HPLC法测定恩替卡韦原料的有关物质

摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定恩替卡韦有关物质的方法。方法：色谱柱为KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-水-三氟乙酸（100：900： 1）为流动相，流速为1ml﹒min-1，检测波长为254nm。结果：在本方法中，恩替卡韦的线性关系良好，r为0.9999；专属性强，恩替卡韦与各中间体及各降解产物之间都有良好的分离度；精密度和稳定性良好，RSD均小于2%。结论：该方法准确、简便、快速，可用于恩替卡韦的有关物质测定。

关键词：恩替卡韦 有关物质测定 高效液相色谱法

Determination of EntecavirTablets by HPLC

Zhao Hai-qiao Chen man Zhao Ji-fang

（Shandong Fangming Pharmaceutical Group CO.，LTD.，Dongming 274500 ，China）

Abstract：Objective To establish a method for the determination of Entecavirby HPLC.Methods The determination was carried out on Kromsil C18column，with Acetonitrile-water- Trifluoroacetic acid （100：900： 1） as the mobile phase at the flow rate of 1.0ml？min-1 .The detection wavelength was 254nm. Results The method showed good linearity with a correlation coefficient （r） of 0.9999； the precision and stability were satisfactory with all RSDs below 2%. Conclusion This method is an accurate，fast and simple method for the determination of Entecavirtablets.

Key word： entecavir determination HPLC

恩替卡韦是由美国百时施贵宝（Bristol – Myers Squbb）公司在20世纪90年代开始研制开发的一种新型抗乙肝病毒新药，主要用于治疗成人伴有病毒复制活跃和血清转氨酶持续增高，或肝组织学为活动性病变的慢性乙型肝炎，是目前降病毒最快最强、变异几率最低的核苷类似物。恩替卡韦是新一代抗 HBV核苷类似物药物，因其具有高效的抗病毒治疗作用和极低的耐药率而成为抗病毒治疗的首选。本文建立的方法，方法简便，结果可靠。

一、仪器与试药

1.仪器

日本岛津 SPD-20A高效液相色谱仪。

2.试药

恩替卡韦对照品（山东方明药业集团股份有限公司，1203001）；乙腈、三氟乙酸为色谱纯；水为纯化水；其它试剂均为分析纯；恩替卡韦（山东方明药业集团股份有限公司；批号：1310001、1310002、1310003）

二、方法与结果

1.色谱条件

色谱柱为KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-水-三氟乙酸（10：900： 1）为流动相，流速为1ml﹒min-1，检测波长为254nm，柱温为30℃，进样量为20μl。

2.供试品溶液的制备

取恩替卡韦对照品约20mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。

3.对照溶液的制备

精密量取恩替卡韦供试品溶液0.1ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

4.专属性试验

破坏试验：取恩替卡韦适量置100ml容量瓶中，照下述方法试验：（1）加1.0mol/L盐酸溶液2ml并放置8小时作为酸破坏样品；（2）加1.0mol/L氢氧化钠溶液2ml并放置8小时作为碱破坏样品；（3）加3%过氧化氢溶液2ml并放置8小时作为氧化破坏样品；（4）置4500lx光照度下8小时作为光照降解样品。结果表明：恩替卡韦对酸、碱、氧化剂及光照均较稳定，各降解产物分离度良好。

5.线性关系考察

精密称取恩替卡韦对照品约20.0 mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，精密量取储备液1ml置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为溶液①，精密量取溶液①2.0，1.0，1.0，1.0ml，分别置10ml、10ml、20ml、100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为溶液②、③、④、⑤，按上述液相条件，分别进样20μl，记录色谱图峰面积。以恩替卡韦峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标计算得回归方程为：A=1256.21C+20.326 R=0.9999。结果表明恩替卡韦在0.02～2μg/ml浓度范围内线性关系良好。

6.精密度试验

精密量取供试品溶液及对照溶液各20μl，按上述液相条件，连续进样6次， RSD均小于2.0%。结果表明，精密度良好。

7.稳定性试验

取恩替卡韦供试品溶液，室温下在0、2、4、6、8小时测定，结果表明，本品的供试品溶液在室温8小时内稳定，计算得：RSD=1.0%，n=5。

8.样品测定

对批号为1310001，1310002，1310003的恩替卡韦样品，按照“2.2及2.3”项下方法制备供试品及对照溶液，结果见表1。

表1 样品有关物质测定结果表

三、结果与讨论

1.流动相的选择

曾比较了乙腈-水（10：90），甲醇-水（20：80），乙腈-水-三氟乙酸（10：90：0.1）等 3 种流动相的分离情况，发现乙腈-水-三氟乙酸（10：90：0.1）分离效果好，且峰形比较好，故选择该流动相。

2.检测波长的选择

以甲醇为溶剂，配置 0.05 mg·mL的溶液，在 200～400nm 范围内扫描，结果表明，在 254nm 波长有最大吸收，故将 254nm 作为检测波长。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅴD.

[2]冀满丰.高效液相色谱-梯度洗脱法测定恩替卡韦分散片的含量和有关物质[J].中国药业，2012，21（9）：26-27.