流式细胞仪检测微波疗法对基底细胞癌患者的T细胞亚群及NK细胞的影响

[摘要]目的：研究微波疗法对基底细胞癌患者的细胞免疫功能的影响。方法：用流式细胞仪检测32例基底细胞癌患者微波治疗前后外周血T细胞亚群及NK细胞。结果：基底细胞癌患者CD3、CD4细胞下降，CD8细胞增高，NK细胞降低，与对照组相比差异均有显著性；微波治疗后基底细胞癌患者CD4细胞上升，CD8细胞降低，NK细胞增多，与治疗前相比差异均有显著性。结论：基底细胞癌患者存在细胞免疫功能缺陷；微波疗法能提高基底细胞癌患者的细胞免疫功能。

[关键词]基底细胞癌；T淋巴细胞亚群；NK细胞；流式细胞仪；微波治疗

[中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2013）01-0075-02

Detection of the influence of T-cell subpopulation and Natural killer cells activity of microwave treatment for patients with basal cell carcinoma by flow cytometry

ZHANG Yuan，ZHONG Yi-ping，SUN Le-dong

（Department of Dermatology，Zhujiang Hospital，Southern Medical University，Guangzhou 510515，Guangdong，China）

Abstract： Objective To study the influence of the cellular immune function on The microwave therapy for patients with basal cell carcinoma（BCC）. Methods T-cell subpopulation and percentage of NK cells in peripheral blood of 32 cases with BCC were tested by flow cytometry before and after microwave therapy. Results The percentage of CD3 cells，CD4 cells and NK cells decreased and that of CD8 cells increased in BCC patients，with significant difference from those of controls. After microwave therapy，the percentage of CD4 cells and NK cells in patients with BCC were higher than that of before treatment，the percentage of CD8 cells were lower than that of before treatment. Conclusion BCC patients exist cellular immune function defect，Microwave therapy can enhance the immune function of the BCCpatients.

Key words：basal cell carcinoma；T-cell subpopulation；natural killer cells；flow cytometry；microwave therapy

基底细胞癌（basal cell carcinoma， BCC）是最常见的皮肤癌之一，以往多采用手术、放疗、化疗及免疫治疗等传统治疗方法，虽然这些方法效果尚可，但在美容和副作用方面存在一定的局限性。微波治疗BCC效果满意，复发率低，副作用少[1]，但其治疗机制尚未完全明了。恶性肿瘤的发生、发展和转归与机体的免疫功能密切相关，我们以前的研究证实BCC患者存在细胞免疫功能受损，并与BCC的发生、发展和转归有关，提示可从提高机体的免疫功能来寻找有效的治疗方法[2]。为了进一步了解微波治疗BCC癌的机制，我们应用流式细胞仪技术检测了32例BCC患者微波治疗前后的T细胞亚群及NK细胞，现报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料：32例患者均经组织病理学检查证实为基底细胞癌并接受微波治疗，其中男20例，女12例，平均年龄56.8岁（15～68岁），平均病程3.7年（2个月～18年），但具有下列情况之一者不列入研究范围：①伴有自身免疫性疾病、过敏性疾病、严重的系统性疾病、病毒感染性疾病者；②1年内用过免疫增强剂或免疫抑制剂者。微波的具体治疗方法为先将局部清洁、消毒，予2%利多卡因局部麻醉后，选用双极触头对准癌组织进行多点热化凝固，然后清除已凝固的坏死组织，反复多次对癌组织进行热化凝固，直到暴露出基底正常组织。治疗范围超出癌灶边缘5 mm。对范围特别大的基底细胞癌，可分次治疗。经过上述方法治疗后，接着按下微波机的热疗档，选用直径为7 cm的圆形发热器对准创面进行照射，输出功率为40～50W，发热器距创面10～15 cm，以患者有温热感为度。照射时注意充分暴露创面，照射完毕局部外涂复方红汞溶液。每日1次，每次20min，1个疗程为7～10天[1]。对照组32例，均为我院健康体检者，其中男19例，女13例，平均年龄57.3岁（16～69岁）。两组年龄和性别方面无统计学差异。

1.2 方法：用流式细胞仪技术检测32例BCC患者微波治疗前、疗程结束后及32例健康对照组外周血T细胞亚群及NK细胞百分率。具体方法为：2只试管中各加入100μl EDTA抗凝静脉血，再分别加入20μl的双标单克隆抗体CD3/CD16+56和CD4/CD8，室温避光副孵育20min后，加500μl红细胞溶解液溶解红细胞15min，1 000r/min 离心5 min，弃上清，用PBS缓冲液冲洗2次，再以0.5ml PBS缓冲液悬浮细胞，流式细胞仪分析5 000个细胞（双标记单克隆抗体CD3/CD16+56，CD4/CD8及红细胞溶解均购自法国国际免疫公司）。

1.3 统计学方法：使用SPSS10.0统计软件包进行统计学处理，采用配对t检验，以P

2 结果

32例BCC患者与对照组比较，CD3、CD4细胞百分率、CD4/CD8的比值和NK细胞的百分率均明显降低，CD8细胞百分率明显增高，差异均有显著性（P

3 讨论

检测外周血T淋巴细胞亚群及其比值是反映机体细胞免疫状态的重要参数之一[3]。我们应用流式细胞仪检测了BCC患者的外周血T淋巴细胞亚群，并与健康正常对照组比较，发现BCC患者CD3、CD4、CD4/CD8值及NK细胞百分率明显低于对照组，而CD8却明显高于对照组，差异均有显著性。BCC患者CD3、CD4细胞降低和CD8细胞的增高，再次证实BCC患者细胞免疫功能有明显下降，且以免疫抑制现象和自身免疫监视能力下降为突出，与我们以前的研究结果相符[2]，其与BCC的发生、发展和转归有关。

微波治疗BCC时，在微波能量较高时，可使蛋白质变性、凝固、坏死，从而达到去除病灶的目的，且其能有效地解决创面出血的问题，便于在治疗过程中观察病变组织是否清除“干净”[3]。此外，热疗能加快局部血液循环及代谢，提高局部免疫力，有利于伤口愈合。值得我们关注的是微波治疗后BCC患者的CD4细胞百分率、CD4/CD8的比值和NK细胞的百分率均明显上升，CD8细胞百分率明显下降。提示微波治疗BCC除了物理治疗作用外，还有可能是通过提高机体的免疫功能途径来实现治疗效果。与以往采取的手术、放疗、化疗及免疫治疗等传统治疗方法相比，微波疗法具有经济、方便、安全、可靠、美观及促进创面恢复和增强患者细胞免疫功能等优点，值得临床推广应用[1，3]。

[参考文献]

[1]孙乐栋，江丽芬，刁友涛，等.微波治疗基底细胞癌疗效观察[J].临床皮肤科杂志，2004，33（7）：446.

[2]孙乐栋，曾抗，刁友涛，等.流式细胞仪检测基底细胞癌的T细胞亚群[J] .中国美容医学，2005，14（1）：7-8.

[3]朱慧兰，陈荣章，武明昌，等.梅毒患者外周血T淋巴细胞亚群的检测及临床意义[J].中国麻风皮肤病杂志，2000，16（3）：156-158.