仪器与纸片扩散检测耐甲氧西林葡萄球菌的方法比较评价

［摘要］ 目的：比较分析耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)仪器检测与纸片扩散检测的检出率。方法：采用KB纸片扩散法，全自动微生物分析仪法，并以琼脂稀释法为标准对临床分离的63株葡萄球菌进行检测，比较3种方法的检出率。 结果：对63株葡萄球菌(凝固酶阳性50株，凝固酶阴性13株)3种方法检出率分别为60.3%、57.1%、50.8%。含4% 氯化钠(NaCl) M?H平板药敏纸片扩散法和VITEK?32型自动微生物鉴定系统法差异无显著性(P＞0.05)，与琼脂稀释法差异无显著性(P>0.05)，而仪器法与琼脂稀释法差异无显著性(P＞0.05)。 结论：KB纸片扩散法,仪器法和作为MRS检测推荐方法的含盐琼脂平板稀释法对MRS的检出率,三者差异均无显著性，仪器法与KB纸片扩散法均可用于临床常规实验室MRS的检测。

［关键词］ 耐甲氧西林葡萄球菌；纸片扩散法；仪器法；琼脂稀释法

耐甲氧西林葡萄球菌(Methicillin?resistant Staphylococcus，MRS)所致院内感染已成为全球范围内一个越来越严重的问题［1］，有效预防和控制其感染的关键是及时准确地检出MRS，为临床合理选择抗生素提供依据［2］，因而快捷、准确的检测方法对快速采取有效的感染控制措施和MRS感染流行病学调查十分重要。MRS的检测方法有苯唑西林纸片扩散法、肉汤稀释法、琼脂扩散法、E?test法、仪器法及PCR技术检测mecA基因等［3］，我们将临床分离的63株葡萄球菌用含4%氯化钠(NaCl) M?H平板苯唑西林纸片扩散法和VITEK?32型自动微生物鉴定仪法进行检测比较，并以含6　μg/ml苯唑西林的琼脂稀释法为标准，评价其准确性。

1 材料与方法

1.1　材料

1.1.1　菌株及其来源　自2006年1月至2006年5月从江医二附院临床患者的痰、血、尿、脓液、前列腺液及阴道分泌物等标本，经常规分离得到63 株葡萄球菌，包括凝固酶阳性葡萄球菌50 株，凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)13株。另MRS阳性参考菌株ATCC(R)43300，MRS阴性金黄色葡萄球菌ATCC25923，购自卫生部临检中心。

1.1.2　苯唑西林纸片　购自北京天坛生物制品有限公司，苯唑西林标准品购自重庆药友制药有限公司，SDS琼脂糖、溴化乙锭、溶菌酶、蛋白酶K为美国Sigma产品，丙烯酰胺、双丙烯酰胺TEMED和TBE为美国Gibcobrl公司产品。

1.1.3　仪器　法国生物梅里埃公司生产的VITEK?32型鉴定系统及配套的GPS?SV葡萄球菌药敏检测卡。

1.2　方法

1.2.1　含4% NaCl M?H平板纸片扩散法　由于苯唑西林较甲氧西林稳定、不易失活，通常用苯唑西林代替甲氧西林测定葡萄球菌。配制0.5麦氏单位菌液接种于含4% NaCl的M?H平板，贴1 μg/片苯唑西林药敏纸片，35 ℃、24 h观察结果(CNS孵育48 h)金黄色葡萄球菌(SA)抑菌圈≥13 mm为敏感，11 mm～12 mm为中介，≤10 mm为耐药，凝固酶阴性葡萄球菌≥18 mm为敏感，≤17 mm为耐药。

1.2.2　琼脂稀释法　NCCLS推荐为测定耐甲氧西林葡萄球菌的参考方法，在含4% NaCl、6 μg/ml苯唑西林M?H平板中点种0.5麦氏单位菌液，经35 ℃、24 h孵育检查琼脂表面有无细菌生长，只要有一个菌落生长即判为MRS。

1.2.3　仪器检测　挑取待检菌落，严格参照GPS?SV卡说明书配制一定浓度菌悬液，置备GPS?SV药敏卡上机，用VITEK?32型全自动微生物鉴定仪检测结果。

1.2.4　质量控制　以金黄色葡萄球菌ATCC(R)43300为MRS阳性参考菌株，金黄色葡萄球菌ATCC25923为MRS阴性参考菌株及药敏质控菌株与实验菌株同时进行检测。

2　结果

3种方法对MRS的检出率见表1。

表1　3种方法对MRS的检出率（略）

对3种方法MRS检出率进行χ2检验，含4% NaCl M?H平板药敏纸片扩散法MRS检出率与琼脂稀释法MRS检出率差异无显著性(χ2=1.16，P>0.05),VITEK?32型仪器检测法MRS检出率与琼脂稀释法MRS检出率差异也无显著性(χ2=0.51，P＞0.05),同时纸片扩散法MRS检出率与VITEK?32型仪器检测法MRS检出率差异也无显著性(χ2=0.13，P＞0.05)。

3　讨论

目前国内外虽然用以检测MRS的方法很多，由于MRS本身对甲氧西林耐药存在有不均一性，且甲氧西林不稳定，故常用苯唑西林代替甲氧西林来检测MRS。由于纸片扩散法操作简便、价格低廉，不需要特殊仪器设备，可以和普通药敏实验同时进行，在多种MRS检测方法中，目前很多医院临床常规微生物实验室仍在采用这种方法，从我们的实验结果看，纸片扩散法与被NCCLS推荐为参考方法的琼脂稀释法对MRS检出率差异无显著性，因此可以用于临床常规微生物实验室,对MRS进行常规检测。VITEK?32型GPS?SV药敏卡方法简单、快捷，从结果看其MRS检出率与琼脂稀释法差异无显著性，虽然其与纸片扩散法MRS检出率也无明显差异，但其检测速度比纸片扩散法更快捷，可以及时给出准确的报告,节约了时间,因此评估GPS?SV药敏卡的准确性，为临床找出一种准确而简单、快捷的筛选MRS的方法是极有意义的，且VITEK?32型微生物鉴定药敏分析系统配套使用的GPS?SV卡葡萄球菌药敏检测，其苯唑西林检测孔含有4% NaCl，符合NCCLS推荐的检测MRS的方法标准［4］，因此，仪器法GPS?SV卡可用于葡萄球菌耐甲氧西林的检测，且简便准确、快速。所以纸片扩散法和仪器法均可用于医院常规实验室MRS检测,但对有条件的实验室建议采用仪器法，目前也出现了一些更准确可靠的方法，即对耐甲氧西林葡萄球菌进行基因层次的分型检测，并也出现了商品化的几种mecA基因乳胶检测法［5］，也是目前可采用的较好的方法。

参考文献：

［1］　Mulligan ME.Murray?leisure KA.Ribner BS.et al.Methicillin?resistant Staphylococcus aureus:a consensus review of the microbiology Pathogenesis and epidemiology with implications for prevention and management AM J［J］.Med 1993;94:313.

［2］　马纪平，苏建荣.耐甲氧苯青霉素葡萄球菌［J］.中华检验医学杂志，1996，19：187?189.

［3］　赵玉坤，娄金丽，白华，等.耐甲氧西林葡萄球菌的临床检测［J］.中华检验医学杂志，1996，19：361?363.

［4］　廖舫，范昕建，等.耐甲氧葡萄球菌HVR基因分型及其与耐药性关系［J］.华西医大学报，2001，32(2)：167?171.

［5］　孔海深，徐根云，等.乳胶凝集试验快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌［J］.中华检验医学杂志，2003，26：695?696.