HPLC测定木香顺气丸中柚皮苷的含量

【摘要】目的采用HPLC法测定木香顺气丸中柚皮苷的含量。方法HPLC法，Hypersil C18柱(5μm，4．6 mm×250mm)，流动相：乙腈-水(19：81)，检测波长：284nm，流速：1．0ml-min-1；结果柚皮苷在10．07μg～50．36μg范围内有良好的线性关系，R=0．9999，平均回收率为97．95％，R．SD=1．99(n=5)。结论该方法简便，准确，重现性好，可用于木香顺气丸的质量控制。

【关键词】HPLC；柚皮苷；含量测定；木香顺气丸

【中图分类号】 R927．2

【文献标识码】A

【文章编号】 1673-7555【2007】02-125-02

木香顺气丸由木香、陈皮、枳壳、青皮、厚朴、砂仁、甘草等10味中药组成，收载于《卫生部药品标准・中药成方制剂》第1册．具有行气化湿，健脾和胃之功效[1]。原标准未规定含量限度．为控制木香顺气丸的质量，本文选择方中的枳实、陈皮、青皮所含柚皮苷为定量指标，参照柚皮苷HPLC定量分析方法[2]，研究出适合测定木香顺气丸中柚皮苷的高效液相色谱法。

1仪器与材料

高效液相色谱仪：Waters1525型(美国)，检测器：Waters2487 DualλAbsorbance Detector；超声波震荡器(2160W，40KHZ)；电子天平。柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所提供．批号：110722-200309)；木香顺气丸：贵州百灵企业集团制药有限公司(批号：060903，060618)、贵州安顺制药厂(批号：20000504)。乙腈为色谱纯，水为“娃哈哈”纯水，其它试剂均为分析纯。

2实验方法与结果

2．1溶液的制备

2．1．1供试品溶液的制备取木香顺气丸，粉碎成细粉，精密称取1．0g,置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml,密塞，称定重量，超声提取(功率w，频率kHz)40min,放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量。摇匀，过滤，取续滤液用微孔滤膜f0．45μl滤过，即得。

2．1．2对照品溶液的制备精密称取柚皮苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含20．14μg的溶液，即得。

2．1．3阴性对照液的制备处方中含柚皮苷的药材有含枳实[2]、陈皮[3]、青皮[4]，固按处方比例及制备工艺配制成不含陈皮、青皮、枳实的阴性对照品，并照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。

2．2色谱条件色谱柱：Hypersil C18柱(5μm,4．6 mm ×250mm,大连依力特色谱技术中心)；以乙腈-水(19：81)为流动相；检测波长284nm；流速1．0 mL・minq；进样体积均为5μL，柱温25℃。色谱峰流出曲线见图1。在本色谱条件下，最小分离度R=3．0(R>1．5)，色谱柱的理论板数(n)以柚皮苷峰计，不低于2500。

2．3线性关系考察精密称取柚皮苷对照品。用甲醇制成50．36μg・mL-1的溶液，分别精密吸取1，2，3，4，5μL于5ml容量瓶中稀释至刻度，摇匀，分别注入液相色谱仪，测定峰面积积分值．并以峰面积积分值为纵坐标，进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程：

Y=1．45e+004X+2．05e+003；r=0．999926。

表明柚皮苷在10．07μg～50．36μg范围内有良好的线性关系。

2．4精密度试验精密吸取对照品溶液5μL，注入液相色谱仪。连续进样5次，测定峰面积积分值，计算相对标准偏差。结果RSD为0．270％，表明系统和方法的精密度良好。

2．5稳定性试验精密吸取供试品溶液5μl，每间隔3小时测定一次，结果显示12小时内，溶液中柚皮苷峰面积稳定，RSD为1．26％(n=5)，稳定性较好。

2．6重现性试验精密称取样品(批号：20000504)粉末适量5份，按供试品溶液制备项下方法处理，按上述色谱条件分析测定，柚皮苷平均含量为1．11mg/g，RSD为1．87(n=5)，重现性较好。

2．7加样回收率试验取已知柚皮苷含量(1．11mg/g)的供试品适量(约相当于1．0g)，置具塞锥形瓶中，精密加入柚皮苷对照品甲醇溶液各lmL (浓度1．11mg・mL-1)，微热蒸干。按

2．1．1供试品溶液的制备方法配制供试品溶液并用上述色谱条件进行测定，结果平均回收率为97．95％，RSD为1．99％(n=5)。结果见表1。

2．8样品的测定取不同批次样品，按供试液制各项下方法操作，得供试品溶液，按上述色谱条件分析测定，结果见表2。

3讨论

3．1试验中对色谱条件考察流动相曾用甲醇-水和乙腈-水系统比较，后者峰形对称，杂峰干扰小因此采用本文所采用的流动相。经紫外扫描，柚皮苷在28奈nm有最大吸收，故采用284nm波长检测。

3．2超声时间的考察对超声处理20、30、40分钟制各供试品溶液进行了考察。结果显示，超声处理30分钟和40分钟时，柚皮苷的提取率相近。为保证提取完全，确定超声提取时间为40分钟。

3．3将上述2．1．3项下的阴性对照液5μL注入液相色谱仪，在与供试品相同条件下记录色谱峰的流出曲线，结果见图1，阴性对照在与柚皮苷保留时间相同位置无色谱峰出现。表明对测定结果无影响。

3．4利用液相色谱法测定柚皮苷的含量，方法简便，重复性及精密度好，结果可靠，可作为香木香顺气丸的质控指标之一。