研究表明,芦荟植株从上到下随着叶龄的增大,其芦荟素的含量逐渐降低[11-12]。组织化学及解剖学研究进一步证明,叶中芦荟素主要储存于韧皮部端的数个发达、大型的芦荟素的储藏场所,且芦荟素含量的高低与叶内维管束密度、大型薄壁细胞占椎管束的比例有关。本研究结果表明,无论是冬凌草叶中还是茎中,其主要次生代谢产物主要集中于冬凌草植株的上部。从叶片和茎的发育程度来看,2007年6月中旬时,植株上部大多为幼嫩的叶子,而下部多为成熟的功能叶。冬凌草植株的下部茎多已木质化,且节位越低,木质化程度越深,木质部越发达,这可能是造成茎中冬凌草甲素和迷迭香酸含量降低的主要原因。另外,冬凌草甲素属于萜类化合物,迷迭香酸属于酚酸类化合物,其代谢合成与光合作用的产物有着直接或间接的关系,冬凌草整个植株由上自下因接受光照程度的不同,也可能会导致次生代谢产物积累分布的差异,但具体原因尚需进一步探讨。

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(收稿日期:2009-02-03)