不同枣品种的RAPD分析

摘要：采用RAPD分子技术对11个枣（Ziziphus jujube Mill.）品种进行遗传关系鉴定。结果表明，12个引物共扩增出70条谱带，平均每个引物扩增出5.83条；其中多态性条带57条，多态性比例为81.4%。聚类分析结果表明，11个品种中，野枣与其他10个品种亲缘关系较远，其次是台湾青枣；龙枣与沾化冬枣、胎里红与以色列枣、灰枣与酸枣之间亲缘关系较近。

关键词：枣（Ziziphus jujube Mill.）；RAPD；遗传多样性

中图分类号：S665.1；Q7 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）01-0114-02

RAPD Analysis of Different Ziziphus jujuba Mill. Varieties

DIAO Yi1，2，HAN Hong-bo1，JIANG Jian1，ZHENG Yi1

（1.College of Biological and Chemical Engineering， Panzhihua University， Panzhihua 617000， Sichuan， China；

2.School of Life Science and Technology， University of Electronic Science and Technology of China， Chengdu 610000，China）

Abstract： The genitic relationships of eleven Ziziphus jujuba Mill. varieties were studied by RAPD technique. 70 DNA fragments were amplified with 12 random primers. The polymorphic DNA fragments were 57， accounting for 81.4% of 70 fragments. Cluster analysis showed that Yezao had farther relationship with other ten Ziziphus jujuba Mill. varieties， Taiwanqingzao was the next variety. There were close relationships between Longzao and Zhanhuadongzao， Tailihong and yiseliezao， Huizao and Suanzao.

Key words： Zizyphus jujuba Mill.； RAPD； genitic diversity

收稿日期：2013-05-20

基金项目：攀枝花市科技局项目[2012CY-S-22（9）]

作者简介：刁 毅（1975-），男，四川南部人，副教授，硕士，主要从事植物病理方面的研究，（电话）13037717160（电子信箱）。

枣（Ziziphus jujube Mill.）属于鼠李科（Rhamnaceae）枣属植物，是经济价值比较高的植物。枣营养丰富，含有丰富的多糖、蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、有机酸及微量元素。枣具有较好的药理作用，具有增强睡眠、保护肝脏、提高免疫力、调节内分泌等作用。枣中还含有丰富的安全无毒天然色素，广泛用于食品、医药、化妆品等方面[1]。我国枣树品种繁多，目前栽培品种达700余个，但在枣的分类中多以形态、用途、分布等进行分类命名，并且，传统外观形态鉴别难以有效鉴别枣树。

通过采用分子标记技术鉴别枣树，可以快速鉴别枣树品种。RAPD分子标记技术即随机扩增多态性技术，是以DNA为模版，利用10个核苷酸引物进行基因组DNA PCR扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳将DNA条带分离显示出来，以检测其多态性[2]。

1 材料与方法

1.1 供试材料

供试材料有：安国枣、龙枣、沾化冬枣、野枣、胎里红、灰枣、酸枣、京39号、新京14号、以色列枣、台湾青枣，采自攀枝花市银江安国枣业有限公司和干热河谷特色生物资源种植园。采集幼嫩叶片后，放于冰盒中带回实验室，-80 ℃冰箱保存备用。

1.2 DNA的提取

采用改进的CTAB法，从幼嫩叶片中提取基因组DNA[3-5]。

1.3 RAPD-PCR反应体系

扩增所用的40个引物，由北京三博远志生物技术有限责任公司合成。PCR反应体系为25 μL，其中包括25 mmol/L MgCl2 2 μL，10×PCR缓冲液2.5 μL，10 ng/μL引物1 μL，50 ng/μL DNA 2 μL，2 mmol/L dNTP 2 μL，5 U/μL Taq DNA聚合酶0.3 μL，双蒸水15.2 μL。

1.4 PCR反应程序

反应程序为：94 ℃ 2 min，1个循环；94 ℃ 30 s，37 ℃ 40 s，72 ℃ 60 s，40个循环；72 ℃ 10 min；4 ℃保温10 min。

1.5 琼脂糖凝胶电泳

PCR产物经1%琼脂糖凝胶（含EB 0.5 μg/mL），在1×TAE电泳缓冲液中电泳分离，在凝胶成像系统中观察，照相。

1.6 数据分析

每次试验2次重复，2次重复出现相同的扩增条带用作特征带来分析。11个枣的DNA电泳图谱上的每条带为一个分子标记，将迁移率相同的带作为同源条带处理。在读条带时，只记录容易辨认的条带，排除模糊不清的条带；有带的记为1，无带的记为0，用NTsys 2.10e软件进行聚类分析。

2 结果与分析

2.1 RAPD分子标记扩增结果

从40个引物中筛选出12个扩增条带多、信号强、背景清晰的引物进行PCR扩增反应。利用RAPD引物对11个枣品种的DNA进行PCR扩增，结果见表1。由表1可以看出，12个随机引物在11个枣品种中共扩增出70条带，其中57条带具有多态性。平均每个引物扩增出5.83条带，多态性比例为81.4%。图1和图2分别为引物OPE01和S8对不同枣品种DNA的扩增结果。不同引物扩增出的DNA总带数和多态性带数差异较大。扩增出带数最多的引物是OPE01，带数最少的是S68；多态性带数较多的引物有OPE01、OPE09、S8、S25和S130，较少的引物有S68。多态性比例较高的有OPE09、S8、S61、S130，均达到100.00%。12个引物在11个品种枣间均产生特征性谱带，具有良好的重复性。

2.2 聚类分析

11份供试材料聚类分析结果见图3。在遗传距离为0.510 0时，可将11个枣品种分为2组。第一组为4号，其单独为一类；其他10个枣品种为第二组，其遗传距离为0.083 8～0.332 6。在第二组中，当遗传距离为0.332 6时，10个品种再分为2类，11号单独为一类，其他品种聚为一类。

在遗传距离为0.161 8时，1、8、9号聚为一类，2、3、5、6、7、10号聚为一类。1号和8号的亲缘关系较近；1号与9号、8号与9号的遗传距离为0.071 3～0.124 5，说明其亲缘关系相对较远。2号与3号、5号与10号、6号与7号之间的亲缘关系较近；5、10号与6、7号之间遗传距离为0.081 2，亲缘关系较近；2、3号与5、10、6、7号之间的遗传距离为0.134 8，亲缘关系较远。在11个枣品种中，野枣与其他10个品种的亲缘关系较远，其次是台湾青枣；龙枣与沾化冬枣、胎里红与以色列枣、灰枣与酸枣之间的亲缘关系较近。

3 小结与讨论

前人对不同枣品种之间遗传分类进行了研究，获得了一些枣品种的遗传图谱[6-9]。本研究通过RAPD技术对攀枝花地区引种枣品种与地方枣品种进行DNA扩增分析，12个随机引物共扩增出特征条带70条，多态性条带57条，多态性比例达到81.4%，表现出较高的多态性。从聚类分析中可以看出，11个枣品种遗传距离为0～0.510 0，亲缘关系较近。野枣与其他10个枣品种亲缘关系较远，其次是台湾青枣；龙枣与沾化冬枣、胎里红与以色列枣、灰枣与酸枣之间亲缘关系较近。本研究中使用RAPD技术对11个枣品种的DNA进行多态性扩增，获得了稳定的遗传图谱；11个枣品种的遗传关系为枣的育种与种植提供了一定的依据。

参考文献：

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