不同温度、时间制备新鲜冰冻血浆中的凝血因子含量分析

【摘要】 目的：观察不同温度和不同时间制备新鲜冰冻血浆对血浆中凝血因子含量的影响。方法：在15 ℃和2 ℃～6 ℃的温度下制备血浆各25份，每一试管留取血液5 ml。将同一温度的血浆分别在6、8、10 h速冻标本，72 h内将速冻成固体的血浆在37 ℃的水中解冻，立即采用血凝法检测各凝血因子的活性。结果：15 ℃下保存的血液在6～10 h纤维蛋白原、FⅦ、FⅨ、FⅩ等因子活性降低不明显，FⅤ和FⅧ因子在6～10 h活性下降显著，与其他同一温度下的因子活性降低值相比差异有统计学意义（P

【关键词】 温度； 时间； 新鲜冰冻血浆； 凝血因子含量

doi：10.14033/ki.cfmr.2017.5.033 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2017）05-0061-02

血浆是血液中的非细胞成分，其含有多种成分，主要包括水分、糖类、无机物、非蛋白含氮化合物、蛋白质等。临床中所用血浆多为血站提供，用于制造血液制品的主要是血浆站提供，血站主要为临床提供新鲜冰冻血浆、病毒灭活冰冻血浆、普通冰冻血浆等[1]。新鲜冰冻血浆主要指采集后储存在冷藏环境中的全血，时间最好在6 h以内。血浆站采集后的血浆放置于-35 ℃以下的冷库在2 h内速冻成形。不同时间和温度制备的新鲜冰冻血浆中的凝血因子有所不同。本次研究旨在探讨不同温度、时间制备新鲜冰冻血浆中的凝血因子含量的差异，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

随机抽取2015年5-8月笔者所在血浆站采集符合《药典》健康要求的580 ml血浆，血浆分别放置在2 ℃～6 ℃和15 ℃的温度下各取样本血浆25份。将血浆放置在制备室，采用十万级净化密闭环境中取样，每个试管中留样5 ml，2 ℃～6 ℃的血浆在6、8、10 h内冰冻，将其保存在储存冰箱中，15 ℃的血浆在6、8、10 h内冰冻，温度由室内空调设定和调控。血浆冰冻72 h内将雪浆在37 ℃的水温下解冻，解冻后立即检测各凝血因子的含量。

1.2 仪器与试剂

所用仪器包括：血浆分离器、大型低温离心机、全自动血液成分分离机、低温操作台、大型低温冰箱、试剂冰箱、sysmex-CA-7000全自动血凝仪。试剂选用FⅤ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、纤维蛋白原测定试剂盒、一次性采血浆袋等。

1.3 方法

采用凝固法测定凝血因子含量。将新鲜冰冻血浆标本在37 ℃水温下解冻，解冻后观察血浆性状，血浆如整体颜色呈淡黄色、色泽无异常、无纤维蛋白析出，则可立即检测各凝血因子。凝血因子含量的检测采用凝固法进行测定。对新鲜冰冻血浆中FⅤ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、纤维蛋白原（Fib）等同时进行检测。判断标准依照中A人民共和国国家标准GB18469-2012《全血及成分血质量要求》。

1.4 统计学处理

采用SPSS 17.0软件做统计学分析，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P

2 结果

不同时间和不同温度下制备的新鲜冰冻血浆中的凝血因子的活性进行比较。结果详见表1和表2。15 ℃下保存的血液在6～10 h纤维蛋白原、FⅦ、FⅨ、FⅩ等因子活性降低不明显，FⅤ和FⅧ因子在6～10 h内活性下降显著，与其他同一温度下的因子活性降低值相比差异有统计学意义（P

3 讨论

血浆是医学中必备的物品，血浆质量也是保障临床治疗疗效的关键，因此血浆在制备过程中要确保其质量，血浆从制备到保存、运输以及输注都需严格按照相关规定进行，将其建立在科学标准化的操作规程范围内，确保每个环节的正确无误，避免影响到血浆输注效果，建立起全过程的质量控制保证体系，提高血浆的应用疗效。新鲜冰冻血浆在临床中应用较为广泛，可应用于各种凝血因子缺乏的病症。新鲜冰冻血浆中有多种凝血因子，可保存多种不稳定的凝血因子活性，部分凝血因子较为稳定、部分凝血因子则不稳定，容易丧失活性[2]。冰冻血浆在临床中也得到广泛应用，其与新鲜冰冻血浆相比具有的不足之处是其只可保持稳定的凝血因子的活性，不稳定的FⅧ、FⅤ等凝血因子安活性则无法有效保持[3]。血浆中不稳定的凝血因子体外半衰期较短，仅能够保持8～12 h，超过这个时间段则容易丧失活性，血浆凝血因子接触异物表面会有不同程度被激活而失去活性[4]。临床输注新鲜冰冻血浆时会将不稳定凝血因子的活性作为评估新鲜冰冻血浆的重要质量指标。新鲜冰冻血浆也可用来制备冷沉淀的血浆。在不同温度和不同时间制备新鲜冰冻血浆会直接影响新鲜冰冻血浆中凝血因子的活性[5]。本次研究中，分别在15 ℃和2 ℃～6 ℃下制备新鲜血浆，观察其在不同时间血浆中凝血因子的活性。结果显示2 ℃～6 ℃下保存的血浆在6、8和10 h内FⅤ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、纤维蛋白原等均在正常范围内，各凝血因子降低不明显。因此新鲜冰冻血浆在制备冷沉淀时最好选用6～10 h内的血浆。新鲜冰冻血浆采血后为保证凝血因子的活性应尽快制备，冷藏环境尽量选择2 ℃～6 ℃的冷藏环境。新鲜冰冻血浆常需要进行冷沉淀，冷沉淀是新鲜冰冻血浆溶化后分离出沉淀在血浆中的冷不溶解物质，含有多种凝血因子[6]。冷沉淀对多种病症均有良好的治疗效果，如纤维蛋白原缺乏症、弥漫性血管内凝血、产妇大出血以及甲型血友病等[7]。另外，病毒灭活血浆中凝血因子活性在不同温度、时间下制备凝血因子也会受到影响。有研究显示，血浆灭活前、后有效成分的含量会发生改变，血浆中的凝血因子会受亚甲蓝的影响含量出现降低[8]。血浆经病毒灭活后会影响凝血因子中的不稳定因子的疗效。血浆病毒灭活可以有效降低传染病毒性疾病的不安全因素，从而有效降低因输注血浆引起的输血风险。

因此，由于制备新鲜冰冻血浆不同时间和温度会影响到凝血因子的活性，因此制备新鲜血浆时需充分考虑到时间和温度这两方面影响因素。新鲜冰冻血浆采血后需及时制备，确保凝血因子的活性受到的影响最小，严格遵循GB18469-2012《全血及成分血质量要求》中对血液保存在冷藏环境中制备新鲜冰冻血浆的要求，确保所制备的新鲜冰冻血浆的有效性。

综上所述，不同时间、不同温度制备新鲜冰冻血浆会对凝血因子的活性产生不同影响，制备冷沉淀血浆应用15 ℃、8 h内和2 ℃～6 ℃6～10 h制备的新鲜冰冻血浆作为原料血浆，这可使血浆中凝血因子的活性得到有效保持。

参考文献

[1]王晓峰，张美萍，刘自安，等.不同温度、时间制备新鲜冰冻血浆中各种凝血因子含量研究[J].临床输血与检验，2015，17（2）：128-131.

[2]何亚琴，张建伟，黄彩霞，等.不同时间制备的新鲜冰冻血浆及冷沉淀中凝血因子比较[J].临床血液学杂志（输血与检验），2014，28（6）：1045-1046.

[3]尤榕，黄丽红，黄智君.不同分离制备时间对凝血因子Ⅷ含量的影响探讨[J].实验与检验医学，2014，32（6）：735-736.

[4]陈菊芬，沈磁石，叶有玩，等.不同时间制备的血浆及冷沉淀的质量比较[J].中国输血杂志，2013，26（5）：454-456.

[5]李丽.探讨冷沉淀原料浆不同制备时间对血浆凝血因子的影响[J].医学理论与实践，2013，26（23）：3181-3183.

[6]王超英.亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆中及白细胞残留量的影响[J].中国输血杂志，2014，27（3）：290-292.

[7]马改娣，张美萍，田志彬，等.病毒灭活对血浆中各种成分回收率的影响[J].中国输血杂志，2009，22（3）：218-219.

[8]刘晓丽，张微，徐书琴，等.三种速冻方法制备新鲜冰冻血浆的比较分析[J].中国输血杂志，2016，29（1）：85-87.

（收稿日期：2016-10-20）