HPLC 法测定复合维生素B片中B族维生素的含量

摘要：目的：建立检测复合维生素B片的质量标准。方法：采用高效液相色谱法来对复合维生素B片中的烟酰胺、维生素B。维生素B2、维生素B6进行定性和定量分析。结果 烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生索B6平均回收率分别为烟酰胺：99.2%（RSD=0.77%）；维生素B1： 100.3%（RSD=0.87%）；维生素B2：99.9%（RSD=1.04%）；维生素B6：100.1%（RSD=0.65%）。结论：该方法准确.灵敏度高，重现性好，可作为复合维生素B片的质量控制方法。

关键词：高效液相色谱法；维生素；复合维生素B片

【中图分类号】R917【文献标识码】A【文章编号】1674-7526（2012）08-0283-02

复合维生素B片是由维生素B1、维生素B2、烟酰胺、维生素B6和泛酸钙组成。用于预防和治疗B族维生素缺乏所致的营养不良、厌食、脚气并糙皮病等。维生素B1是糖代谢所需辅酶的重要组成成份。维生素B2为组织呼吸所需的重要辅酶组成成份，烟酰胺为辅酶I及II的组分，脂质代谢，组织呼吸的氧化作用所必需。维生素B6为多种酶的辅基，参与氨基酸及脂肪的代谢。泛酸钙为辅酶A的组分，参与糖、脂肪、蛋白质的代谢。均为维持机体正常代谢和身体健康必不可少的重要物质。该品种收载于卫生部药品标准化学药品及制剂第一册，没有建立四种维生素同时通过HPLC法进行含量测定的方法[1]。本文建立了一种采用高效液相色谱方法同时测定B族维生素含量的方法。样品处理简单，方法准确，灵敏度高，可作为复合维生素B片的质量控制方法。

1仪器与试药

Waters 1225 高效液相色谱仪，烟酰胺对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100115-200703，含量99.9%），维生素吡哆辛（中国药品生物制品检定所，批号：100116-200502），维生素B1（中国药品生物制品检定所，批号：100090-200502），维生素B2（中国药品生物制品检定所，批号：100369-200502）；庚烷磺酸钠为分析纯，冰醋酸、三乙胺和甲醇均为色谱纯；复合维生素B片（自制：批号分别为20101001、20101002和20101003）。

2方法与结果

2.1色谱条件的选择。色谱柱：Boston Green ODS C18（250mm x4.6mm，5μm）；流动相：甲醇一庚烷磺酸钠溶液（庚烷磺酸钠0.6g+三乙胺1.0mL+冰乙酸6.0mL+水至1000mL）（20：80，用2M NaOH调节pH至3.80）；检测波长为280nm，柱温：30℃，流速1.0mL・L-1。

2.2溶液的制备：对照品溶液的制备：避光操作。精密称取烟酰胺对照品约50mg，维生素B1对照品15mg，维生素B2对照品7.5mg，置500mL棕色容量瓶中，加5%冰醋酸溶液超声溶解15～20min，放冷至室温，精密加入维生素B6对照品溶液（精密称取盐酸吡哆辛对照品10mg置50mL棕色容量瓶中，加5%冰醋酸溶液超声溶解15～20min，放冷至室温，用5%冰醋酸溶液稀释至刻度）5mL，用5%冰醋酸溶液稀释至刻度，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液备用。

供试品溶液的制备：避光操作。取20片精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当1片量），置50mL棕色容量瓶，加5%冰醋酸溶液适量，超声15～20min，放冷至室温，用5%冰醋酸溶液稀释至刻度，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3系统适用性试验：取对照品溶液及供试品溶液在上述色谱条件下测定，理论板数均应不低于2000，各相邻峰之间的分离度大于1.5。

2.4专属性考察：按处方比例及工艺自制分别缺烟酰胺、维生素B1、维生素B2和维生素B6之中一种的阴性溶液、对照品溶液及供试品溶液各20μL进样，结果（见图1-6），由图可见，在上述色谱条件下，烟酰胺、维生素B1、维生素B2和维生素B6峰分离良好，空白辅料对样品测定无干扰，本法具有良好的专属性。

2.5线性关系考察：精密称取精密称取烟酰胺对照品约400mg，盐酸吡哆辛对照品8mg，维生素B1对照品125mg，维生素B2对照品60mg，置200mL棕色容量瓶中，加5%冰醋酸溶液超声溶解15～20min，放冷至室温，用5%冰醋酸溶液稀释至刻度作为贮备液。精密量取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0mL，置100mL棕色容量瓶中，加5%冰醋酸溶液稀释至刻度，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液进样20μL。以峰面积（A）为纵坐标，以浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线：烟酰胺：A=2344.3C+12365，r=0.9993，n=3；维生素B1：A=13891C+11990，r=0.9993，n=3；维生素B2：A=49003.316C+37112.365，r=1.0000，n=3；维生素B6，：A=27074C+13357。r=0.9993.n=3；结果表明：烟酰胺在：41.02～369.18μg・ml-1；维生素B1在12.45～112.06μg・ml-1；维生素B2在 6.152～55.37μg・ml-1；维生素B6在08140～7.326.18μg・ml-1范围内均呈良好的线性关系。

2.6精密度试验：精密吸取对照品溶液20μL，重复进校6次，计算各峰面积。烟酰胺、维生素B1、维生素B2和维生素B6的RSD分别为1.72%、0.81%、1.15%和1.40%，表明色谱系统精密度良好。

2.7重复性试验：精密称取供试品6份，按“2.2”项方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，根据各峰面积计算，烟酰胺、维生素B1、维生素B2和维生素B6的RSD分别为0.79%、181%、1.55%和1.12%，表明方法具有良好的重复性。