HPLC测定桑菊感冒片中绿原酸的含量

【摘要】目的：建立桑菊感冒片中绿原酸的含量测定方法。方法：采用HPLC法测定绿原酸的含量，色谱柱：Dikma Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（26∶74）；检测波长：326 nm；柱温：30 ℃；流速：0.8 ml/min。结果：绿原酸在0.09~0.9 μg范围内具有良好的线性关系（r=0.9999），平均回收率为98.52%，RSD为0.42%（n=9）。结论：该方法简便、快速、有效、灵敏、准确、具有良好的重复性和回收率，可作为该制剂的定量分析方法。

【关键词】HPLC；桑菊感冒片；绿原酸；含量测定

文章编号：1009-5519（2007）16-2379-03 中图分类号：R28 文献标识码：A

Determination of the content of chlorogenic acid in sangju ganmao tablets by HPLC

ZHANG Lei，HE Bing

(Luzhou Medical College，Sichuan 646000，China)

【Abstract】Objective:To establish a method for the content determination of chlorogenic acid in sangju ganmao tablets.Methods:The content of chlorogenic acid was detected by HPLC.The separation was carried out on a Dikma Kromasil C18 column（250 mm×4.6 mm，5 μm）.The mobile phase was methanol-0.4% phosphoric acid solution（26∶74）；The detective wavelength was set at 326 nm;The column temperature was 30 ℃ and the flow rate was 0.8 ml/min.Results:The calibration curve showed good linearity over the range of 0.09~0.9 μg(r=0.9999).The average recovery was 98.52% with RSD 0.42%(n=9).Conclusion:This method was simple,rapid,efficient,sensitive,accurate and with good repeatability and recovery,it could be used as a quantitative analysis method for this preparation.

【Key words】HPLC；Sangju ganmao tablet；Chlorogenic acid；Content determination

桑菊感冒片源于清代名医吴鞠通的成方“桑菊饮”，是治疗夏季感冒的首选方，治疗效果确切，适用人群广泛。方中桑叶、疏散上焦风热、清肺止咳，为主药；辅以薄荷油助主药疏风解表，杏仁、桔梗清咽宣肺止咳，清咽利膈；佐以连翘清热透表，芦根清热生津止渴；以甘草调和诸药。桑菊感冒片采用优质天然地道中药材，以先进的制药技术精制而成，它采用了大型多能提取罐封闭提取原液，用高效的三效蒸发系统浓缩精练，是古代精方与现代尖端制药技术的完美组合。本文采用高效液相色谱法对方中所含的主要有效成分绿原酸进行了含量测定。该方法比较简单，重现性好，可作为该制剂的质量控制标准。

1 仪器与试药

1.1 仪器：戴安高效液相色谱仪（P680A四元低压梯度泵，PDA-100二型管阵列检测器，TCC-100柱温箱，Chromeleon色谱工作站）；瑞士Precisa电子天平（XR 205SM-DR）；CQX25-06超声波清洗器（上海必能信超声有限公司，功率250 W，频率25 kHZ）。

1.2 对照品：绿原酸（110753-200412），中国药品生物制品检定所提供。在选定色谱分离后按面积归一化法计算含量为99.69%，符合含量限度要求，故含量以100%计算。

1.3 试药：甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯；水为重蒸馏水。

1.4 样品：桑菊感冒片，云南省玉溪市维和制药有限公司，批号：20060612、20060718、20060806。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：色谱柱：Dikma Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇：0.4%磷酸溶液（26∶74）；检测波长：326 nm；柱温：30 ℃；流速：0.8 ml/min；进样量：10 μl。

2.2 对照品溶液的制备：取经五氧化二磷减压干燥至恒重的绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 ml含45 μg的溶液，即得（10 ℃下保存）。

2.3 供试品溶液的制备：取本品细粉约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声处理45分钟，取出，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液取得。

2.4 阴性对照溶液的制备：按处方比例及制备工艺制得不含的阴性对照样品，按“2.3“项下方法制成阴性对照溶液。

2.5 系统适应性试验：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、缺的阴性对照溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1。阴性对照在绿原酸峰处无干扰，绿原酸峰与相邻色谱峰的分离度为2.9，拖尾因子为1.01，理论塔板数以绿原酸峰计为7 784，即本试验条件下绿原酸与其它组份分离完全。

2.6 线性关系考察：分别精密吸取绿原酸对照品溶液（45 μg/ml•ml-1）2、4、6、8、10、15、20 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积值A对进样量C（μg）进行回归，得标准曲线方程：A=24.3385C+0.0339，r=0.9999。结果表明，绿原酸在0.09~0.9 μg范围内，峰面积值与进样量有良好的线性关系。

2.7 精密度试验：精密吸取“2.3”项下的同一供试品溶液10 μl，按上述色谱条件连续进样5次，记录绿原酸的峰面积，其RSD为0.16%。表明仪器精密度良好。

2.8 稳定性试验：取“2.3”项下的供试品溶液，分别于制备后0、2、4、6、8、10、12、24小时精密进样10 μl，记录绿原酸的峰面积，其RSD为1.62%，表明供试品溶液在24小时内稳定。

2.9 重复性试验：取同一批号样品（20060612），按“2.3”项下方法，制得5份供试品溶液，分别精密进样10 μl，测得绿原酸的平均含量为0.337 mg/片，RSD为0.26%。表明本方法重现性良好。

2.10 加样回收试验：精密称取已知含量的本品细粉9份，每份约1.0 g，分成3组，每组3份，分别精密添加绿原酸对照品溶液（0.224 mg/ml）2，3，4 ml，照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，并计算回收率。试验结果见表1。

试验结果表明，本法具有良好的回收率。

2.11 样品测定：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，按上述色谱条件测定并计算绿原酸的含量，结果见表2。

3 讨论

3.1 试验中针对配制供试品溶液的不同提取方法（超声、回流及溶剂萃取），不同提取溶剂（甲醇、75%甲醇、50%甲醇、25%甲醇、水和流动相），不同溶剂体积（10、25、50、75、100 ml）及不同提取时间（15、30、45、60 min）分别考察。结果以50 ml 50%甲醇超声提取45分钟含量最高，杂质峰较少。

3.2 在流动相选择试验中，考察乙腈∶0.4%磷酸溶液（12∶90）[1]；乙腈∶水∶冰乙酸（10∶90∶1）[2]；甲醇∶水∶冰乙酸（20∶80∶1）[3]；甲醇∶0.4%磷酸溶液（26∶74）等的不同比例、流速及柱温。试验表明流动相以甲醇∶0.4%磷酸溶液（26∶74），流速为0.8 ml/min，柱温为30 ℃时保留时间适宜，分离效果最理想。

3.3 是该方的君药，绿原酸又是中的主要有效成分。因此以绿原酸作为含量测定成分，对控制该制剂的质量是非常必要的。实验采用HPLC测定桑菊感冒片中绿原酸的含量，结果准确可靠，精密度好，具有良好的重复性和回收率，可用于该制剂中绿原酸的质量控制。

参考文献：

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[2] 廖朝峰，胡志军，吴青萍，等.高效液相色谱法测定金莲抗病毒口服液中绿原酸含量[J].中国医院药学杂志，2005，25（3）：240.

[3] 张丽萍.高效液相色谱法测定银翘伤风胶囊中绿原酸的含量[J].中国医院药学杂志，2005，25（7）：633.

收稿日期：2007-04-24