HPLC法测定复合维生素B片中四种成分的含量

[摘要]目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定复合维生素B片中烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2 四种成分的含量。方法：采用 C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为0.005 mol/L己烷磺酸钠-甲醇-冰醋酸（70∶30∶0.5）；流速为1.0 ml/min；检测波长：278 nm；柱温30℃。结果：烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2分别在100.92~605.52、21.24~127.44、97.88~587.20，42.13~126.38 μg/ml范围内呈良好的线性关系。结论：本方法简便、快速，可用于复合维生素B片的质量控制。

[关键词]高效液相色谱法；复合维生素B片；烟酰胺；维生素B6；维生素B1；维生素B2；含量

[中图分类号]R917[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）11（a）-095-02

Contents determination of the four components in Compound Vitamin B Tablets by HPLC

WU Fang,XU Hong-yan

(Shanghai Songjiang Institute for Food and Drug Control,Shanghai 201600,China)

[Abstract]Objective:To establish a HPLC method for contents determination of the four components in Compound Vitamin B Tablets. Methods: The HPLC system consisted of C18 column(150 mm×4.6 mm,5 μm), 0.005 mol/L sodium hexane sulfonate-methanol-glacial acetic acid(70∶30∶0.5) as the mobile phase with the flow rate of 1.0ml/min ,and 278 nm as the detective length.Results:The linear ranges of nicotinamide,vitamin B6,vitamin B1 and vitamin B2 were 100.92~605.52,21.24~127.44,97.88~587.20，42.13~126.38 μg/ml respectively.Conclusion:This method is simple,rapid and it can be used for the qulity control of Compound Vitamin B Tablets.

[Key words]HPLC; Compound Vitamin B Tablets; Nicotinamide;Vitamin B6;Vitamin B1; Vitamin B2;Contents

复合维生素B片是由烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2四种成分组成的复方制剂。主要用于营养不良、脚气病、厌食、癞皮病和各种维生素B缺乏所致的疾病。该药品的质量标准收载于卫生部药品标准，其中对维生素B1、维生素B2、烟酰胺采用不同方法进行质量控制，操作烦琐且耗时。为此，我们建立了用HPLC法同时分离测定这四种成分的方法，结果显示该方法简便、快速、准确、可靠。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪；己烷磺酸钠、冰醋酸均为分析纯；甲醇为色谱纯；烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2对照品均购自中国药品生物制品检定所；复合维生素B片（中美合资上海辛帕斯制药有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Phenomenex C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.005 mol/L己烷磺酸钠-甲醇-冰醋酸（70∶30∶0.5）；流速1.0 ml/min；检测波长278 nm；进样量10 μl；柱温30℃。

2.2 系统适应性试验

按含量测定项下的方法记录色谱图，计算烟酰胺、维生素B6、维生素B1和维生素B2的理论塔板数，分别为8 146、8 502、9 368和7 638，相互之间的分离度分别为6.36、10.56、4.89，色谱图见图1。

2.3 线性关系考察

精密称取烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2对照品适量，置于同一50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。再分别精密吸取2、4、6、8、10、12 ml，分别置于20 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度标准溶液。分别进样，记录峰面积，以峰面积（A）对浓度（C）进行回归，得到回归方程。烟酰胺为：A＝2.838 72C+30.354 50，r＝0.999 9；维生素B6为：A＝13.538 12C-2.571 56，r＝1.000 0；维生素B1为：A＝10.445 21C+16.807 20，r＝1.000 0；维生素B2 为：A＝20.851 60C-1.937 18，r＝0.999 9。

2.4 回收率试验

分别精密称取烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2对照品36.27、10.88、48.50、10.61 mg置同一50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称取已准确测定含量的样品适量（约相当于1片的重量）9份，分别置50 ml容量瓶中，加水适量使之溶解，再分别加入上述对照品溶液6、6、6、8、8、8、12、12、12 ml，加水稀释至刻度，摇匀，照样品测定项下测定，计算回收率，结果见表1。

2.5 精密度试验

取同一供试品连续进样4次，测得烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2的RSD分别为0.18％、0.14％、0.13％、0.14％。

2.6 重复性试验

取批号为061201供试品6份，按照样品含量测定项下方法测定，计算各成分的含量，结果烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2的RSD分别为0.56％、1.06％、0.07％、0.90％。

2.7 样品含量测定

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于1片量），置25 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液进样，按外标法定量，分别计算各成分含量，结果见表2。

3 讨论

我们曾采用在流动相中不加冰醋酸，结果分离度及峰型并不理想，流动相比例的影响较为重要，刚开始采用0.005 mol/L己烷磺酸钠-甲醇（85∶15），结果出峰时间大大推迟，后来经过不断调整，即考虑四组分得到完全分离又使峰型美观，最终采用了此文的流动相，而且整个分析过程在8 min内完成。

复合维生素B片中有四种主要成分，其中烟酰胺、维生素B6、维生素B1相对比较稳定。而维生素B2对光比较敏感，见光易分解，因此整个分析过程采用避光操作。

[参考文献]

[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准化学药品及制剂[S].1989.94.

[2]李艳.小儿康糖浆中的4种维生素的含量测定[J].中国药品标准,2004,5(6):26-28.

（收稿日期：2007-08-23）

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