实验室中利用液相色谱测定水产品中喹乙醇残留量的质量控制

摘 要：参照行业标准SC/T3019-2004利用高效液相色谱法，采用agilentXDB-C18色谱柱，以15%甲醇水溶液为流动相洗脱后，经过DAD检测器分析，测定水产品中喹乙醇的残留量，通过制定标准曲线，样品加标回收等手段实现实验室对测定水产品中喹乙醇残留量的质量控制，并对标准方法进行优化，大大降低了检出限，缩短了分析时间。

关键词：高效液相色谱；DAD检测器；喹乙醇；线性；检出限；回收率

喹乙醇又称喹酰胺醇，商品名为倍育诺、快育灵，被广泛用作水产及畜禽动物生长促进剂。但由于在水产养殖中大剂量、长时间的使用，发现喹乙醇有中度至明显的蓄积毒性[2]，对大多数动物有明显的致畸作用，因此喹乙醇在美国和欧盟都被禁止用作饲料添加剂，我国也制定了该药在水产品中的最高残留限量标准，随着食品安全在广大人民的生活中备受关注，水产品安全问题日益受到重视，建立水产品中喹乙醇残留量的检测方法，实施水产品药物残留监控具有重要的实际意义。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

1.1.1 高效液相色谱仪：agilentLC1200，配备四元泵，自动进样系统，柱温箱，DAD检测器，安捷伦科技有限公司。

1.1.2 XDB-C18色谱柱：150mm×4.6mm id，5um，agilent公司。

1.1.3 旋转蒸发器：RE52-86A上海亚荣生化仪器厂。

1.1.4 电子天平：TP-214电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司。

1.1.5 离心机：3K15 德国Sigma公司。

1.1.6 高速分散器：IKA T10basic，ULTRA-TURRAX 德国。

1.1.7 固相萃取装置。

1.1.8 溶剂过滤器：津腾。

1.1.9 喹乙醇标准品：纯度为99.0%，德国。

1.1.10 助滤剂：Celite545，使用前用甲醇洗净烘干。

1.1.11 无水硫酸钠：分析纯，650℃干燥4h，冷却后贮存于密封容器中备用。

1.1.12 乙腈、甲醇：液相色谱纯。

1.1.13 正己烷：色谱级，用乙腈饱和。

1.1.14 标准溶液和标准系列的配制：精确称取10.0mg喹乙醇标准品，用少量水溶解，用甲醇稀释定容至100ml，配制成0.1mg/ml的标准储备液。取此溶液10mL，再用甲醇稀释至100mL，配制成10ug/ml的标准使用液，此标准溶液需置于棕色瓶内避光冷藏保存，保存期为1个月。使用时分别用15%甲醇水溶液稀释成0.1、0.2、0.5、1.0ug/ml的标准系列，此溶液现用现配，避光保存。

1.2 样品的制备

1.2.1 提取：称取10.00g家鱼样品于50ml离心管内，加入助滤剂1g，30mL乙腈，用高速分散器以10000r/min均质1min， 4000r/min离心10min。把上清液转移至150mL锥形瓶中。再向残留物中加入20mL乙腈，同上均质，离心，合并上清夜。

1.2.2 净化：向乙腈提取液中加入10mL正己烷，震荡5min，静置分层。弃去正己烷层，再加入正己烷10mL， 震荡5min，静置分层，将乙腈层转移于梨形瓶中。在45℃水浴中旋转蒸发至干，用1.0mL15%甲醇水溶液溶解残渣，过0.45um滤膜，滤液供液相色谱测定。

1.2.3 样品的加标制备，称取上述家鱼样品10.00g，加入0.2ug/ml的标准溶液1mL，按照1.2.1的步骤进行提取，按照1.2.2的步骤净化样品提取液，所得样品加标滤液与样品滤液一同进行液相色谱测定。

1.3 样品的测定

1.3.1 色谱条件

1.3.1.1 色谱柱：XDB-C18柱（150mm×4.6mm id，5um）。

1.3.1.2 流动相：15%甲醇水溶液（V/V）。

1.3.1.3 流速：1.0ml/min。

1.3.1.4 柱温：35℃。

1.3.1.5 检测波长：380nm。

1.3.1.6 进样量：20ul。

1.3.2 相关图谱

1.3.2.1 标准曲线的制定：在1.3.1的色谱条件下对1.1.14配制的标准系列溶液进样测定并绘制标准曲线，见表1，0.1μg/ml喹乙醇标准品色谱图参见图1。

1.3.2.2 样品测定：在1.3.1的色谱条件下对1.2.2经净化后的滤液进样测定，外标法定量。样品色谱图参见图2，加标样品图谱参见图3。

2 结果

2.1 标准曲线的线性和检出限分析：在1.3.1的色谱条件下，对喹乙醇标准系列溶液进行分析，得到符合分析要求的线性，线性回归方程、相关系数和线性范围参见表1。

在此色谱条件下根据3倍信噪比计算，仪器检出限为0.01μg/ml，该方法的检出限为0.05mg/kg。

2.2 方法回收率分析：向不含喹乙醇的鱼样中分别加入含喹乙醇标准浓度为0.2，0.5μg/mL按照样品的处理步骤进行检测，结果显示，平均回收率见表2。

2.3 样品分析：本次样品选用市场上售卖的一般家鱼20份，按照1.2方法制备样品溶液，在1.3.1的色谱条件下测定，外标法定量，结果表明，所有样品中喹乙醇的残留量均小于0.05mg/kg。

3 讨论

3.1 色谱条件：本实验方法是参照行业标准方法[3]的色谱条件进行了优化，发现本方法中选用的XDB-C18柱和流动相比例也可以对标准品和样品实现基线分离，达到较理想的分离效果，同时缩短分析时间，按照行业标准方法[3]要求整个分析需时10-15min，而按照本法的色谱条件进行分析只需5min，在批量分析的情况下大大节省了分析时间。

3.2 线性、检出限和回收率：在1.3.1色谱条件下对标准系列溶液进行分析绘制的标准曲线线性能达到分析要求，以最低浓度计算，仪器的检出限能达到0.01μg/ml，同时回收率稳定，满足标准方法的要求。

结束语

本方法在参照行业标准的前提下对色谱条件进行了优化，所选用的XDB-C18柱色谱柱和DAD检测器大大缩短了分析时间，提高了检测灵敏度，通过制定标准曲线和对阴性样品加标的手段，测定加标回收率，达到实验室质量控制的要求。

参考文献

[1]曾振灵.高效液相色谱法测定饲料中喹乙醇含量[J].饲料与畜牧，1995，26（4）：34-38.

[2]杨波，陈言红等.喹乙醇在水产动物中的应用及其安全性评价[J].中国饲料，2007（4）：27-2.

[3]中华人民共和国农业部.SC/T3019-2004水产品中喹乙醇残留量的测定液相色谱法[S].北京：中国农业出版社，2004.

[4]艾晓辉，刘长征文华，等.鱼组织中喹乙醇残留量高效液相色谱检测方法研究[J].湖北农学院学报，2003，23（4）：266-269.

[5]张锦红，葛长荣等.应用高效液相法对动物源性食品中喹乙醇残留检测方法的建立与研究[J].现代仪器，2011，93（2）：57-59.