小儿氨酚黄那敏片中对乙酰氨基酚含量的HPLC测定

[摘要] 目的：建立高效液相色谱(HPLC)法测定小儿氨酚黄那敏片中对乙酰氨基酚含量。方法：采用安捷伦 Eclipse XDB-C18 色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)，甲醇－水(80∶20)为流动相，流速为0.8 ml/min，柱温为30℃，检测波长为249 nm。结果: 对乙酰氨基酚在0.200 5～2.004 8 μg 范围内呈良好线性关系，r=0.999 9，平均回收率为99．82％，RSD为0.23% (n=6)。结论：该法稳定、简便，可用于小儿氨酚黄那敏片的质量控制。

[关键词] 小儿氨酚黄那敏片；高效液相色谱法；对乙酰氨基酚

[中图分类号] R927[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）08（c）-053-02

Determination of Paracetamol in Xiao'er Anfen Huang Namin Tablets by HPLC

GUO Xu-feng,WU Si-qiang,LIANG Jin-hui

(Zhaoqing City Institute of Drug Control, Zhaoqing526040,China)

[Abstract] Objective：To establish an HPLC method for the determination of Paracetamol in Xiao'er Anfen Huang Namin Tablets. Methods： Agilent Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm, 5μm) column was used. The mobile phase consisted of methanol and water(80∶20),the flow rate was 0.8 ml/min,column temperature was 30℃ and wavelength of detecting at 249 nm. Results： The linear range of paracetamol was within 0.200 5～2.004 8 μg, (r=0.999 9), the average recovery was 99.82%, RSD=0.23%(n=6). Conclusion： The method is simple and stable. It can be used for the control of Xiao'er Anfen Huang Namin Tablets.

[Key words] Xiao'er Anfen Huang Namin Tablets; HPLC; Paracetamol

小儿氨酚黄那敏片为复方制剂，组分为每片含对乙酰氨基酚125 mg，人工牛黄5 mg，马来酸氯苯那敏0.5 mg，用于感冒引起的发热、头痛、关节痛、鼻塞等，主要用药对象为15岁以下的少年及儿童。组方中对乙酰氨基酚占比重较大，占95%以上，其90％～95％在肝脏代谢，主要代谢产物为葡糖醛酸、硫酸及半胱氨酸结合物，中间代谢产物对肝脏、肾脏有毒。儿童时期由于肝脏还没有完全发育，其肝药酶活性低，药物代谢受影响，易出现毒副现象。可见对其准确快速测定对保障用药安全意义重大。原药品标准采用分光光度法测定其含量[1]，专属性不强，本文采用高效液相色谱法， 测定该制剂中对乙酰氨基酚的含量，结果简便、快速、准确、重现性好。

1仪器及试药

Agilent 1200高效液相色谱仪（包括安捷伦G1322A四元泵，G1314B可变波长检测器，G1329A自动进样器，G1316A柱温箱），Agilent ChemStation LC化学工作站，Sartorius cp225D电子天平，超声波清洗器(300 W)，对乙酰氨基酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号100018-200408)甲醇为色谱纯，水为超纯水，小儿氨酚黄那敏片（市售）。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(150 mm×4. 6 mm，5 μm)；流动相：甲醇－水(80∶20)为流动相；流速为0.8 ml/min；检测波长：249 nm；柱温：30℃；进样量：10 μl。在该条件下，对乙酰氨基酚色谱峰达基线分离，其理论塔板数(N)大于3 000。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液制备精密称取对乙酰氨基酚对照品50.12 mg，置100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液(0.501 2 mg/ml)。精密量取贮备液3 ml，置25 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于对乙酰氨基酚50 mg)，置50 ml量瓶中，加流动相30 ml超声处理约15 min，冷却至室温并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)，滤过，精密量取续滤液3 ml，置50 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3阴性样品溶液制备取不含对乙酰氨基酚的各种组分及辅料，按制备工艺制得空白试样。取空白试样，按供试品溶液所述方法操作，即得阴性样品溶液。

2.3系统适用性试验

分别取上述三种溶液按色谱条件试验，结果供试品溶液主峰保留时间与对照品溶液一致，阴性样品溶液呈一直线未见干扰峰(图1~3)。

2.4线性关系考察

精密吸取上述贮备液(0.501 2 mg/ml)1，2，4，6，8，10 ml。分别置25 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度。取上述溶液各10 μl注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归，得回归方程：A=44.497 04C+40.257 68，r=0.999 9。结果表明对乙酰氨基酚进样量在0.200 5～2.004 8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5精密度试验

精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样6次。结果峰面积的RSD=0.02％，表明本方法的精密度良好。

2.6稳定性试验

取供试品溶液1份，于室温下放置，每隔0，2，4，6，8，10 h进样测定1次，进样量为10 μl，记录峰面积，RSD＝0.25％，表明样品溶液在10 h内稳定。

2.7重复性试验

取批号070615样品，按含量项下操作平行制备6份样品，进行测定，计算其含量，对乙酰氨基酚平均含量为99.63％，RSD为0.05％。

2.8加样回收试验

精密称取6份已知含量的分成3组，每组分别精密加入对乙酰氨基酚贮备液(0.501 2 mg/ml)3， 5， 10 ml，按供试品溶液的制备方法从“置50 ml量瓶中，加流动相30 ml”起依法制备，进样10 μl，测定峰面积，计算回收率。结果：平均回收率为99.82％，RSD为0.23% (n=6)。

2.9含量测定

取市售不同厂家6批样品，分别按供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液。对照品溶液和供试品溶液各进样10 μl测定，按外标法以峰面积计算含量，即得。6批样品的含量分别为标示量的98.5%，99.6%，101.2%，97.4%，101.7%，99.9%。

3讨论

3.1测定波长的选择

经过笔者反复试验，在249 nm小儿氨酚黄那敏片中各辅料没有吸收，而且人工牛黄中的主要成分胆酸和胆红素在400~800 nm波长处有最大吸收[2]，马来酸氯苯那敏在261 nm波长处有最大吸收。取供试品与对照品溶液在200~300 nm处扫描，均在(249±2) nm波长处有最大吸收。兼顾灵敏度，故选择249 nm作为测定波长。

3.2流动相的选择

选择甲醇-水（80∶20）作流动相，比文献报道[3]的方法更简单，因用酸碱调节pH值，会增加色谱系统波动因素，同时对乙酰氨基酚容易在酸性介质中水解后生成对氨基酚影响测定准确性，选用接近中性流动相较好。流动相中没有盐溶液对色谱柱的损伤，由于流动相中含有金属离子，长期使用或可能因冲洗不净，会影响柱效，加速液相系统老化。本法出峰迅速，峰形好，约2 min完成一次样品分析，能准确快速测定对乙酰氨基酚含量。

[参考文献]

[1]国家药品监督管理局.国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准[S].第三册.2002,50.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典 [S].一部.北京：化学工业出版社，2005.4-7.

[3]王波,王健,董蓬.RP-HPLC测定复方感冒灵片中对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量中成药[J]. 2003,25(7) ：540-543.

(收稿日期：2008-07-28)

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