气相色谱法测定恩替卡韦中有机溶剂残留量

摘 要：目的：建立气相色谱法测定恩替卡韦中有机溶剂残留量。方法：采用Agilent KB-624毛细管柱（60m×0.53mm，3.0？m）；氮气为载气；进样口温度为250℃；检测器温度为300℃；柱温为200℃。结果：在本文色谱条件下，分离度良好，检测浓度在所考察的范围内与峰面积具有良好的线性，r=0.9990～0.9999；平均回收率为96.3%～106.2%，精密度试验及准确度试验的RSD均小于5%。结论：本试验建立的色谱方法简便、准确，灵敏度高，适合恩替卡韦有机溶剂残留量的检测。

关键词：恩替卡韦 残留溶剂 气相色谱法

恩替卡韦是一种用于治疗乙肝病毒感染的新一代鸟嘌呤核苷类似物口服药，主要用于治疗成人伴有病毒复制活跃和血清转氨酶持续增高，或肝组织学为活动性病变的慢性乙型肝炎，是目前降病毒最快最强、变异几率最低的核苷类似物。恩替卡韦是新一代抗 HBV核苷类似物药物，因其具有高效的抗病毒治疗作用和极低的耐药率而成为抗病毒治疗的首选。恩替卡韦为环戊基鸟嘌呤核苷类似物，在体内在磷酸激酶的作用下形成活性的三磷酸化合物，恩替卡韦三磷酸盐拮抗 HBV所需天然底物脱氧鸟苷三磷酸，作用靶点为 HBV多聚酶，从而抑制 HBV逆转录酶活性，达到抗病毒作用。药物中的残留溶剂是指在原料药或赋型剂的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。由于残留溶剂不仅没有疗效，还可能增加药物的毒副作用，而且影响药物的稳定性，故所有的有机溶剂应尽可能除去。为了保护患者免受药物中残留有机溶剂的伤害，需对药品在生产过程中引入的有机溶剂残留量进行测定。恩替卡韦在合成过程中使用了甲醇、二氯甲烷和三乙胺3种溶剂，产生了苯甲醇和氯化苄2种产物。本文按中国药典2010年版二部[1]与人用药品注册技术规范国际协调会（ICH）[2]起草的有机溶剂残留量测定指导原则，并参考有关资料[3]建立了顶空气相色谱法检测恩替卡韦中5种残留溶剂，该方法灵敏度高，结果准确。

一、仪器与试药

仪器：Agilent 7890A；自动进样器：Agilent G4513A。其它试剂均为色谱纯。恩替卡韦样品（山东方明药业集团股份有限公司提供，批号为：1310001，1310002，1310003）。

二、方法与结果

1.溶液的制备

对照品溶液 分别精密称取甲醇308.52mg，二氯甲烷62.3mg，三乙胺50.3mg，苯甲醇510.6mg，氯化苄41.6mg，同置100ml量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。精密量取储备液5ml，置50ml量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

供试品溶液 精密称取恩替卡韦1.0g置10ml量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺适量使溶解并稀释至刻度，即得供试品溶液。

空白溶液 N，N-二甲基甲酰胺。

2.色谱条件及系统适用性试验

毛细管柱： KB-624（60m×0.53mm，3.0μm）；载气为氮气，流速5.0ml・min-1；分流比为5：1；进样口温度为250℃；检测器温度为300℃；毛细管柱温度为200℃。取“2.1”项下的各溶液分别进样，各溶剂间的分离度均符合规定，溶剂不影响测定。

3.线性关系考察

精密量取对照品储备液5，8，10，12，15ml，分别置于100ml量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺稀释得系列线性溶液，测得各溶剂线性关系良好。

4.精密度试验

取对照品连续进样6次，甲醇、二氯甲烷、三乙胺、苯甲醇和氯化苄峰的RSD分别为3.8%，6.2%，3.5%，4.7%，3.9%。精密度良好。

5.加样回收率

取对照品储备液分别制成低（80%）、中（100%）、高（120%）3个浓度的对照液；取同一批号（1310001）的恩替卡韦用上述对照液分别制成0.10g/ml的溶液，每种浓度制备3份，以外标法测定回收率，回收率良好。

6.样品测定

3批样品中的有机溶剂残留均未检出。

三、讨论

1.溶剂选择

二氯甲烷水中不溶，故不考虑以水为溶剂；恩替卡韦与各溶剂均能在N，N-二甲基甲酰胺中溶解，故本方法选择N，N-二甲基甲酰胺为溶剂。

2.毛细管柱选择

聚乙二醇类色谱柱不能使各溶剂完全分离，而KB-624毛细管柱测得的各溶剂分离度良好，故选此柱。

3.色谱条件确立

参照药典2010年版残留溶剂测定法确定本法的色谱条件为：柱温200℃，进样口250℃，检测器300℃。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）[S] .北京：中国医药科技出版社，2010：61.

[2]人用药物注册技术要求国际协调会.残留溶剂指导原则[M].北京：人民卫生出版社，2000：236.

[3]楼永军.毛细管柱气相色谱法测定恩替卡韦中8种残留溶剂[J] .中国卫生检验杂志，2013，23（1）：56～57.