HPLC法测定维他参颗粒中维生素B1的含量

【摘要】 目的 建立维他参颗粒中维生素B1含量测定方法，为维他参颗粒质量标准的研究提供科学依据。方法 采用高效液相色谱法测定维他参颗粒中维生素B1的含量。色谱条件为Agilent XDB-C18（5 μm 150 mm×4.6 mm）色谱柱，以乙腈-0．008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0．25∶0．75）为流动相；检测波长为246 nm。结果 此方法线性良好，平均加样回收率为99．8%， RSD为2．0%。结论 本方法精密度高，分离度良好，可用于测定维他参颗粒中维生素B1的含量。

【关键词】 高效液相色谱法；维他参颗粒；维生素B1

Determination the content of Vitamins B1 in In Weitashen Granules by HPLC DUAN Guang-zhen,LIU Wei,WANG Hai-bo et al.Anshan Pharmaceutical co.，LTD 114014,China.

【Abstract】 Objective To establish the method for determining the content of Vitamin B1 in Weitashen Granules.Method Determining the content of Vitamin B1 by HPLC, chromatographic condition XDB-C18 5μm 150mm×4．6 mm column, the mobile phase was Acetonitrile -0．008mol/L sodium 1-hexanesulfonate-thiethylamineglacid-acetic acid （12∶87∶0．25∶0．75）,detection wavelength at 246nm.Results The average recovery was99．8% ,relared standard deviation(RSD) was 2．0% .Conclution This method can be used to determine the content of Vitamin B1 in Weitashen Granules.

【Key words】 HPLC; Weitashen Granules ; Vitamin B1

本方中含人参、山楂及多种维生素组成，维生素B1为本方的主要有效成分,为有效控制其质量，本文采用HPLC法测定其中维生素B1含量，经方法学考查，其精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合

要求。

1 仪器与试药

维生素B1对照品（100390-200301,供含量测定用）购于中国药品生物制品检定所，纯度大于98．5%。维他参颗粒自制，Agilent 1100 series高效液相色谱仪（G1311A Quat Pump ，G1314A VWD ，G1379A DEGASSER）；Agilent 1100工作站；CP225D (sartorius)十万分之一天平；AS3120A超声波清洗器；U-3010紫外可见双光束扫描分光光度计。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水；其它试剂均为分析纯。

2 实验条件

2．1 色谱条件的选择 色谱柱：Agilent XDB- C18（5 μm 150 mm×4．6 mm）流动相：乙腈-0．008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0．25∶0．75）。检测波长：246 nm；柱温：30℃；流量：1 ml/min；理论塔板数按维生素B1对照品峰计算不少于5 000。

2．2 测定波长的选择 取少量维生素B1的标准品溶液，稀释，置U-3010紫外可见双光束扫描分光光度计下于200～400 nm波长下扫描，在246 nm处有最大吸收，故选择246 nm作为HPLC的测定波长。

2．3 流动相的选择 经参阅文献，分别对甲醇-0．05mol/lKH2PO4磷酸溶液（14∶86，pH3．0）、甲醇-0．008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（107∶500∶0．12∶4．6）、乙腈-0．008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0．25∶0．75）、乙腈-0．008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（5∶93．92∶0．21∶0．87）四种流动相系统进行筛选，结果维生素B1在乙腈-0．008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0．25∶0．75）流动相条件下达到基线分离，峰型对称，维生素B1的阴性对照液无干扰。故确定维生素B1流动相为乙腈-0．008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0．25∶0．75）。

2．4 对照品溶液制备 精密称取维生素B115．76 mg，置100 ml量瓶中，以乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取3 ml, 置50 ml量瓶中，以乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml含维生素B10．009 456 mg的溶液。

2．5 线性关系考察 精密吸取维生素B1对照品溶液2、4、6、8、10μL进样，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样量X为横坐标、峰面积值Y为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=2115．60X+8．85，r=0．9 999，结果表明，维生素B1进样量在0．0 788～0．3 940 μg范围内线性关系良好。

2．6 供试品溶液制备 取本品装量差异项下的内容物，研细，取0．5 g，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液25 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3 方法学考察

3．1 精密度试验 精密吸取供试品溶液10 μl，重复进样5次，测得峰面积，维生素B1积分值的相对标准偏差1．1%，表明仪器精密度良好。

3．2 稳定性试验 精密吸取供试品溶液10 μL，在0、2、4、8、12 h各进样10μl，测其峰面积，维生素B1积分值的相对标准偏差为0．6%，说明样品在12 h内稳定。

3．3 重复性试验 精密称取供试品5份，每份约0．5 g，照供试品溶液制备方法制备，每次进样10μl，测维生素B1含量，结果维生素B1含量相对标准偏差为2．3%，表明方法重复性较好。

3．4 加样回收率 取已知维生素B1含量的样品（0．48 mg/g），研细，取5份样品，每份0．25 g，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入维生素B1对照品溶液3 ml（浓度为0．0394 mg/ml），再精密加入乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液22 ml，按供试品溶液制备方法操作并进行含量测定，求得平均回收率分别为98．8%；相对标准偏差RSD为2．1%。（见表1）。

4 样品的测定 分别取10批样品，按上述色谱条件进行测定，结果见表2。

5 小结与讨论

5．1 十批维他参颗粒样品测定结果表明，维生素B1最低含量0．39 mg/g，最高含量为0．58 mg/g。暂定本品每袋含维生素B1应为1．75～3．25 mg。

5．2 流动相乙腈-0．008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸的比例对分离的影响较大，乙腈的比例小于10%时，维生素B1对照品与供试品的色谱峰保留时间相对延长，但色谱峰分解为双峰，流动相乙腈-0．008mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸的比例为12；87∶0．25∶0．75时，维生素B1峰形对称，达到基线分离。故该比例为测定维生素B1含量的最佳比例。（见图1-2）。

参考文献

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