HPLC法测定盐酸丁咯地尔胶囊有关物质

【摘要】目的：为了对盐酸丁咯地尔胶囊中的有关物质进行测定，研究人员采用了HPLC法，在测定的过程中，这种方法可以对胶囊的质量进行控制，还可以对有关物质进行限定，有助于保证胶囊的药效。方法：在测定的过程中，研究人员将新药转正标准作为主要参照的依据，还对有关物质含量测定的方法进行了确定，在选择色谱柱时，研究人员选定了4.6mm×150mm×5μm型，在选择流动相时，选择了甲醇-水-冰醋酸-三乙胺，在配置的过程中，四者的比例为200：350：0.8：1.0，流速设定为1.0ml×min-1，检测的波长为282nm，进样量设定为20μl。结果：利用HPLC对盐酸丁咯地尔胶囊的有关物质进行测定，结果的准确性比较高，盐酸丁咯地尔峰理论塔板数符合国家药典的规定。结论：HPLC法测定盐酸丁咯地尔胶囊的有关物质时，操作较为简单，测定结果的可靠性高，可以对控制药物的质量。

【关键词】HPLC法；盐酸丁咯地尔；测定；含量

盐酸丁咯地尔胶囊对治疗外周血管疾病有着良好的药效，当患者出现间歇性跛行等症状时，服用盐酸丁咯地尔胶囊，可以达到良好的治疗效果。这种药物还可以治疗由脑血管疾病引起的眩晕、注意力无法集中等病症。采用HPLC法对盐酸丁咯地尔胶囊中的有关物质进行测定，可以控制该药物的质量，还可以对药品质量进行评定，对药品的制作工艺进行规范化管理，对保证药物的药效有着促进作用。HPLC法还具有操作简便等优点，在药物质量检测以及物质测定中发挥着重要的作用。

一、仪器、试剂与方法

1、仪器与色谱条件。仪器主要有高校液相色谱仪，在这个色谱仪中主要有配套的色谱泵、检测器、自动进样器、柱温箱、在线脱气机和色谱工作站。色谱条件是流动相采用甲醇、水、冰醋酸和三乙胺按照：200：350：0.8：1.0的比例配制，色谱柱都要选用符合实验规定的色谱柱，检测的波长要控制在282nm，进样量是20μl，流速为1.0ml×min-1。

2、试药和试剂。盐酸丁咯地尔胶囊是由某药业集团提供的，盐酸丁咯地尔对照品是中国药品生物制品检定所提供的。试剂有色谱纯甲醇、分析纯冰醋酸、分析纯三乙胺和自制的重蒸水。

3、方法。3.1检测波长的选择。取适量盐酸丁咯地尔对照品加入量瓶，需要在容量瓶中加入一定量流动相进行溶解，在完全溶解后，要加水进行稀释，将其制备成实验规定的浓度。一般规定，1ml的溶液中盐酸丁咯地尔的含量为0.1g，在采用紫外可见光光度法进行扫描时，需要规定扫描的范围，通过实验发现，在波长为282处有着最大的吸收点。3.2检测浓度的选择。在对实验检测的浓度进行选择时，需要取适量盐酸丁咯地尔原料，加水后对溶液的浓度进行调整，使溶液的浓度分别为0.2、0.5、1.0、3.0mg/ml，然后分别取20μl，将其注入液相色谱仪中，并对结果进行观察与对比。盐酸丁咯地尔在不同浓度下峰形以及理论塔板数如表1所示。

3.3溶液稳定性试验。取适量对照品，加水后稀释至浓度为1.0mg/ml，将其作为供试品溶液。然后量取20μl，在静置0、1、2、4、8、12h后注入液相色谱仪，并制作成色谱图，对溶液的稳定性进行检测，具体结果与数据如表2所示。

3.4专属性试验。3.4.1空白溶剂与辅料的干扰。称取适量空白辅料，将其置入量瓶中，然后加水进行稀释，然后对其进行过滤，将滤液作为空白辅助溶液。在色谱条件下，取20μl空白溶剂以及空白辅料，注入液相色谱仪进行观察。3.4.2酸破坏。称取50mg盐酸丁咯地尔，置于具塞试管中，在试管中加入1mol/L的盐酸溶液5ml，摇匀后静置4h，再在试管中加入1mol/L氢氧化钠，对PH值进行调节，使其保持中性，然后再加水稀释，调整至规定的刻度，对溶液进行摇匀处理后，还要进行过滤，然后将滤液作为供试品溶液。3.4.3碱破坏。称取50mg盐酸丁咯地尔，置于具塞试管中，在试管中加入1mol/L的氢氧化钠5ml，摇匀后静置4h，再在试管中滴入1mol/L氢氧化钠，对溶液的PH值进行调节，使其保证中性，然后加水稀释，调至规定的刻度，然后将溶液摇匀，并进行过滤，将滤液作为供试品溶液。3.4.4高温破坏。取50mg盐酸丁咯地尔，将其置入具塞试管，在试管中加入适量水，然后对试管进行加热，在煮沸的状态下保持4h，然后进行冷却，再加水继续稀释，调至规定的刻度，对溶液进行摇匀处理，然后过滤，将滤液作为供试品溶液。3.4.5强光破坏。取50mg盐酸丁咯地尔，将其置于量瓶中，然后加入适量水，采用超声的方式时对照品可以迅速的溶解在水中，然后将容量瓶置于规定的照度下，使其静置4h，在对溶液进行加水稀释，调整至规定的刻度，摇匀后进行过滤，然后将滤液作为供试品溶液。3.4.6定量限。在本次试验设定的色谱条件下，对配制好的对照品溶液进行稀释，使其浓度保证在1mg/ml，在稀释处理时，要保证信噪比为10：1，并将其设定为定量限，经过转换后，可确定定量限的数值为2ng。

二、结果

本次测定试验中，选择的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相是由甲醇、水、冰醋酸以及三乙胺组成，检测的波长为282nm，工作人员精密称取供试品溶液，将其注入液相色谱仪中，对检测的结果分析发现，盐酸丁咯地尔胶囊中，盐酸丁咯地尔峰理论塔板数为1607.106，符合我国药典对药品有关物质含量的规定。

三、讨论

通过本次实验可以看出，加入流动相后，盐酸丁咯地尔色谱峰的最佳保留时间为3.571min。在这一时间中，色谱法峰形比较尖锐。理论塔板数为1642.003，在测定的过程中，主峰出峰的时间对塔板数理论值产生的影响，所以，研究人员对流动相比例进行了调整，这样可以降低杂质峰对主峰的干扰，可以延迟主峰出峰的时间。在对流动相的比例进行调整后，色谱峰保留时间为5.264min，峰形比较尖锐，塔板数为1840.219，这一数值符合我国药典的规定。

采用HPLC法对盐酸丁咯地尔胶囊有关物质进行测定时，稳定性以及可靠性比较高，在测定的过程中，辅助材料会对测定的结果产生较大的干扰，实验人员选用的空白溶剂也会影响测定结果的准确性，另外，在不同的酸碱条件以及光照条件下，盐酸丁咯地尔的结构会受到破坏，也可以很好的将杂质与主峰进行分离，HPLC法具有较强的专属性，采用这一方法对盐酸丁咯地尔胶囊的有关物质进行检测，重现性比较高，而且操作也比较简单，可行性高。

参考文献

[1]张占辉，刘庆彬，薄海静，郭秀斌.高效液相色谱法测定呱仑酸钠的含量及有关物质[J]. 药物分析杂志，2001（05）.

[2]蒋建兰，叶小珍，刘勇，罗云.盐酸洛美沙星注射液的制备条件对有关物质的影响[J].中国药师，2002（12）.