喜炎平注射液细菌内毒素检查方法的建立

[摘要]目的:建立喜炎平注射液对细菌内毒素检查方法。方法:根据中国药典2005年版二部收载的细菌内毒素检查方法的要求进行实验。应用两个生产厂家的鲎试剂对喜炎平注射液进行干扰试验。结果:喜炎平注射液(1∶40)对细菌内毒素无干扰作用。结论:可以用细菌内毒素检查法(凝胶法)代替家兔热原检查法控制其热原。

[关键词]喜炎平注射液;细菌内毒素;凝胶法

[中图分类号]R927

[文献标识码]B

[文章编号]1006-1959(2009)11-0241-01

喜炎平注射液为穿心莲内酯磺化产物配制而成,具有于清热解毒,止咳止痢作用,临床上用于支气管炎、扁桃体炎,细菌性痢疾等。目前尚未见喜炎平注射液细菌内毒素检查方法的报告。鉴于鲎试剂用于细菌内毒素的检测具有灵敏度高、操作简便的特点,参照中国药典2005年版细菌内毒素检查法[1],本文采用凝胶法对喜炎平注射液进行了细菌内毒素检查试验,现将结果报告如下。

1 实验材料

1.1 试药与试剂:喜炎平注射液(江西青峰药业有限公司生产,批号20070130、20070418、20070803,规格:2ml:50mg,试验前热原检查均符合规定)鲎试剂(TAL)(湛江安度斯生物有限公司生产,批号0608282;湛江博康海洋生物有限公司生产,批号0703160,灵敏度均为0.06EU/ml。试验前二批鲎试剂灵敏度复核均符合检定)。细菌内毒素工作标准品(中国药品生物制品检定所制备,冻干品,批号2007-4,150EU/安瓿)。细菌内毒素检查用水(BET水,中国药品生物制品检定所制备,批号20060012,10ml/安瓿)。

1.2 仪器:自动漩涡混合器(型号:ZH-2,天津药典标准仪器厂),细菌内毒素干式恒温器(型号:DC-3A,南京三爱斯技术开发有限公司),试管、刻度吸管等均经250℃干烤1h除去细菌内毒素。

2 方法与结果

2.1 样品内毒素的限值(L)的确定:本品热原检查的家兔注射量[2](M)为2.0ml/kg,K按规定的给药途径,人用每公斤体重最大可接受的内毒素剂量为5.0EU/kg ,细菌内毒素限值(L)为:L=K•M-1=5.0EU/kg÷2.0ml/kg=2.5EU/ml 。

2.2 喜炎平注射液稀释液浓度的确定:由于喜炎平注射液内毒素的限值L为2.5EU/kg ,所以对应于灵敏度0.5～0.03EU/kg 的鲎试剂,根据公式MVD=LC/λ,求出系列浓度样品溶液,即为5,10,20,40,80。

2.3 干扰试验预试验:将喜炎平注射液用BET水配制成1∶5,1∶10,1∶20,1∶40,1∶80作为供试品溶液(NPC),并配制此系列稀释浓度含2 的供试品阳性液(PPC),即每个稀释液中均含0.125EU/ml 的内毒素标准液,选择两个厂家 为0.06EU/ml的TAL,分别与上述两个系列液反应,同时作阳性(PC)和阴性对照(NC),试验重复两管,结果见表1。

表1结果表明:喜炎平注射液在1∶40稀释浓度时对细菌内毒素检查无干扰作用,故1∶40为最高非抑制浓度。

2.4 供试品的干扰试验:为进一步确证供试品溶液对0.06EU/ml鲎试剂是否存在干扰作用,分别用BET水及1∶40的供试品稀释液将细菌内毒素工作标准品配制为2λ,1λ,0.5λ,0.25λ浓度的系列内毒素溶液,即为0.125,0.06,0.03,0.015EU/ml。并与两个厂家λ为0.06EU/mlTAL反应。同时作供试品稀释液和阴性对照,结果见表2,表明3个批号供试品的E值均在2.0～0.5λ(0.125～0.03EU/ml)之间,无干扰作用。

实验结果表明,喜炎平注射液稀释1∶40时对测定无干扰,可以依法进行试验。

供试品细菌内毒素检查将3批喜炎平注射液分别用细菌内毒素检查用水稀释40倍后,用λ为0.06EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查,结果均符合中国药典对其有效性的规定,结果见表3。

3 讨论

3.1 从以上的实验结果看出,选用鲎试剂灵敏度≤0.06U/kg,用细菌内毒素检查法代替喜炎平注射液热原检查是可行的。

3.2 对供试品进行干扰试验预试验,可以节约鲎试剂、细菌内毒素标准品的用量,而且可以大大减少工作量。

3.3 批喜炎平注射液热原检查符合规定,与细菌内毒素检查结果一致。此实验结果表明细菌内毒素检查法可用于该药品的细菌内毒素检查。