流式细胞术在免疫学检查中的应用探析

【摘 要】流式细胞术是一种在功能上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测方法。在近些年的研究中，将流式细胞术应用于免疫学检查中，取得了很大的成效。本研究对流式细胞术的原理和在免疫检查中的应用做了一定的阐述，最后对流式细胞术将来的发展做了一个展望。

【关键词】流式细胞术；免疫学检查

【中图分类号】R19 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）11-0523-01

前言：流式细胞术可以告诉的分析上万个细胞，同时得出多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的特点，是现存的最先进的细胞定量分析技术，在免疫检查方面运用很普遍。尤其在近些年，流式细胞术在免疫学检查方面不断取得新的突破，不断有新的成果面世。

1 流式细胞术的原理

流式细胞术技术可以在一定的液流系统中， 快速测定单个细胞或细胞器的生物学性质，并把特定的细胞或细胞器从群体中加以分类收集的技术。在应用的过程中要用到流式细胞仪， 流式细胞仪的基本工作原理是采用激光作为激发光源，利用荧光染料与单克隆抗体结合的标记技术，通过计算机系统对流动的单个细胞或微粒的多个参数信号进行数据资料处理，从而对目的细胞或微粒进行详细的分析。常用的标记方法为直接免疫荧光染色和间接免疫荧光染色，采用的是抗原抗体特异性结合的原理。直接免疫荧光法多用于对细胞表面标志的染色分析，选用单克隆荧光抗体，直接与相应抗原反应。每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体，特异性高，缺点是敏感性偏低。间接免疫荧光法是选用特异性单抗与待测细胞结合后，再用荧光二抗进行标记染色，形成抗原-抗体-荧光抗体复合物后上机检测分析。此法应用广泛，最适宜检测一些新的未知抗原，进行一些研究分析。这种方法只要标记几类种属特异性不相同的二抗即可。由于流式细胞仪及软系统的飞速发展，为了获取双参数或多参数数据资料，需要进行荧光抗体的组合标记，常采用二色、三色、四色甚至更多标记。

2 流式细胞术在免疫学各方面的应用

2.1淋巴细胞功能分析

淋巴细胞表面抗原的检测不能完全了解淋巴细胞的功能，需要对细胞内细胞因子或体外培养细胞后进行相关指标测定。检测细胞因子的方法有酶连免疫斑点法、有限稀释分析法、原位免疫组化法等。每种方法都有自己的特点，但相比较，流式细胞术法更有优势。它不仅可检测细胞群中单个细胞分泌的特有或共表达的不同因子，确定产生细胞因子的阳性细胞的百分率，而且可同时确定阳性细胞的表型，是一种可以在单细胞水平研究细胞因子的有效方法，另外还可在同一细胞内同时检测两种不同的细胞因子，也可用多参数流式细胞术对胞内多种细胞因子进行测定。

2.2细胞抗原表达的研究

细胞抗原（表面抗原、胞内抗原）的表达与细胞的其它生物学变化一样，是细胞周期和增殖活动中的一种现象。研究正常细胞和肿瘤细胞增殖、分化及周期活动中的抗原表达，对于加深对细胞发育、分化、成熟的了解和对肿瘤发生发展、浸润转移、肿瘤细胞异质性及其写肿瘤诊断、治疗、抗药性等的认识十分重要.用FCM（流式细胞术）研究细胞抗原表达比传统手段具有许多优越之处。目前FCM已应用于抗原表达的遗传基础研究、抗原表达与细胞周期关系研究、细胞不同生长期抗原表达观察、细胞生长环境与抗原表达关系研究以及细胞质内抗原、核抗原、细胞器抗原成分等方面研究.

2.3使用流式细胞术进行移植免疫判断 通过流式细胞术

可以准确进行移植免疫判断，对移植器官的成活情况做出准确了解。 在这个过程中，通过交叉配型以及群体反应性抗体检测，可有效完成该项检测活动。 由于交叉配型阳性移植患者的排异反应明显高于交叉配型阴性移植患者，通过流式细胞术对交叉配型进行检测，可实现对移植器官的免疫情况进行检测。 还可以对 IgA、IgG、IgM 进行检测，给医生提供更加具体详细的临床信息，从而辅助医生进行临床治疗方案作出选择。

2.4对淋巴细胞亚群进行分析

血液中淋巴细胞免疫表型（亚群）分析是 FCM最主要的功能之一。通过 FCM 分析淋巴细胞免疫表型，不仅对于了解淋巴细胞的分化、功能、鉴别新的淋巴细胞亚群有重要价值，而且通过研究大多数疾病的特异性淋巴细胞亚群或某些细胞表面标志的存在、缺乏、过度表达等，对免疫性疾病、感染、肿瘤等疾病的诊断、治疗、免疫功能重建等都有重要的临床意义。在检测血液中淋巴细胞免疫表型时，FCM 的高灵敏度、高速度和多参数分析比其他方法更精确，故 FCM 被认为是血液中淋巴细胞免疫表型分析的标准方法图。FCM 可以同时检测一种或几种淋巴细胞表面抗原，将不同的淋巴细胞亚群（包括CD4+、CD8+）区分开来，并计算出 CD4+/CD8+的比例，通过对病人淋巴细胞各亚群数量的测定来监控病人的免疫状态，如正常人群淋巴细胞 T4/T8 比值大约为 2/1，但在人体细胞免疫力低下时可出现比例倒置。这一技术将对人体细胞免疫功能的评估、免疫功能性疾病的分析以及各种血液病及肿瘤的诊断和治疗起到重要作用。

3 对流式细胞术的前景展望

流式细胞仪不断改进、测定方法迅速发展以及高质量试剂的研制，为提高FCM检测结果的准确性和分析能力提供了保障。长期以来FCM的应用一直陷于对细胞或颗粒的分析，随着胶乳颗粒在流式细胞分析中的应用，“液相芯片”技术的出现实现了流式细胞仪对可能性物质的分析，实现了样本分析时的低样本量、多参数检测。流式细胞仪从单纯大型仪器发展为适应各种实际应用的便携式、台式、高分辨率、高质量分选的研究型流式细胞仪；采用的荧光试剂，从非配套试剂发展为配套的试剂盒。另外，流式微球阵列技术也属于液相芯片技术。这些技术将FCM的应用领域进一步扩展，发展了一种新的技术平台。可以预见，在未来免疫学基础研究和临床检测领域，流式细胞术的应用范围会进一步扩大，应用深度会进一步加强。虽然，这种方法还具有一些自身的缺点，如价格昂贵、对操作人员要求高等，但是这些缺点一定会随着科学技术的进步逐步被克服。

结语：流式细胞术在一定程度上促进了免疫学检查的发展，而在一些方面流式细胞术的技术还有很多提高和发展的空间。总之，流失细胞术技术凭借快速、高效的特征已广泛应用各个领域，大大促进了现代科学技术以及医学技术的发展。我们要重视这一方面的研究，投入更多的资金、人才和技术更好的做好流式细胞术的研究，促进医学上免疫学检查的更好发展。

参考文献：

[1] 朱建忠.度洛西汀合并认知行为疗法治疗老年抑郁症疗效对照研究

[2] 沈文龙，李晨虎，饶顺曾，等.认知行为治疗对产后抑郁症的疗效分析

[3] 李林芳，王鸿雁.认知行为干预对更年期抑郁症