离子色谱法测定信阳毛尖中17种氨基酸试验研究

摘要 在离子色谱法测定信阳毛尖中17种游离氨基酸种类和含量时，选用AminoPac PA-10（2 mm×250 mm）作分析柱，AminoPac PA-10（2 mm×50 mm）作保护柱。采用250 mmol/L氢氧化钠溶液及1 mol/L醋酸钠的混合溶液作流动相，以梯度淋洗的方式实现了茶叶中的17种游离氨基酸在75 min内同时分离和检测。结果表明，本方法测定17种氨基酸保留时间的相对标准偏差在0.04%和0.39%之间，回收率在70.52%～124.08%之间，说明该方法准确可行。

关键词 离子色谱；信阳毛尖；氨基酸

中图分类号 TS272.7 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）17-0253-03

Abstract In the rapid ion-chromatographic determination of 17 kinds of amino acids composition and content in Xinyang Maojian Tea，using AminoPac PA-10（2 mm×250 mm） as analytical column and AminoPac PA-10（2 mm×50 mm） as protective column which made the 17 kinds of amino acids separated satisfactorily within 75min. A mixed solution of 250 mmol/L NaOH and 1 mol/L NaAc was used as mobile phase. The results showed that relative standard deviation of retention time of 17 kinds of amino acids of this method was between 0.04% and 0.39%，recovery rate was between 70.52% and 124.08%，which showed this method was accurate and feasible.

Key words ion chromatography；Xinyang Maojian Tea；amino acid

目前，茶叶中发现并已得到鉴定的氨基酸共有26种，除了构成蛋白质的20种氨基酸外，还包括6种非蛋白质氨基酸[1]。它们是构成茶叶滋味的重要组成成分，直接影响茶叶的品质。因此，茶叶中氨基酸的定性和定量分析具有重要的意义。

氨基酸的测定由早期的纸色谱法[2]、薄层色谱法[3]等基础分析方法，逐渐发展到氨基酸自动分析仪法[4]、高效液相色谱法[5]和毛细管电泳法[6-7]等仪器分析方法[8]。以高效液相色谱法为代表的检测方法，尤其是各种柱前和柱后衍生方法的发展大大改进了氨基酸检测的选择性和灵敏度。但是这些试验方法具有操作较为繁琐、氨基酸衍生物性质不稳定、衍生反应的副产物和试剂本身会对检测结果产生干扰以及衍生试剂昂贵等限制性因素。离子色谱-积分脉冲安培检测法是一种新的氨基酸分析方法，于1989年由Welch等首先提出，并用金电极实现了对氨基酸的检测[9]。该方法最大的优点是不需要对样品进行衍生，只需将样品稀释到一定浓度后即可直接进样分析，避免了衍生一级胺和二级胺衍生化产物的不同以及衍生化产物不稳定等带来的问题。本试验使用离子色谱-积分脉冲安培检测法对信阳毛尖茶叶中的17种氨基酸进行定性和定量的分析，取得了较为理想的试验结果。

1 材料与方法

1.1 试剂与材料

17种氨基酸标准样品（美国Sigma公司），50%氢氧化钠溶液（赛默飞）、醋酸钠（赛默飞）、盐酸。所有试剂均为分析纯。信阳毛尖茶样购买于本地茶叶市场。

AminoPac PA-10（2 mm×250 mm）氨基酸分析柱；AminoPac PA-10（2 mm×50 mm）氨基酸保护柱；0.22 μmol/L一次性滤头；固相萃取小柱：SPE SCX 4 mL 200 mg强阳离子交换固相萃取小柱。

1.2 主要仪器

ICS-5000离子色谱仪（美国Dionex公司）；EL204型分析天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；Milli-Q超纯水设备（美国Millipore公司）；超声波清洗仪（常州国华）；0.45 μm水相滤膜抽滤系统（津腾）；HZQ-F160型恒温震荡器（太仓实验设备厂）；RE-52AA型旋转蒸发仪。

1.3 试剂配制

250 mmol/L氢氧化钠溶液：称取50.0 g氢氧化钠（纯度大于99.9%）加入盛有50 mL水的聚四氟乙烯烧杯中，溶解冷却后，得到质量分数为50%氢氧化钠溶液，移取13.1 mL氢氧化钠上层清液于1 000 mL容量瓶中，再用水定容至刻度。

1.0 mol/L醋酸钠溶液：称取82.0 g醋酸钠（纯度大于99.9%）于100 mL烧杯中，溶解冷却后转移至1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。

0.1 mol/L盐酸溶液：移取8.4 mL浓盐酸（质量分数为37%）于100 mL烧杯中，溶解冷却后转移至1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。

0.01 mol/L盐酸溶液：移取10 mL 0.1 mol/L盐酸溶液萃取溶液于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度。

3 mol/L氨溶液：移取200 mL浓氨水（质量分数为28%）于500 mL烧杯中，溶解冷却后转移至1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。

1.4 离子色谱条件