HPLC法测定妇康胶囊中盐酸水苏碱的含量

【摘要】目的:建立妇康胶囊中水苏碱的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,EC 250/4.6 NUCLEOSTL,100-5 SA柱,以0.05mol.L-1磷酸二氢钾―乙晴―三乙胺(100:2:0.1)(以磷酸调pH值至2.3)为流动相。结果:水苏碱在0.344～5.500μg范围内呈良好的线性关系。R=0.9999,回收率为99.2%。结论:该方法简单、灵敏、准确。

【关键词】妇康胶囊;益母草;盐酸水苏碱;高效液相色谱法

【中图分类号】R917【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)10-084-1

1仪器、试剂与药品

1.1SSI液相色谱仪,分析之星色谱工作站;sartoriusBP211D电子天平;JL―180DTH超声波清洗器。

1.2盐酸水苏碱对照品为中国药品生物制品检定所提供(批号712-200105供含量测定用);妇康胶囊(成都圣洪生物科技有限公司);缺益母草阴性对照品(由成都圣洪生物科技有限公司提供);甲醇为色谱醇;水为重蒸馏水;其余试剂为分析纯。

2试验方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为EC 250/4.6 NUCLEOSTL,100-5 SA柱,0.05mol.L-1磷酸二氢钾―乙晴―三乙胺(100:2:0.1)(以磷酸调pH值至2.3)为流动相;流速为0.8ml/min;检测波长为192nm。

2.2试验用溶液的制备

对照品溶液的制备精密称取盐酸水苏碱对照品适量,置容量瓶中,加30%的甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。

供试品溶液的制备取本品装量差异检查项下的内容物,研细,取约2.0g,精密称定,置烧瓶中,精密加乙醇50ml,称定重量,回流提取1小时,取出放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液25ml,通过氧化铝―活性碳柱(中性氧化铝3g,湿法装柱,上层用活性碳1g,乙醇预洗),用乙醇90ml洗脱,洗脱液蒸干,残渣用30%的甲醇溶解定容于10ml容量瓶中,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。

2.3阴性样品溶液的制备

取不含益母草的样品,同供试品溶液制备方法项下制备。

2.4阴性干扰性试验

在选定的色谱条件下,分别精密吸取对照品溶液、样品溶液和缺益母草阴性样品溶液各10ul注入液相色谱仪,理论塔板数(N)按水苏碱峰计算在5000以上。水苏碱的保留时间约为7min,阴性样品在对照品位置无干扰峰,色谱图分别见A、B、C。

A.对照品 B.供试品C.阴性样品

2.5标准曲线的绘制精密称取盐酸水苏碱对照品适量,加30%甲醇制成不同浓度的对照品溶液,摇匀,作为对照品溶液,分别精密进样10µl,其进样量为0.344µg、0.688µg、1.375µg、2.75µg、4.125µg、5.5µg,按色谱条件进行分析,测定峰面积,并以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归,得标准曲线方程为:A=1.3456×105C+1.8752×103,r=0.9999。以峰面积值(A)对进样量(C)作图,得一直线,结果表明在0.344～5.50μg范围内与峰面积呈很好的线性关系。

2.6精密度试验精密吸取盐酸水苏碱对照品溶液(0.1375mg

/ml)10µl,连续进样5次,测得盐酸水苏碱对照品峰面积RSD%为0.85%。

2.7稳定性试验取样品(批号051001),制备供试品溶液,分别于不同时间进样,结果表明样品在16小时内测定较稳定。

2.8重复性试验取样品(批号051001),分别制备5份供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,盐酸水苏碱的平均含量为1.66mg/g,其RSD%=1.17%,方法重复性较好。

2.9回收率试验精密称取样品(样品批号为051001,含量平均值为1.66mg/g)适量,6份,分别精密加入盐酸水苏碱对照品溶液,按上述色谱条件进行测定,平均回收率为99.2%,RSD=0.61%,表明回收率的试验较好。

2.10样品的含量测定取3批样品,依法制成供试品溶液10ul,随行对照溶液10进样,分别测定吸收峰面积,按外标法计算样品的含量。

3讨论

3.1流动相的选择

依据文献,本实验曾试用了多种流动相[1.2],并比较了0.05mol.L-1磷酸二氢钾―三乙胺、0.05mol.L-1磷酸二氢钾―乙晴―三乙胺、0.1mol.L-1磷酸盐溶液(1.0mol.L-1磷酸二氢钠溶液用0.1mol.L-1用磷酸氢二钠溶液调节Ph至5.5)等流动相,结果显示,以0.05mol.L-1磷酸二氢钾―乙晴―三乙胺(100:2:0.1)(以磷酸调pH值至2.3)为流动相效果较佳,故选择其为流动相。

3.2水苏碱峰形影响因素

样品的进样量越大,其峰形拖尾较为严重,样品的分离较差,流动相中加入三乙胺可以改变峰形的对称性,而加入磷酸调PH值对峰形有较大的影响。PH大于2即可,试验中选择PH为2.3即可。

3.3样品的提取净化

高效液相测定样品中的水苏碱成分,关键问题在于样品的纯化处理,试验中虽有不同的关于盐酸水苏碱的样品纯化处理,如有的采用雷氏盐沉淀法,其方法较繁琐,不利于样品操作,试验重复性较差,也有采用过强酸性阳离子交换树脂吸附,但样品不纯,也不利于盐酸水苏碱的检测,试验中以过氧化铝―活性碳柱能很好的解决以上问题,所制得的样品较纯,杂质峰较少,在紫外末端能很好的检测到。

参考文献

[1] 贺东兵.HPLC法测定前列康胶囊的含量[J].安徽医药,2005,9(1):46-47.

[2] 徐优晓,朱晓燕,蔡进章.HPLC法测定益母草颗粒中水苏碱的含量[J].海峡药学,2005,17(2):73-74.