炮制对三子养亲汤多糖溶出的影响

【摘要】目的：建立三子养亲汤中多糖的含量测定方法，并探讨其炮制意义。方法：采用水提醇沉法提取多糖，以硫酸蒽酮法进行含量测定。结果：线性范围为3.47～20.82μg，r=0μ9997，平均回收率为100.26%，RSD=1.21%。结论：建立的分析方法简便易行，重复性好。三子养亲汤方中饮片炒制后可增加多糖类成分的溶出，加热过程中部分多糖结构发生变化。

【关键词】三子养亲汤；炮制；多糖；硫酸蒽酮法

【中图分类号】R283.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）08-0017-03

Abstract：Objective create method to determine the content of polysaccharide in Sanziyangqintang and discuss the significance of processing.Method extract polysaccharide by water extract and alcohol precipitation， determine the content by sulphuric acid-anthroic ketone method.Results The linearity range of is 3.47μg/ml～20.82μg/ml，r=0.9997， average recovery rate is 100.26%， RSD=1.21%. Conclusion：The method is simple and stable. The polysaccharide content of Sanziyangqintang rise after processing， the structure of polysaccharide changed after heating.

Keywords：Sanziyangqintang， processing polysaccharide， sulphuric acid-anthroic ketone method

三子养亲汤方源于明代的《韩氏医通》，是目前临床的常用方剂。方由紫苏子、白芥子、莱菔子组成，临床用于咳嗽喘逆、痰多胸痞、食少难消，舌苔白腻，脉细滑等症[1]以及老年慢性支气管炎、咳嗽、过敏性哮喘、小儿喘息性肺炎等[2-5]。方中三味药的用法是微炒，击碎，煮作汤饮，历代临床多沿用此法。方中的白芥子生用辛散力强，善于通络止痛，炒后能缓和辛散走窜之性，避免耗气伤阴，长于顺气豁痰。紫苏子生品多用于肠燥便秘，炒后辛散之性缓和，更宜于风寒喘咳。莱菔子生升熟降，生用能升能散，长于涌吐风痰，炒后缓和了涌吐痰涎的副作用，突出了消食除胀、降气化痰的作用，因此三子养亲汤方中饮片临床应用以炒品配方居多。

文献报道[6]，白芥子和莱菔子中多糖含量较高，而药理研究表明，多糖是多种中药的有效成份之一，具有多种生物活性，是理想的免疫增强剂。研究采用水提醇沉法提取三子养亲汤多糖，用硫酸蒽酮法测定其含量。同时以生品饮片组方后测定其多糖的含量，比较探讨炮制对三子养亲汤多糖溶出的影响，进一步验证该方饮片炮制入药的合理性。

1仪器和试药

1.1仪器U-3010紫外可见分光光度计（日本日立）； FA1004电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）。

1.2材料D-无水葡萄糖对照品（批号：110833-200302，中国药品生物制品检定所）。白芥子（批号：A40904，购自湖北）；莱菔子（批号：20150101，购自江西）；紫苏子（批号：141030，购自江苏）。炒莱菔子、炒白芥子、炒紫苏子按2015版《中国药典》清炒法进行加工炮制。

2方法与结果

2.1多糖提取液的制备按参考文献 [7-10]，精密称取炒白芥子0.2g，炒紫苏子0.3g，炒莱菔子0.3g。用石油醚120ml索氏提取至无色，加80%乙醇100ml，回流提取2次，每次2h，合并滤液，回收乙醇。药渣挥干溶剂，转移至圆底烧瓶中，加水200ml，回流提取2h，滤过，加水定容至250ml，作为多糖提取液。

2.2对照品溶液的制备[11]精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品34.7mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（浓度347μg/ml）。

2.3供试品溶液的制备精密量取吸取供试品溶液lml于试管中，在冰水浴中加入0.2%蒽酮-浓硫酸溶液4ml，置沸水浴中反应10min，取出置冰水浴中10 min。在波长400～800nm 之间进行扫描，结果葡萄糖溶液和样品提取液在630nm处均有有最大吸收。吸收光谱图见图1、2。

2.4标准曲线绘制精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，加水至1ml，按2.1项下的方法在630nm 处测定吸光度，以吸光度A 为纵坐标 ，葡萄糖浓度C（μg/ml） 为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=0.03116+0.038125977C，r=0.9997。实验表明，在3.47～20.82μg范围内，线性关系良好。标准曲线见图3。

2.5精密度实验精密量取对照品溶液0.4ml，6份，按2.1项下制备方法制备对照品试液和空白试液，在625nm 波长处重复测量6次，实验结果RSD为0.50%（n=6），表明仪器的精密度良好。结果见表1。

2.6稳定性实验精密量取供试品溶液，分别于0、10、20、30、50、60min内测定，结果位RSD（%）=1.11，表明供试品溶液在1h内基本稳定。见表2。

2.7重复性实验精密称取同一样品粉末6份，每份0.8g，按照2.1项下方法操作，计算多糖含量，结果见表3。实验结果显示RSD=0.81%，表明该方法的重现性良好。

3.8加样回收率实验取样品（已知多糖含量1.36%）粉末0.8g，6份，精密称定，精密加入无水葡萄糖对照品0.251mg，按样品测定方法制备溶液并测定吸光度值。按下式通过换算因子折算多糖的回收率。结果见表4。

回收率%=实际测得多糖量-样品中含有多糖量加入葡萄量×换算因子×100%

3.9多糖的提取及精制参考莱菔子和白芥子中的多糖的提取方法[3-4]，取三子养亲汤样品50g，分别置索氏提取器中，用20倍石油醚回流提取4h，药渣挥干溶剂；用20倍乙醚回流提取4h，药渣挥干溶剂；用20倍80%乙醇回流提取4h，药渣挥干溶剂，转移至圆底烧瓶中，再以20倍水回流提取4h，提取液浓缩至一半，加入1%活性炭，脱色，滤过，滤液加入乙醇使含醇量达80%，静置过夜，滤过，残渣依次用乙醚、丙酮、无水乙醇反复洗涤数次，得三子养亲汤多糖，置硅胶干燥器中干燥备用。

3.10多糖换算因子测定精密称取三子养亲汤粗多糖16mg，加水溶解并定容至50ml。精密量取0.5ml多糖溶液，按2.1项下方法操作，计算单糖浓度，按下列公式计算多糖换算因子。结果见表5，6。

f =W×1000C×D

W为多糖的重量（mg）；C 为溶液中单糖的浓度（μg/ml）；D 为稀释倍数

结果表明，三子养亲汤生、炒品配方多糖的换算系数变化较大，推测炮制过程对三子养亲汤多糖的结构有所改变。

3.11样品测定取多糖提取液，按标准曲线绘制方法操作，测定其吸光度值，按下式计算多糖含量。结果见表7、8。

多糖含量=C×D×fW×106×100%

C 为样品溶液的葡萄糖浓度（μg/mL）；D 为样品溶液的稀释倍数；W 为样品的重量（g）；f 为换算因子。

实验结果表明，三子养亲汤炒品配方多糖含量高出生品配方46.3%，并且两者的换算系数差异很大。说明炒制过程对多糖的溶出影响较大，并且受热过程中，部分多糖结构发生变化。

3讨论

实验以硫酸蒽酮法，对三子养亲汤中多糖含量的测定方法进行了方法学考察，结果证明该测定方法稳定、可行。同时，对三子养亲汤生、炒品配方中的多糖进行了含量测定，结果表明三子养亲汤炒品配方多糖溶出量高出生品配方46.3%，并且两者的换算系数差异较大。提示三子养亲汤方中饮片炒制后更有利于多糖的溶出，并且饮片炮制过程中，部分多糖结构发生变化。但结果需进一步结合单味药炮制前后的多糖变化进行深入分析。

多糖类物质具有多种生物活性，是理想的免疫增强剂，它能激活免疫细胞，提高机体免疫功能。因此认为三子养亲汤除了传统的“祛邪”作用之外，还可能有“扶正”作用，两者协同发挥药效。历代医家多用炒品饮片配方，除增加其中多糖类成分的溶出外，其炮制的内在意义尚有待于深入探讨。

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（收稿日期：2016.03.01）