RP-HPLC法测定苯噻啶片含量

摘要：目的：建立苯噻啶片的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法选用SinoChrom OPS-AP(4．6mm×250mm,5μm)色谱柱，检测波长为200nm，流动相为0．05mol/L磷酸二氢钠缓冲液-乙腈-甲醇(50∶41∶9)(含1．5％三乙胺，磷酸调pH3．0)，流速为0．8 ml/min，β-萘酚作为内标物。结果：苯噻啶在7～112μg/ml范围内呈良好线性关系(r=0．9999)，平均回收率为99．46％(RSD=0．53％，n=3)。结论：本法可用于该片的含量测定，操作简便，结果准确。

关键词：rp-hplc；苯噻啶；含量测定

中图分类号： R927.2 文献标识码： A 文章编号： 1008-2409(2007)06-1205-02

Determination of Pizptifen tablet by RP-HPLC/WENG Sheng∥The First People's Hospital of Qinzhou City, Qinzhou 535000, China

Abstract:Objective:To establish a method for the determination of Pizptifen in tablet. Methods: SinoChrom OPS-AP column (4.6mm×250mm,5μm) was used with the detection wavelength was atλmas=200nm. The mobile phase was composed of 0.05 mol・L-1 sodium dihydrogen phosphate buffer-acetonitrile-methanol (50∶41∶9) (containing triethylamine 1.5%, adjust pH to 3.0 with H3PO4).The flow rate was 0.8 ml・min-1, the internal-standard was 13-naphthol.Results: The standard curve was linear over the range of 7~112μg・ml-1 of Pizptifen with r=0.9999.The recovery for Pizptifen was 99.46% and RSD was 0.53%.Conclusion: The proposed method is simple, selective, accurate and precise.

Key words:RP-HPLC; Pizptifen; content determination

苯噻啶具有很强的抗5-羟色胺、抗组胺作用和较弱的抗乙酰胆碱作用。主要用于先兆性和非先兆性偏头痛的预防和治疗，能减轻症状及发作次数，疗效显著。也可试用于红斑性肢痛症、血管神经性水肿、慢性荨麻疹以及房性和室性早搏等。本品毒性小，可长期服用。

国内有采用HPLC外标法对该药进行含量测定的报道[1，2]，笔者采用内标法对该药进行含量测定，现将其片剂的含量测定方法报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

美国Agilent HP1100系列高效液相色谱仪(包括Agilent G1310A单元泵、Agilent G1316A柱温箱、Agilent G1314A可变波长检测器)；威马龙工作站；TDX高速离心机(美国Abbott公司)，旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)。

1．2 试剂与药品

对照品：苯噻啶(中国药品生物制品检定所，批号10312-0001)；苯噻啶片(市售，批号：0503031,0505151,0506231)，β-萘酚(北京瀛海精细化工厂提供，含量>99．5％)；乙腈、乙醚、甲醇为色谱纯；

磷酸二氢钠、乙酸乙酯、磷酸为分析纯，水为二次纯化水。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

SinoChrom OPS-AP(4．6mm×250mm，5μm)色谱柱；0．05mol/L磷酸二氢钠缓冲液-乙腈-甲醇(50∶41∶9)，含1．5％三乙胺，磷酸调至pH3．0；检测波长：200nm；柱温为室温；流速：0．8ml/min；进样量：20μl。流动相经0．22μm的微孔滤膜滤过后使用。

2．2 溶液的制备

2．2．1 对照品溶液 准确称取苯噻啶对照品0．0013g，置于10ml量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度。

2．2．2 供试品溶液 取本品20片，准确称定，研细。再准确称取适量 (约相当于苯噻啶0．5mg)，置于10ml量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度。

2．2．3 内标溶液 准确称取β-萘酚对照品(0．0045g)置于100ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。

2．3 方法的专属性考察

通过对苯噻啶、溶剂及辅料进行HPLC分离检测，色谱详见图1。

2．4 线性考察

分别量取储备液适量，各加入100μl内标液，用流动相稀释至刻度，制成浓度为7，14，28，56，70，84，112μg/ml的溶液，图1 苯噻啶的HPLC色谱图

A.辅料 B.苯噻啶对照品及内标 C.苯噻啶片及内标

1-苯噻啶 2-β-萘酚

摇匀，进样20μl，依法测定，记录峰面积。苯噻啶保留时间为7．18min，理论塔板数为4816，两者的分离度大于2．0，符合中国药典2000年版规定[3]。以苯噻啶与β-萘酚的峰面积比(Y)与苯噻啶的浓度(X)进行线性回归，得方程为：Y=0．0032X-0．00337 r=0．9999，表明浓度在7~112μg/ml范围内，上述两峰面积比与测定浓度成良好线性关系。

2．5 精密度试验

取同一样品(批号为0503031)溶液，线性关系项下的溶液20μl，连续进样5次，测得苯噻啶与β-萘酚的峰面积比的RSD为3．11％(n=5)。

2．6 重复性试验

取同一批号(批号为0503031)样品6份(约相当于苯噻啶0．5mg)，准确称定，按照含量测定项下的方法，测定苯噻啶的含量，RSD为1．41％，表明本法重复性较好。

2．7 稳定性试验

取样品(批号为0503031)溶液于室温避光放置0，2，4，6，12， 24，48h分别进样测定，峰面积比基本不变，RSD为2．08％。结果表明，样品48h内可保持稳定。

2．8 回收率试验

准确称取苯噻啶对照品7mg及按照片剂处方比例的辅料适量，置100ml容量瓶中，加甲醇适量，振摇使苯噻啶溶解，加甲醇至刻度，摇匀。经0．22μm滤膜滤过，弃去初滤液，准确量取续滤液适量，加内标液100μl，置10ml量瓶中，摇匀，取20μl注入色谱仪，按内标法以峰面积计算，结果详见表1。

2．9 样品含量测定

取3批苯噻啶片，准确称定，研细，准确称取适量(约相当于苯噻啶0．5mg)，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，照回收率试验的方法，自“加甲醇适量……”起，依法操作，内标法以峰面积计算样品中苯噻啶的含量，结果见表2。

3 讨论

3．1 波长的选择

根据资料[1，2]显示，本品在256nm处有比较好的吸收峰，但通过大量实验后发现，本品在256nm峰型一般，柱效较低；而在200~400nm的范围内，苯噻啶在200nm处有较大吸收，且峰型、柱效、灵敏度均最好，测定时基线噪声低而稳定，内标物在此波长下吸收亦良好。

3．2 不同配比的流动相对试验的影响

采用过甲醇、水、磷酸二氢钠等多种试剂和比例作为流动相效果都不理想，通过实验确定了以乙腈-磷酸二氢钠为基础的流动相系统；为解决出峰时间过早的问题，加入了一定量的甲醇以延缓出峰时间；为增强柱效，改善峰型，在流动相中加入了占总体积1．5％的三乙胺。最后确定流动相比例为乙腈∶磷酸二氢钠∶甲醇(50∶41∶9）。

3．3 流动相pH的选择

在流动相配比不变的情况下，考察不同pH的流动相对色谱行为的影响。结果表明，药物与内标随着pH值提高逐渐分离，pH3．0左右药物与内标峰分离程度最好，峰形好，随着pH的增加出峰时间也后移，峰型不好。

参考文献：

［1］ 周文枭，王巨才．HPLC法测定苯噻啶的含量［J］.中国药学，2003，17(7)：443-444．

［2］ 李纬，王雪芹．高效液相色谱法测定苯噻啶的含量［J］．中国现代应用药学，2003，20(1)：55-56．

［3］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典(二部)［S］.北京：化学工业出版社，2000：附录32．

(收稿日期： 2007-05-26)

注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。”