泮托拉唑钠中黑曲霉的回收试验

摘要：目的：选择适当的检查方法,提高泮托拉唑钠中微生物的检出率。方法：采用培养基稀释法，对泮托拉唑钠进行了黑曲霉的回收试验。结果：黑曲霉在样品中的回收率大于70%。结论：该法为泮托拉唑钠的微生物限度检查提供了依据,对药品的生产及检验部门有实用的价值。

关键词：泮托拉唑钠；培养基稀释法；黑曲霉

中图分类号： R975 文献标识码： A 文章编号： 1008-2409(2007)06-1200-02

The recovery test of Aspergillus Niger inPantoprazole Sodium Medicines/WU Xiao∥Guangxi Zhuang Autonomous Region， Guilin Institute For Drug Control， Guilin 541002, China

Abstract:Objective:To improve the detecting ratio of viable micro-organism in Pantoprazole Sodium Medicines. Methods:The recovery rate test was carried out in Pantoprazole Sodium Medicines by usingmedium dilution method. Results:The recovery for the tested Aspergillus niger in testing samples was found to be over 70%. Conclusion:The results are credible and accurate, the method has useful value to the manufacturer and identifier of drugs.

Key words:PantoprazoleSodium; medium dilution method; Aspergillus nige

泮托拉唑钠原料药属质子泵抑制剂，通过特异性地作用于胃粘膜壁细胞，降低壁细胞中的H+/K+ATP酶的活性，从而抑制胃酸的分泌；适用于酸相关性疾病，包括消化道溃疡、卓艾综合征，特别适用于溃疡伴出血、呕吐或不能进食及顽固性溃疡和急性胰腺炎等。实验表明泮托拉唑钠对黑曲霉有一定的抑制作用，但可以用培养基稀释法来消除其抑制作用，为泮托拉唑钠微生物限度检查法的建立提供依据。

1 材料与仪器

生物安全柜、霉菌培养箱（23～28℃）、电热干燥箱（160～250℃）、高压蒸汽灭菌器、电子天平； 玫瑰红钠琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基；pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0．9%无菌氯化钠溶液（稀释菌液用）。黑曲霉（Aspergillus niger）［CMCC(F)98 003］； 泮托拉唑钠（批号：20061108，20061110，20061112）。

2 方法与结果

2.1 菌液的制备[1]

取经25℃培养7d 的黑曲霉真菌斜面培养物, 加入生理盐水4ml洗下孢子, 吸出转移至无菌空试管作为原液, 10 倍稀释至约含50～100cfu 的孢子悬液。备用。

2.2 供试液制备（1∶10）

称取供试品10g，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 ml，摇匀，即成供试液。

2.3 回收率测定方法[2]

试验组：取供试液适量，菌液1 ml（50～100cfu）同时加入平皿中，平行制备两个平皿，立即倾注45℃约15ml玫瑰红钠琼脂培养基，待凝固后，置23～28℃培养48～72h。逐日点计结果。

菌液组：除不加供试液外，其余操作同试验组，以测定加入的试验菌数。

供试品对照组：除不加菌液外，其余操作同试验组，以测定样品本底菌数。

回收率计算：（试验组菌数－供试品对照组菌数）/菌液组菌数 ×100%

2.4 预试验

分别取供试液1ml（常规法）、0.5ml和0.2ml（培养基稀释法）注皿，按2.3项对黑曲霉进行回收率测定预试验，以确定其抑菌程度。结果如表1。

预试验结果表明，本品对黑曲霉有一定的抑制作用，经培养基稀释（0.5ml/皿）就能消除其抑制作用，黑曲霉的回收率即可达70%以上。

2.5 验证试验

取本品3批，按培养基稀释法（0.5ml/皿）对黑曲霉进行回收率测定，结果见表2。

3 讨论

3.1 注意掌握实验培养时间，在培养48h时，菌落清晰易数，否则随着培养时间的延长，试验组由于样品的原因使培养基颜色逐渐变为深紫色到深褐色而无法计数。

3.2 在《中国药典》2005年版附录微生物限度检查法的验证试验要求中，黑曲霉为验证试验菌株之一，属霉菌类的代表菌株，根据上述实验结果，检验泮托拉唑钠微生物限度时，可以用培养基稀释法（1∶10的供试液1 ml均分到两个平皿）对其进行霉菌计数。

参考文献：

［1］ 国家药典委员会.微生物限度检查法［S］.中国药典，2005：附录.

［2］ 许华玉. 药品微生物限度检查法中细菌和真菌计数方法的验证试验［J］.中国中药杂志，2005，30（24）：1918.

(收稿日期： 2007-02-15)

注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。”