鸡滑液囊支原体的分离鉴定及耐药性分析

摘 要： 应用实验室方法对广东地区疑似MS病例进行病原分离，利用PCR技术、观察菌落形态、病例复制等方法对分离株进行鉴定，利用试管二倍稀释法对分离株进行药敏试验，结果显示，7株分离株有典型的支原体菌落形态，实验室中能成功复制出腿病，各临床株对不同的药物的敏感性不一。

关键词：支原体 ；PCR ；分离；药性

中图分类号：S873 文献标识码：A

由鸡滑液支原体（Mycoplasma Synoviae，MS）引起的腿病是鸡的一种常见、多发性传染病。该病在规模化鸡场中分布广泛、危害大，主要引起4～16周龄的鸡感染发病，并迅速水平传播，鸡群发感染后发育受阻，甚至引发免疫抑制，容易继发或伴发其它疫病。近年来，由于环境因素或鸡群不良状态等不利因素的影响，该病在免疫鸡群中的爆发现象日趋严重，对鸡业养殖生产中控制及预防带来严峻的考验。因此，本研究应用实验室方法分离广东地区疑似MS病原，利用PCR技术、观察菌落形态、病例复制等方法对病原进行鉴定，并对MS分离株进行敏感药物的筛选，为临床有效防控该病提供较为可靠的参考。

一、材料与方法

1 材料

1-1病料：收集广东某地区疑患MS感染鸡群的气管、支气管、肺、腿关节等组织和分泌物。

1-2 鸡胚：鸡胚 9日龄健康鸡胚。

1-3 实验动物： 10日龄SPF鸡。

3-1-4 动物回归试验

病鸡关节炎渗出物接种于18天龄SPF鸡胚卵黄囊，孵育7天后，收集卵黄液，以脚垫注射的方式接种10日龄SPF鸡（0.2ml/只），每天观察鸡只变化情况。接种后7天左右，鸡群出现与MS临床感染相同的典型临床症状，主要表现为卧地、陂行、关节肿胀，解剖可见鸡只关节内有黏液渗出物，部分鸡只关节内有干酪样渗出物。

3-2 抗菌药物敏感性实验结果

采用试管二倍稀释法测定了常用抗菌药物对7株鸡滑液支原体的最小抑菌浓度。结果见表1。

4讨论

4-1 鸡滑液囊支原体感染多发于春夏季、潮湿季节或卫生条件、饲养管理不善，主要侵袭雏鸡，特别是肉雏鸡，常与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒等呼吸道病原混合感染引起气囊炎，有时可引起全身性感染并导致传染性滑膜炎，给临床确诊带来巨大的困难。

目前MS感染的确诊方法主要有电镜法、分离培养法、分子生物学方法以及血清学方法；其中，血清学方法由于经常会出现非特异性的交叉反应，因而在一定程度上会影响诊断的准确性；其次，分离培养法由于支原体对所需条件要求苛刻，培养时间长并且操作也相当的繁杂。相比之下，PCR法方法显得快速简单，并且其敏感性也远远高于前两种方法，可临床应用于MS感染的早期诊断和检疫，但技术条件要求较高，在检测时常由于抑制剂的干扰等因素而可能出现假阳性反应，因此最终确诊需要多种检测方法联合使用。本研究通过菌落形态观察、菌体形态观察、PCR诊断、动物回归试验，成功建立了MS分离鉴定方法，并在病料中分离出7株MS临床株，为后续研究工作奠定了坚实的基础。

4-2 鸡支原体感染在养鸡业中非常普遍，预防和治疗该病主要应用抗菌药物，其中应用最为广泛的药物是林可霉素、泰乐菌素、红霉素、喹诺酮类和氨基糖苷类等药物，但随着临床抗菌药物的大量使用和不合理使用，导致耐药菌株的出现，造成治疗效果不佳或病情反复的现象。从本次研究的药敏结果可看出，临床株对受试的9种抗菌药物的敏感性不一，各临床株对替米考星的敏感性差异最大（4.19倍治疗量～67倍治疗量），同时，在同一地区不同时间不同养户分离的毒株对替米考星的敏感性的差异较显著，替米考星对第1分离株的最小抑菌浓度是67倍治疗量，而对第2分离株的最小抑菌浓度是4.19倍治疗量，说明不同地方的用药情况不一，同一地区不同时间不同养户的用药历史、病情长短不一，导致各临床株对同一种药物的敏感性差异较大；9种抗菌药物中，强力霉素对MS分离株的抑制效果最明显，最小抑菌浓度均小于1，其次是氧氟沙星和利高霉素，两种抗菌药物对MS的抑制效果均较为理想，因此，在临床上可尝试参考用该类药物进行防控MS感染。

参考文献

[1] 鸡滑液囊支原体的分离与鉴定[J].中国家禽，1998.