泮托拉唑钠肠溶胶囊在健康人体的药代动力学和生物等效性

[摘要] 目的:评价泮托拉唑钠肠溶胶囊在中国健康志愿者体内的药动学和生物等效性。方法:18名健康男性试验者随机分为2组,分别单剂量口服泮托拉唑钠肠溶胶囊试验制剂或参比制剂40 mg。7 d清洗期后再交叉给药。于服药前(0 h)和服药后0.33、0.67、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50、4.00、6.00、8.00、10.00 h抽取静脉血。采用高效液相色谱法测定血浆中泮托拉唑的浓度。通过DAS Ver 2.0软件计算主要药动学参数,评价两制剂的生物等效性。结果:泮托拉唑钠肠溶胶囊试验制剂与参比制剂的tmax分别为(2.60±0.67) h和(2.60±0.50) h,Cmax分别为(2 767.90±969.20) μg/L和(2 864.10±1 090.20) μg/L,t1/2分别为(1.80±0.60) h和(1.80±0.50) h,AUC0t分别为(8 071.1±4 747.9) μg・h/L和(8 272.5±5 095.0) μg・h/L, AUC0∞分别为(8 581.60±5 255.70) μg・h/L和(8 803.30±5 639.10) μg・h/L。以AUC0t计算,试验制剂中泮托拉唑钠对参比制剂的相对生物利用度为(99.40±11.40)%。结论:经方差分析及双单侧t检验,泮托拉唑钠肠溶胶囊试验制剂与参比制剂在中国健康志愿者体内具有生物等效性。

[关键词] 泮托拉唑钠肠溶胶囊;色谱法;高效液相色谱法;药动学;生物等效性

[中图分类号] R968[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)04(c)-061-04

Pharmacokinetics and bioequivalence of Pantoprazole sodium enteric-coated Capsules in healthy volunteers

YANG Guorong],LI Jianhe2, CAO Junhua2, YANG Qiaofeng2, ZENG Xiaohui2, LUO Xia2

(1.Department of Pharmacy, the Second Hospital of Zhuzhou, Zhuzhou 412005, China; 2.Department of Pharmacy, the Second Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410011, China)

[Abstract] Objective: To evaluate the pharmacokinetics and bioequivalence of Pantoprazole sodium enteric-coated Capsules in healthy volunteers. Methods: The study was performed in 18 healthy male volunteers according to a randomized 2-way crossover design. The blood samples were collected at 0 h,and 0.33, 0.67, 1.00, 1.50, 2.00, 2.50, 3.00, 3.50, 4.00, 6.00, 8.00, 10.00 h after taking 40 mg of Pantoprazole sodium enteric-coated Capsules test preparation and reference preparation, and with repeated sampling of the crossover drug administration 7 d after clearance. The concentration of pantoprazole in plasma was determined by HPLC. The pharmacokinetic parameters were calculated and compared statistically to evaluate the relative bioequivalence between the two preparations ofpantoprazole sodium by DAS Ver 2.0 software. Results: The major pharmacokinetic parameters of Pantoprazole sodium enteric-coated Capsules test preparation and reference preparation were as follows: tmax were (2.60±0.67) h and (2.60±0.50) h,Cmax were (2 767.90±9 69.20) μg/L and (2 864.10±1 090.2) μg/L, t1/2 were (1.80±0.60) h and (1.80±0.50) h, AUC0t were (8 071.10±4 747.90) μg・h/L and (8 272.50±5 095.00) μg・h/L, AUC0∞ were (8 581.60±5 255.70) μg・h/L and (8 803.30±5 639.10) μg・h/L, respectively. The relative bioavailability of test preparation was (99.40±11.40)%. Conclusion: Statistical analysis showes Pantoprazole sodium enteric-coated Capsules test preparation and reference preparation were bioequivalent in Chinese healthy volunteers.

[Key words] Pantoprazole sodium enteric-coated Capsules; Chromatography; HPLC; Pharmacokinetics; Bioequiavalence

泮托拉唑是第3代质子泵抑制剂,可选择性作用于胃黏膜壁细胞,抑制细胞壁中H+-K+-ATP酶活性,使壁细胞内的H+不能转运到胃中,从而抑制胃酸的分泌。临床用于消化性溃疡及其出血、反食性食管炎、胃泌素瘤等的治疗[1-3]。本试验采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定18名健康受试男性自身交叉口服两种泮托拉唑肠溶胶囊的经时血药浓度,计算药动学参数和相对生物利用度,评价试验制剂和参比制剂是否具有相同的有效性和安全性,为临床合理用药提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

美国Agilent-HPLC 1100高压液相色谱仪,配备G1313A自动进样器和G1315B二极管阵列检测器;Agilent化学高级色谱数据工作站;瑞典Mettler Toledo AL-204电子分析天平;Heraeus Biofuge stratos高速冷冻离心机;江苏金坛市医用仪器厂HY-4多用调速振荡器;江苏海门麒麟医用仪器厂GL-88B 旋涡混合器。

1.2 试药

试验制剂(T):泮托拉唑钠肠溶胶囊(北京双鹤药业股份有限公司,每粒40 mg,批号:20090412,含量:106.0%);参比制剂(R):泮托拉唑钠肠溶胶囊(湖南健朗药业有限责任公司,每粒40 mg,批号:20090324,含量:103.4%);泮托拉唑对照品(中国药品生物制品检定所,批号:100575-200902,含量:99.9%);奥美拉唑对照品(中国药品生物制品检定所,批号:100760-200901,含量:99.8%);乙腈(色谱纯,TEDIA Company);其他试剂均为分析纯,水为双重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Phenomenex C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(33∶67);检测波长:285 nm;流速1.0 ml/min;进样量20 μl;柱温:30℃。

2.2 试验者

健康男性志愿者18名,年龄(23.5±1.4)岁,身高(171.3±3.6)cm,体重(61.8±4.2)kg,试验前进行体格检查,血尿常规、肝肾功能、心率、血压和心电图等检查均正常;试验者既往体健,无药物过敏史,无吸烟、嗜酒及经常用药史。两周内未服用任何可能影响本品吸收、代谢的药物。试验期间统一清淡饮食,不使用除试验制剂和参比制剂以外的任何药物,不接受烟、酒及含咖啡的饮料,避免剧烈运动。试验者试验前签署知情同意书,本试验方案经本院医学伦理委员会审核批准。

2.3 给药方案与血样采集

采用双周期自身随机交叉试验设计。18名试验者随机等分为两组,每组试验者每次试验时分别服用泮托拉唑钠肠溶胶囊试验制剂或参比制剂。试验者于试验前一日晚餐后,禁食不禁水12 h,次日清晨空腹分别单次口服泮托拉唑钠肠溶胶囊试验制剂和参比制剂40 mg,以250 ml温开水送服,并作记录。服药2 h后可自由饮水,服药4 h后进统一标准餐。试验期间由医护人员进行监护。间隔7 d后交叉给药,重复上述试验。分别于服药前(0 h)和服药后0.33、0.67、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50、4.00、6.00、8.00、10.00 h由前臂肘静脉取血5 ml。血样置含有肝素的离心管中,立即离心(3 000 r/min)5 min,分离出血浆,置-40℃冰箱中保存,备测。

2.4 标准溶液的配制

泮托拉唑标准贮备液的配制:精密称取泮托拉唑对照品20.0 mg,置于25 ml量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度, 得浓度为800 μg/ml的标准贮备液,置4℃冰箱中保存,备用。

奥美拉唑标准贮备液的配制:精密称取泮托拉唑对照品10.0 mg,置于100 ml量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,得浓度为100 μg/ml的内标贮备液,置4℃冰箱中保存,备用。

2.5 血浆样品处理

精密吸取肝素抗凝血浆0.5 ml,置10 ml具塞尖底玻璃离心管中,加入内标奥美拉唑(100 μg/ml)溶液10 μl、混合有机溶剂(乙醚-二氯甲烷=7∶3)3 ml,旋涡振荡1 min,以3 000 r/min转速离心10 min,移取上清液至尖底玻璃离心管中,35℃恒温下氮气吹干,加入100 μl流动相溶解,取20 μl进样,并记录色谱图。

2.6 专属性考察

空白血样、空白血样中加入对照品和志愿者服药后血样经HPLC分析测定得到的色谱图见图1。泮托拉唑保留时间约为8.4 min,内标奥美拉唑的保留时间约为11.5 min,峰形良好,基线平稳,血浆内源性物质及其他杂质不干扰内标和样品的测定,表明本方法具有较高的特异性,能准确测定血浆中泮托拉唑的浓度。

图 1 HPLC色谱图

[A:空白血浆;B:空白血浆中加入内标和泮托拉唑对照品;C:志愿者服药后血样(2 467.0 μg/L);IS:内标;PTLZ:泮托拉唑]

Fig.1 HPLC chromatograms

[A: the blank blood sample; B: the blank blood sample with the internal standard and pantoprazole; C: the test samples (2 467.0 μg/L); IS: the internal standard;PTLZ: pantoprazole]

2.7 标准曲线的制备与定量下限

用空白血浆将泮托拉唑标准贮备液稀释成不同浓度(24.00、80.00、240.00、800.00、1 600.00、3 200.00、6 400.00 μg/L)的标准液,按“2.5”项下方法处理,泮托拉唑与内标峰面积之比(Y)与泮托拉唑浓度(X)进行加权线性回归,得其回归方程:Y=4.06×10-4X-9.27×10-4(r=0.998 7),泮托拉唑浓度在24.0～6 400 μg/L范围内线性关系良好,该方法血浆中泮托拉唑最小定量浓度为24.0 μg/L。

2.8 稳定性试验

用空白血浆配制相当于泮托拉唑浓度为24.00、800.00和6 400.00 μg/L的样品,分别在室温条件下放置0、2、4、8、10 h;在-40℃冰箱中冷冻后取出,室温融化,重复操作3次;在-40℃冰箱中放置0、5、10、15 d,然后在上述考察条件下取样,并按上述方法测定,计算泮托拉唑的浓度,结果样品在室温放置10 h内、3次冻融过程中、冷冻条件下放置15 d内均稳定。

2.9 回收率及精密度试验

用空白血浆配制浓度为24.00、800.00和6 400.00 μg/L的泮托拉唑血样各5份,按“2.5”项下方法处理,计算泮托拉唑的浓度,得其平均相对回收率分别为96.3%、101.8%和103.7%,日内相对标准差(RSD)分别为5.9%、4.2%和1.5%;连续测定3 d,得日间相对标准差(RSD)分别为8.5%、5.7%和5.6%。

2.10 绝对回收率

用空白血浆配制浓度为24.00、800.00和6 400.00 μg/L的泮托拉唑血样,各5份,按“2.5”项下方法处理,进样20 μl,记录泮托拉唑和内标的峰面积;另用甲醇配制相应浓度的泮托拉唑溶液,不经萃取直接吹干,加入100 μl流动相溶解,进样20 μl,记录泮托拉唑和内标的色谱峰面积。以血浆样品测定的峰面积除以同浓度的标准溶液峰面积所得的百分率计算提取回收率(按照体积校正)。结果表明泮托拉唑的绝对回收率分别为66.4%、70.0%和68.4%,其RSD分别为9.8%、7.5%和4.1%。其内标奥美拉唑的绝对回收率为74.5%。

2.11 方法学质量控制

用空白血浆配制浓度为24.00、800.00和6 400.00 μg/L的质量控制样品,每次测定时每个浓度取3份样品,按“2.5”项下方法操作(每次样品的测定安排在每天测定的中间时段),计算浓度,结果测定值均落在靶值的±20%范围内。

2.12 数据处理

试验和参比制剂的Cmax和tmax均以实测值表示。AUC0t以梯形法计算;AUC0∞按公式计算:AUC0∞=AUC0t+Ct/λZ (t为最后一次可实测血药浓度的采样时间;Ct为末次可测样本药物浓度;λZ为对数血药浓度-时间曲线末端直线部分求得的末端消除速率常数);t1/2用公式t1/2=0.693/λZ计算。以各个试验者服用试验制剂和参比制剂的AUC0t按下式分别计算其相对生物利用度(F)值:F=AUCT/AUCR×100%。主要药动学参数经对数转换后以多因素方差分析(ANOVA)进行显著性检验,然后用双单侧t检验和计算90%置信区间的统计分析方法来评价和判断药物间的生物等效性。药代动力学基本参数的计算与统计学检验统计分析借助DAS Ver 2.0软件完成。

2.13 血药浓度-时间曲线

18名试验者口服泮托拉唑钠肠溶胶囊试验制剂和参比制剂40 mg后的平均血药浓度-时间曲线见图2。

图 2 18名健康志愿者单剂量口服泮托拉唑钠肠溶胶囊试验制剂和参比制剂后平均血药浓度-时间曲线

Fig.2 Mean plasma concentration-time curves of pantoprazole after

a single oral dose of test formulation and reference formulation

in 18 healthy volunteers

2.14 主要药动学参数

试验者口服泮托拉唑钠肠溶胶囊试验制剂和参比制剂40 mg后的主要药代动力学参数见表1。对同一试验者两种制剂的药动学参数进行配对t检验,差异均无统计学意义(P>0.05)。以参比制剂为标准对照,试验制剂的相对生物利用度为(99.4±11.4)%。

2.15 生物等效性评价

试验制剂和参比制剂的Cmax、AUC经对数转换后进行方差分析,并进一步采用双单侧t检验和(1-2α)置信区间法进行生物等效性评价,tmax采用非参数检验法。结果表明,泮托拉唑的AUC0t、AUC0∞和Cmax均拒绝生物不等效假设(P>0.05);试验制剂的Cmax、AUC0t、AUC0∞的90%置信区间分别为参比制剂相应参数的 91.8%～102.6%、94.0%～103.6%和93.6%～104.0%。非参数检验结果显示,两制剂的tmax差异无统计学意义(P>0.05)。根据以上结果,判定两制剂生物等效。

2.16 不良反应或事件

整个试验过程由经GCP培训的临床医生和护士进行观察,18名试验者在服用泮托拉唑钠肠溶胶囊试验制剂和参比制剂40 mg后均无不适主诉或亦未观察到不良事件,且均按要求完成试验。

3 讨论

本试验在参考相关文献[5-14]的基础上,建立了用混合有机溶剂(乙醚-二氯甲烷=7∶3)提取法测定血浆中泮托拉唑血药浓度的方法,血浆中杂质干扰很少,可以达到很好的分离度和灵敏度。本法简便、灵敏、精确、特异性强,可满足药代动力学和生物利用度研究的需要。另外,由于泮托拉唑在光照下不稳定,因此整个试验过程应避光操作。

18名男性健康志愿者口服泮托拉唑钠肠溶胶囊40 mg后,在人体分布符合二房室开放模型。血药浓度经时变化过程及两制剂的药代动力学参数相近(P>0.05),本试验所得主要药代动力学参数与国外文献报道基本一致[15-18],试验制剂与参比制剂生物等效。整个试验期间,受试者未出现药物不良反应。

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(收稿日期:2010-01-06)