流式细胞仪在儿童急性B淋巴细胞性白血病免疫分型中的应用

时间:2022-08-09 11:01:35

流式细胞仪在儿童急性B淋巴细胞性白血病免疫分型中的应用

【摘要】 目的 研究流式细胞仪检测儿童急性B淋巴细胞性白血病(B-ALL)免疫分型的临床价值,并探讨与预后的关系。方法 利用流式细胞仪对39例B-ALL患儿在初诊时进行免疫分型。CD45-SSC设门,在CD19、CD10、CD20和CD22中选择两个单克隆抗体组合,进行三色组合分析。髓系抗体选用CD33和CD13。根据是否伴有髓系抗原表达分为两组,并随访预后。结果 ①CD19、CD22、CD10的阳性率都超过或接近90%,分别为CD19:94.87%,CD22:92.31%,CD10:87.18%,而CD20只有15.38%的阳性率;有33.33%的患儿检测到髓系抗原(My)标志,其中以CD+138例,CD+335例;②共有6例患儿复发,两组经χ2精确概率法检验,P>0.05,差异无统计学意义。结论 ①流式细胞仪可以用于绝大多数的B-ALL患儿免疫表型的检测;②伴有髓系表达不具有提示复发的意义。

【关键词】儿童;B淋巴细胞性白血病;免疫分型;流式细胞仪

Immunophenotype of acute B-lineage lymphoblastic leukemia in children by flow cytometry

WANG Yi-lin,SUN Li-rong.The Medical Shchool Hospital of Qingdao University,Qingdao 266003,China

【Abstract】 Objective To investigate the value of detecting immunophenotypes by flow cytometry(FCM) in B-lineage acute lymphoblastic leukemia (B-ALL) and discuss the relationship between immunophenotype and outcome.Methods 39 children with B- ALL were enrolled at diagnosis and immunophenotypes were detected by FCM.Gating was performed using the CD45-SSC plot.Various combinations with two monoclonal antibodies among CD19,CD10,CD20 and CD22 were analyzed with three-color stainings.CD33 and CD13 were used as myeloid antibodies for B-ALL with myeloid markers.2 groups were divided by myeloid markers.Results ①The positive rates of CD19,CD22 and CD10 were 94.87%,92.31%,and 87.18% respectively.The positive rates of CD20 was only 15.38%.CD13 and CD33 were expressed in 33.33% children with B-ALL,in which 8 cases of CD13 positive and 5 cases of CD33 positive were included.②There are 6 patiens relapse.There were no significance between 2 groups by Fisher’s Exact Test( P>0.05).Conclusion ①Flow cytometry can be used to detect immunophenotypes in the majority of children with B-ALL.②Myeloid markers in acute B-ALL are not the risk factors of relapse.

【Key words】Children;B-lineage Leukemia;Immunophenotype;Flow cytometry

白血病免疫分型是对形态学分型的重要补充和进一步深化,随着儿童急性白血病治疗的进展,其免疫分型越来越受到重视,国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的。为了发现儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)免疫表型的特点及与预后的关系,我们利用流式细胞仪对39例急性B淋巴细胞白血病患儿的免疫表型进行分析,并对其治疗结果动态随访。现报告如下。

1 材料和方法

1.1 病例 选择我院2002年9月至2007年1月初诊的B-ALL患儿共39例,年龄1岁4个月~12岁,中位年龄7岁,其中男27例,女12例,其中L1 10例,L2 28例,L3 1例,随访时间3~50个月,平均随访时间 16.87个月。

1.2 主要设备与试剂 流式细胞仪为美国BeckmanCoulter公司生产,仪器型号:EPICS-XL。所有单克隆抗体(McAb)均购自法国Immunotech公司。

1.3 检测方法 采用直接免疫荧光标记法,每种单抗20 μl,各加入100 μl 肝素抗凝的骨髓,室温避光,溶解红细胞,PBS洗涤,离心,加入500 μl PBS,上机检测。采用CD45-SSC设门,用Elite 4.5软件进行分析,同时以异硫氰酸荧光素(FITC)、藻红蛋白荧光素(PE)、多甲藻素叶绿蛋白(PerCP)荧光素标记的无关同型IgG1亚类作为阴性对照。不同的抗体组合及不同的患者标本都用同一设定的条件检测,收集每管中的全部细胞。

1.4 资料分析 所有样本均在EPICS- XL流式细胞仪上检测,CD45-SSC设门将被检测细胞群分为4个区域:R1(淋巴细胞门)、R2(原始细胞门)、R3(成熟粒细胞门)、R4(单核细胞、巨核细胞门),使用Elite 4.5软件对R2门内的细胞进行分析,同时在CD19、CD10、CD20和CD22中选择两个单克隆抗体(McAb)组合,进行三色组合分析,确定免疫表型,≥20%为阳性。

1.5 统计学处理方法 χ2检验精确概率法。

2 结果

2.1 各种单克隆抗体阳性发生率 39例急性B-ALL患儿中,CD19、CD22、CD10的阳性率都超过或接近90%,说明此3种McAb是B-ALL患儿最普遍的表达标志。同时有33.33%的患儿检测到髓系抗原(My)标志,其中以CD+13 8例,CD+335例。见表1。

2.2 复发病例 共有6例患儿复发,其中有3例患儿伴有髓系表达,见表2。经χ2精确概率法检验分析,P>0.05。说明B-ALL患儿是否伴有髓系表达与复发无关。见表2。

3 讨论

近年来,随着FCM技术的不断发展以及大量细胞表面分化抗原和胞浆内抗原单克隆抗体(MaAb) 的研制成功,用FCM 进行免疫表型分析已成为鉴别正常细胞和白血病细胞的重要手段[1]。

CD45为白细胞共同抗原,在细胞表面的表达量与细胞分化程度有关。原始细胞表达量比成熟细胞低,幼红细胞不表达。用两个系列或分化阶段特异性McAb加CD45进行三色免疫荧光染色后,根据细胞的颗粒性与CD45表达量的不同,用SSC/CD45双参数设门,十分容易鉴别骨髓和血液中的原始或成熟细胞,可特异地分析原、幼白血病细胞的免疫表型而不受成熟细胞的干扰,大大增强了白血病免疫分型的准确度与灵敏度[2]。

研究表明,细胞表面所表达的抗原表明该细胞处在不同的分化过程中的特殊阶段[3]。正常B 淋巴细胞分化过程中细胞表面分子出现的先后顺序大致为CD19、CD10、CD22、CD20、Cμ、SmIg,依此可判断B系ALL 的分化阶段。B-ALL细胞发育与正常B细胞基本相似[4,5]。我们采用从原B细胞至成熟B细胞出现频率高有一定代表性的CD10、CD19、CD20、CD22和HLA-DR等作为常规表型检测,对其结果进行分析,可基本确定被测B细胞所处的发育阶段。

本组B系ALL系列相关抗体CD19具有高敏感性(阳性率达94.87%),CD22阳性率也达到92.31%,可以看出两者不失为B系ALL的良好标志。CD10的阳性率亦高达87.18%,与国外文献报道的CD10的阳性率 10%~50%[6,7],Thalhmmer等[8]认为CD10 不是B细胞系列相关抗体。造成这种国内外B-ALL表型表达的差别,可能与地区和人种不同有关。本组CD20的阳性率只有15.38%,说明CD20的敏感性差,且文献报道CD20在T-ALL时也有42.9%阳叉表达。所以利用 CD45及SSC设门,CD19/CD22/CD10中选择两个单克隆抗体组合,可有效分析国内儿童急性B淋巴细胞性白血病的免疫表型。

细胞免疫表型分析在白血病诊断中的突出优点之一是能区分伴有髓系抗原的ALL。本组有33.33%的患儿同时伴有髓系的表达,以CD33和CD13常见。与国内报道的18%~34.9%[9,10]相符。而国外多报道在5%~16%[11,12]。My+ ALL 的文献报道结果迥异其可能原因包括:抗体组合不同,抗体组合多则较易发现交叉系列抗原的表达;使用的染色方法或荧光素不同,如PE标记的抗体较FITC 标记的抗体有更高的敏感性等[13]。我们的结果显示ALL患儿髓系抗原表达率为33.33%。虽然儿童ALL 免疫分型与其预后相关,但是ALL 伴髓系抗原表达与预后的关系迄今尚无定论。本组患儿通过四格表精确概率法分析,发现伴有髓系抗原表达的B-ALL,其复发率与无髓系抗原表达患儿的复发率差异无统计学意义。国内王菊香等[10]报道My+ ALL 与My- ALL 患儿相比,其对化疗的早期反应以及复发率等均差异无统计学意义。国外BM F90 协作组大样本研究认为My+ ALL 和My- ALL 的治疗效果及预后相同[14]。因此,ALL患儿髓系抗原表达对于其不良预后无提示意义。

参考文献

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