HPLC法测定决明降脂片中维生素C的含量

[摘要] 目的:采用HPLC法测定决明降脂片中维生素C的含量。方法:色谱柱为大连依利特Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相为1%磷酸,流速为0.8 ml/min,检测波长为244 nm。结果:维生素C的线性范围为0.089～0.801 μg(r=1.000 0),平均回收率为99.99%,RSD为0.08%。结论:本法操作简便、方法准确、重现性好,可用于该制剂的质量控制。

[关键词] 决明降脂片;HPLC法;维生素C;含量测定

[中图分类号]R927.2 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2009)08(a)-070-02

Determination of Vitamin C in Jueming Jiangzhi Tablets by HPLC

ZHAO Chengguo1, QIN Shuzhi1, YU Yan2

(1.Department of Chemistry and Pharmacy, Zhuhai College, Jilin University, Zhuhai 519041, China; 2.Tonghua Institute for Food and Drug Control, Tonghua 134000, China)

[Abstract] Objective: To establish a method for the determination of Vitamin C in Jueming Jiangzhi Tablets. Methods: A Hypersil BDS C18 column(4.6 mm×200 mm,5 μm) was used with a mobile phase of 1% phosphoric acid, the flow rate was 0.8 ml/min, the detection wavelength was set at 244 nm. Results: The standard curves was linear in the rang of 0.089-0.801 μg(r=1.000 0), the average recovery was 99.99% with a RSD of 0.08%. Conclusion: The method is simple, accurate and reproducible, and is suitable for quality control of this tablets.

[Key words] Jueming Jiangzhi Tablets; HPLC; Vitamin C; Content determination

决明降脂片[1]由决明子、茵陈、何首乌、桑寄生、维生素C、 维生素B2、烟酸七味药组成,用于治疗冠心病或慢性肝炎所引起的高血脂、血清胆固醇增高症。该品种为中西药结合的复方制剂,已收载于卫生部药品标准《中药成方制剂》第八册。维生素C具有增强机体免疫能力、清除自由基、降低脂质过氧化、改善新陈代谢和参与解毒等功效,因此本产品中维生素C应作为质量标准中的重要指标之一[2],但原标准中无定量指标。本文采用HPLC法对该品种中维生素C进行了含量测定,结果表明本法操作简便、方法准确、重现性好,可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津LC-2010AHT型高效液相色谱仪;日本岛津UV-1700型紫外分光光度计。

1.2 试药

决明降脂片(通化正合药业,批号为060101、060102、060103);维生素C对照品(中国药品生物制品检定所,批号为100425-200301,供含量测定用);甲醇为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为大连依利特Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×200 mm,5 μm);流动相为0.1%磷酸;流速为0.8 ml/min;检测波长为244 nm;柱温为室温。理论塔板数按维生素C峰计算应不低于6 000。色谱图见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备取维生素C对照品适量,置棕色容量瓶中,加2%偏磷酸溶液制成每毫升含0.1 mg的溶液,即得。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品10片,除去包衣,精密称定,研细,取约0.4 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入2%偏磷酸溶液100 ml,称定重量,超声处理40 min,放冷,再称定重量,用2%偏磷酸溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得(整个过程应闭光操作)。

2.3 阴性对照试验

为进一步考察试验的合理性,取不含维生素C的阴性对照样品,依正文所述方法进行测定。结果显示,阴性样品色谱图在与维生素C峰相应的保留时间附近无干扰峰检出,从而证明本方法合理、可行。

2.4 线性关系考察

精密称取维生素C对照品适量加2%偏磷酸溶液制成每毫升含89 μg的溶液,分别精密吸取1、3、5、7、9 μl测定,以进样体积为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,结果维生素C在0.089～0.801 μg范围内呈良好的线性关系,回归方程为Y=9.358 25×105X+2.811×103,r=1.000 0。

2.5 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液5 μl,注入液相色谱仪,连续进样6次,维生素C峰面积的平均值为410 847,其RSD为0.73%,表明本法精密度良好。

2.6 稳定性试验

分别精密吸取同一供试品溶液5 μl,于0、1、2、3、5 h注入液相色谱仪,得维生素C峰面积的平均值为391 988,其RSD为0.50%,表明溶液在5 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取同一供试品(060101)6份,按“2.2.2”项下方法制备成供试品溶液,分别测定,结果维生素C的平均含量为标示量的96.15%,其RSD为0.52%,表明本法重复性良好。

2.8 回收率试验

精密称取已知含量的供试品(批号为060101,含量为 8.08 mg/片)6份,分别精密加入对照品溶液(0.089 mg/ml)50 ml,按“2.2.2”项下方法制得供试品溶液。依法测定,结果见表1。

表 1 回收率试验结果

Tab.1 Recovery test results

2.9 样品含量测定

取3批样品,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,依上述色谱条件测定含量,结果见表2。

表 2 样品中维生素C含量测定结果(n=4,%)

Tab.2The content of Vitamin C of the sample(n=4,%)

3 讨论

取维生素C对照品的2%偏磷酸溶液,经UV-1700型紫外分光光度计在200～400 nm范围内测定,得出维生素C在243.5 nm波长处有最大吸收,故选择244 nm为测定波长。

笔者先后采用了乙腈-水[3],乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液不同比例作为流动相[4-6],均不能得到理想的峰形,经大量筛选,最终采用了0.1%磷酸作为流动相[7-8],结果分离效果较好、保留时间适度,因此,确定其为本法的流动相。

根据维生素C在酸性环境中稳定性较强和对光不稳定的性质[9-10],笔者选用了2%偏磷酸作为溶剂进行超声提取40 min,作为供试品溶液的制备方法。供试品溶液中维生素C的含量基本稳定,因为样品在制备8 h后,样品峰面积值为353 448,衰减约7%;样品在制备24 h后,样品峰面积值为297 810,衰减约21%,所以本实验应尽可能在5 h内完成。

[参考文献]

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(收稿日期:2009-05-05)