用TP―ELISA RPR TPPA检测梅毒螺旋体抗体的应用与分析

摘要：目的：酶联免疫吸附试验（ELISA）、快速血浆反应素实验（RPR）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集实验（TPPA）检测梅毒螺旋体的结果符合率及其在临床中的应用评价。

方法：对418例梅毒ELISA实验阳性的标本再进行RPR、TPPA检测；同时用TPPA进行滴度检测。

结果：TP-ELISA法检测出的418例阳性标本，TPPA法检测出阳性412例，阳性符合率为98.56%；RPR法检出率121例，阳性符合率为28.94%。随着TPPA滴度升高，RPR法和TPPA法的阳性符合率也随之升高。

结论：TP-ELISA是一种高特异性、高敏感性的梅毒血清学诊断检测方法，结果较为准确可靠，适合大样本筛查，而RPR只能作为辅助实验，适宜疗效观察。TPPA可作为确诊实验，也可用于疗效观察。

关键词：梅毒螺旋体抗体 酶联免疫吸附测定 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集实验 快速血浆反应素实验

【中图分类号】R9 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2013）06-0404-01

梅毒是由苍白密螺旋体苍白亚种（Treponema paIlidumsubsp，T，paIlidum）引起的一种严重危害身体健康的性传播疾病，该病表现复杂，可侵犯皮肤、粘膜及全身各个器官，近年来梅毒感染的人群逐渐增加，梅毒的临床表现和病例也呈现多样化，梅毒血清学检测即成了诊断梅毒的常用手段和重要依据。由于该病所致对人的健康和名誉（升学、就业、参军、家庭等的影响），因此实验室检测对梅毒的诊断、治疗具有重要的意义。目前实验室常用来检测梅毒螺旋体感染血清学方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集实验（TPPA）、和快速血浆反应素实验（RPR）和甲苯胺红不加热血清学实验（TRUST）。临床上常用三种方法（ELISA RPR TPPA）。现本文对418例用TP-ELISA方法检测的阳性的标本进行TPPA和RPR检测、同时用TPPA进行滴度检测以此来评价这三种方法在梅毒诊断的应用的价值。

1 材料与方法

1.1 材料。收集来自库尔勒市第二人民医院2010年1月至2012年10月“免疫五项”常规筛查中用酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）筛出的阳性标本418例做比较。

1.2 检验试剂。TP-ELISA试剂北京科卫和RPR试剂上海科华生物；TPPA试剂日本富士株式会社。

1.3 方法。对TP-ELISA筛检出的阳性标本再用RPR、TPPA进行检测。TP-ELISA：操作严格按试剂盒说明书进行，所用酶标仪为北京普朗DNM―9602A。RPR：在23～29℃室温中，将RPR抗原悬液一滴加入50ul检测血清或血浆中，用RPR旋转仪水平转动纸卡8min，然后3min内在光线充足处判断结果。TPPA：先将待测血清或血浆在U型培养板上进行稀释，分别形成1∶10，1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，1∶320，1∶640，1∶1280，1∶2560等9种稀释度，再将未致敏与致敏明胶颗粒分别加入1∶40，1∶80的稀释血清中，室温放置2h后观察结果。

1.4 统计学处理。采用SPSS12.0统计软件和X2检验，以P>0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TP-ELISA法筛出418例阳性标本再用TPPA和RPR检测。在418例中TP-ELISA阳性标本中，TPPA法检测有412例阳性。可见TPPA与ELISA的阳性符合率为98.56%，2种方法检出率比较差异无统计学意义（P0.05）。

2.2 不同滴度。用418例TPPA阳性标本进行1∶10～2560滴度检测，同时进行RPR试验，结果见表1。

3 讨论

梅毒螺旋体感染人体后，首先在体内产生IgM抗体，随后再产生IgG抗体。所以IgM是梅毒感染早期的标志，感染2-4周即可检出。梅毒螺旋体侵入机体可产生抗类脂抗原的非特异性抗体和抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体。检测抗类脂抗体的方法目前国内最常用的是RPR法和TRUST法，并且长期以来作为国内临床疑似患者和血站献血人员筛查的主要方法。而TPPA能同时检测IgG型和IgM型抗体，是将纯的梅毒螺旋体特异性抗原包被在凝胶颗粒上。检测梅毒螺旋体抗体主要有TP-ELISA法和TPPA法，而TPPA法主要用于筛检阳性标本的确诊。

TP-ELISA法是利用基因重组梅毒螺旋体的特异性抗原TP47和TP17包被微孔反应板，采用双抗原夹心法检测梅毒螺旋体特异性IgM和IgG抗体。此方法可应用于自动化检测系统，可以进行大批量的检测，是目前筛查和检测梅毒的一种良好方法，极大提高了实验的敏感性和特异性。检测结果显示，TP-ELISA法筛查存在着假阳性（6/418），假阳性率为1.43%，与TPPA比较，阳性符合率为98.56%，不失为一种检测梅毒螺旋体抗体的快速、灵敏的首选方法。但因存在假阳性，建议TP-ELISA法阳性标本，最好用TPPA法做确证。

TPPA是将梅毒特异性Nichols株的精致菌体成分包被在人工载体明胶颗粒上，对梅毒特异性抗体检测具有高度特异性和敏感性，是目前公认的梅毒确认实验。但TPPA法操作比较复杂，试剂昂贵，结果判定需要人工而不能用于自动化，限制了其大规模标本的筛查。

RPR检测的是梅毒非特异性类脂质抗体，即反应素，其效价与病变活动性有关，易受某些传染病及自身免疫性疾病等因素干扰。非特异性抗体检出时间比特异性抗体的时间晚，本文结果显示，TP-ELISA阳性标本418例，其中RPR阳性仅为121例，阳性符合率仅为28.94%，差异有统计学意义（P>0.05）。如果梅毒血清抗体过高，由于前带现象则会出现假阴性，所以当临床上怀疑梅毒而RPR实验阴性时也应做确认实验，以免漏诊。RPR实验操作简单、快速、费用低，适合于大批量标本的初筛，RPR滴度检测一是为了避免前带现象所致的阴性干扰，二是RPR滴度水平与梅毒的治疗情况呈正相关，它可作为疗效观察以及判断是否复发及再感染的重要依据。

综上所述，梅毒诊断是比较复杂的检测过程，其中有很多不确定因素。应联合TPPA和RPR两种实验方法同时进行，相互检验验证，提高检出率，最大限度的降低漏诊、误诊。也更有利于临床医生观察病程和疗效，以便梅毒患者及时得到诊治。

参考文献

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[2] 刘伟.梅毒实验室诊断研究进展，国外医学皮肤性病学分册，1994

[3] 戴玉琳，冯星.研究的梅毒血清学研建议，中国皮肤性病学杂志，2004

[4] 李俊杰，刘超等，TRUST与TP-ELISA法对无偿献血者血清检测对比分析，2005