压力性尿失禁患者尿道周围结缔组织中核心蛋白聚糖和TGF-β1mRNA表达水平的改变

摘要：目的探讨压力性尿失禁(SUI)患者尿道周围结缔组织中核心蛋白聚糖（DCN）和转化生长因子β1(TGF-β1) mRNA表达水平的改变及其相关性。方法将65例绝经后妇女根据是否存在SUI，分为SUI组（35例）和对照组（30例）。采用半定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测两组妇女尿道周围结缔组织中DCN和TGF-β1 mRNA的表达水平。结果SUI组患者DCN及TGF-β1 mRNA表达水平与对照组比较，其差异均有统计学意义，且两者间存在负相关关系。结论SUI患者尿道周围结缔组织中TGF-β1减少及DCN的升高可能导致该部位胶原蛋白含量的减少，最终导致SUI发生的原因之一。

关键词：压力性尿失禁；胶原蛋白；核心蛋白聚糖；转化生长因子β1

The Connective Tissue Around the Urethra in Patients with Stress Urinary Incontinence of Decorin and TGF- β 1 mRNA Expression Level Change

OU Lu

(Department of Gynaecology and Obstetrics,Nanhai District People's Hospital Foshan City,Foshan 528200,Guangdong,China)

Abstract：ObjectiveTo observe the relationship between the expression of decorin and TGF-β1 mRNA in periurethral vaginal tissue in patients with stress urinary incontinence(SUI).MethodsTransvaginal biopsies were obtained from the periurethral vaginal tissue in 35 SUI and 30 non SUI control postmenopausal women.RT-PCR were used to verify the mRNA level of decorin and TGF-β1.Results The expression of decorin was significantly higher and the expression of TGF-β1 was significantly lower in patients with SUI.The expression of decorin mRNA was highly and negatively related to the expression of TGF-β1 mRNA.Conclusion Our study results suggest that the decrease of TGF-β1 expression and increase of decorin expression,might reduce the quantity of collagen of periurethral vaginal tissue,and which involved in the pathogenesis of SUI.

Key words：Stress urinary incontinence;Collagen;Decorin;TGF-β1

随着人口老龄化和人们对生活质量要求的提高，压力性尿失禁成为了妇女常见的一种疾病[1]。压力性尿失禁的发生是由于盆底结缔组织和韧带的支撑力减弱而引起的盆底功能障碍性疾病，故常与盆底其它脏器的功能障碍合并存在。胶原为结缔组织的主要成分，且目前大多数研究表明，SUI和POP患者其结缔组织胶原的含量均有所改变，且呈减少的趋势，但其减少的原因尚不清楚。本文通过对SUI患者尿道周围结缔组织中TGF-β1、DCN mRNA表达水平的检测及两者相关性的研究，分析其在SUI发病中的作用，进一步阐明SUI的发病机理。

1资料与方法

1.1一般资料2007年4月~2010年1月在佛山市南海区人民医院及广州医科大学第一附属医院妇产科收治的绝经后妇女65例，根据是否存在SUI，分为SUI组（35例）和对照组（30例）。根据病史、妇科检查、护垫试验和尿动力学检查结果符合SUI诊断标准者入组SUI组，对照组无盆底器官膨出和尿失禁症状。所有入选者近3个月内未服用激素类药物，术后病理结果证实无子宫内膜异位症、子宫肌瘤、功能性卵巢肿瘤等雌激素相关疾病，尿液分析无尿路感染。在征得患者的知情同意后，术中取近宫颈膀胱韧带处阴道前壁粘膜下筋膜组织1.0cm×1.0cm×0.5cm，量约100mg，迅速置于液氮中保存备用。

1.2组织总RNA的提取按Trizol试剂盒说明提取组织总RNA。（Trizol Reagent 购自invitrogen 公司）

1.3引物设计与合成RT-PCR引物根据GenBank中相关基因的序列设计，由上海英骏生物工程公司合成。

1.4 RT-PCR按照Invitrogen公司的SuperScript Ⅲ First-Strand Synthesis System 逆转录试剂盒说明书将提取的组织总RNA逆转录为cDNA，在PE9600 PCR仪上进行PCR：96℃2 min预变性，然后按96℃变性30sec，53℃－59℃退火30sec，72℃延伸45sec，进行30个循环，最后72℃延伸10min。RT-PCR产物用2％琼脂糖凝胶电泳分离鉴定。

1.5半定量分析取PCR产物5μl，加6×loading buffer 1μl，2％琼脂糖凝胶电泳（100V，40min），产物经凝胶成像仪和图像分析系统进行图像分析，分别测定DCN、TGF-β1和β-actin的A值，并以其比值（DCN/β-actin、TGF-β1/β-actin）表示DCN和TGF-β1 mRNA的相对表达水平。

1.6统计学方法使用SPSS11.0统计软件进行数据分析。通过两样本t检验和双变量相关分析对结果进行分析。

2结果

SUI组患者尿道周围结缔组织中DCN mRNA表达水平为1.87±0.35,对照组为0.94±0.16，t=11.121，P

1,2,3:绝经后SUI组患者 4,5,6:绝经后对照组患者

图1 两组患者DCN mRNA扩增后凝胶电泳结果

1,2,3:绝经后SUI组患者 4,5,6:绝经后对照组患者

图2 两组患者TGF-β1 mRNA扩增后凝胶电泳结果

3讨论

近年来，关于SUI患者盆底支持组织中胶原蛋白改变的研究较多，目前，多数研究认为，SUI患者盆底结缔组织中总胶原蛋白含量下降，并认为胶原蛋白数量的减少导致了韧带、筋膜等支持结构的松弛，最终导致SUI发生[2]，而导致SUI患者盆底组织胶原蛋白含量减少机制至今尚不清楚。余燕等研究发现绝经前后SUI患者阴道前壁组织中胶原含量减少且TGF-β1 mRNA表达水平下降[3]。DCN通过与TGF-β的受体竞争性结合，起到抑制TGF-β促进胶原蛋白合成的作用，是一种体内天然的TGF-β负性调节因子，另一方面，DCN能结合在胶原纤维表面，通过调整胶原纤维的C－末端，在胶原形成起始阶段延迟胶原的组装，使胶原合成减少，林益彬等研究发现SUI患者尿道周围结缔组织中Ⅲ型胶原含量减少，可能是由于组织中DCN表达增强所致进而提示DCN mRNA表达增强可能是SUI发生的一个原因[4]。

本研究结果显示，绝经后SUI患者尿道周围结缔组织TGF-β1 mRNA的表达水平较对照组显著减少，DCN mRNA的表达水平较对照组显著升高，差异均具有统计学意义，且两者呈负相关关系。结果提示SUI尿道周围结缔组织中胶原含量的减少，可能是由于DCN生成增加，使TGF-β1的基因表达减少，从而使该部位胶原纤维的生成减少，同时，由于DCN增多使得胶原的组装延迟，而使胶原蛋白合成减少。可进一步进行相关检测以了解盆底支持组织中DCN和TGF-β1 蛋白表达水平的改变情况。基于本实验的结果，通过抑制盆底支持组织中DCN mRNA的表达，促进TGF-β1 mRNA的表达，是否可起到增加局部胶原含量和提高SUI治愈率的作用，有待于进一步的研究证实。

参考文献：

[1]宋岩峰,李亚钦,许波.福州市社区女性尿失禁发病现状的分析[J].中华妇产科杂志,2004,39:257-259.

[2]孙智晶,郎景和,朱兰.胶原状态与压力性尿失禁的病因学研究[J].中国妇产科临床杂志,2004,5（1）：6-8.

[3]余燕,宋岩峰.压力性尿失禁患者阴道壁核心蛋白聚糖和转化生长因子mRNA表达水平集胶原含量的研究[J].实用妇产科杂志,2007,23(10):615-617.

[4]林益彬,宋岩峰.压力性尿失禁患者尿道周围结缔组织中核心蛋白聚糖mRNA表达水平与III型胶原含量的相关性研究[J].中华妇产科杂志,2005,40(8):508-510.