HPLC法测定亚胺培南的有关物质

[摘要] 目的:建立亚胺培南有关物质的测定方法。方法:采用Hypersil ODS 250 mm4.6 mm (5 μm) 色谱柱,A相(0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液)-B相(甲醇)为流动相,梯度洗脱,检测波长300 nm,柱温为室温。结果:亚胺培南自身对照溶液在供试品溶液0.2%～1.2%浓度范围内呈线性,硫霉素峰和亚胺培南峰的分离度大于4.0。结论:该方法灵敏度高、专属性强、结果准确可靠,可用于亚胺培南有关物质的检查。

[关键词] 高效液相色谱法;亚胺培南;有关物质

[中图分类号] R943 [文献标识码]C [文章编号]1674-4721(2010)05(a)-050-02

Determination of related substance in imipenem by HPLC

ZHAO Yuxin,WANG Guanghui,LIU Dan,ZHOU Chunling

(Development and scientific research center, Harbin Pharmaceutical Group CO., LTD. General Pharm aceutical Factory,Heilongjiang Province, Harbin 150046, China)

[Abstract] Objective:To establish a method for determining related substance in imipenem. Methods:The HPLC method was used a Hypersil ODS 250 mm4.6 mm (5 μm)column,the mobile phase was consisted of solvent A-0.01 mol/L Potassium Dihydrogen Phosphate and solvent B- Methanol with gradient elution program。The detective wavelength was 300 nm and the column temperature was room temperature. Results:The calibration curves of imipenem was in good linearite over the range of 0.2%～1.2% testing solution concentration. The resolution between the imipenem and thienamycin peaks was not less than 4.0. Conclusion:This method issensitive,specific,accurate and reliable,it is suitable to the determination of related substance in imipenem.

[Key words] HPLC; Imipenem; Related substance

亚胺培南是具有碳青霉烯环的硫霉素类抗生素,由链霉素S.cattleya培养液中分离出硫霉素经半合成制取。亚胺培南对革兰阳性、阴性的需氧和厌氧菌具有抗菌作用。在临床应用过程中出现的不良反应事件[1-3]对亚胺培南和西司他丁钠的药品质量控制提出了新要求,本文建立了有效的亚胺培南有关物质检验方法,进一步提高了药品质量控制标准。

1 试剂与材料

LC-20AT泵,SPD-20A紫外检测器,LCsolution工作站(日本岛津公司); AG135电子分析天平(美国梅特勒托利多公司)。

亚胺培南供试品:(HIGH TECH PHARM CO. LTD,批号:081219、081223、081224);磷酸二氢钾(分析纯,天津市科密欧化学试剂开发中心);甲醇(色谱纯,TEDIA公司);水为mili-Q超纯水;微孔滤膜(上海半岛实业有限公司)。

2 方法与结果

2.1 专属性试验

取供试品适量,精密称定,加0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(用10%氢氧化钾调节pH至6.8)溶解并稀释制成每1毫升中含1.0 mg的溶液,作为供试品溶液;取20 ml供试品溶液,并用10%的氢氧化钾调节pH至10.0,60℃水浴加热5 min,使之产生硫霉素,硫霉素的相对保留时间为0.8,精密量取该溶液20 μl注入液相色谱仪,按如下色谱条件检验,采用Hypersil ODS 250 mm 4.6 mm (5 μm) 色谱柱;波长为300 nm;流动相A为0.01 mol/L磷酸二氢钾(用10%氢氧化钾调节pH至7.3);流动相B为甲醇;流速为每分钟1.5 ml,按表1进行线性梯度洗脱。

2.2 自身对照溶液的线性试验

取本品适量,精密称定,加0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(用10%氢氧化钾调节pH至6.8)溶解并稀释制成每1毫升中含1.0 mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取适量,用0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(用10%氢氧化钾调节pH至6.8)定量稀释制成每1毫升中含0.002、0.004、0.006、0.008、0.010、0.012 mg的溶液,作为自身对照溶液的线性供试溶液。精密量取上述溶液各20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,取供试溶液的峰面积分别为74 335、148 671、223 003、297 506、371 733、446 060,以自身对照溶液的质量浓度C(μg/ml)为横坐标,峰面积A为纵坐标进行线性回归,得回归方程为A=37 175.9C-13.4,r=0.999 9。线性范围为2～12 μg/ml。

2.3 溶液稳定性试验

取本品适量,精密称定,加0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(用10%氢氧化钾调节pH至6.8)溶解并稀释制成每1毫升中含1.0 mg的溶液,作为供试品溶液,在测试条件下每隔60 min测定1次,结果表明测试溶液的有关物质在1 h内稳定,供试液应临用现配。

2.4 供试品测定

分别取亚胺培南(HIGH TECH PHARM CO. LTD,批号:081219、081223、081224)按上述方法进行有关物质测定,结果如表2所示。

3 讨论

3.1 限度的制定

亚胺培南是具有碳青霉烯环的硫霉素类抗生素,与西司他丁钠组成复方制剂,在临床上应用广泛,同时亚胺培南-西司他丁钠对神经系统的影响、亚胺培南-西司他丁钠致精神错乱、亚胺培南-西司他丁钠引起症状性癫痫等不良反应事件的报道也随之增多,这就对药品的质量控制提出了更高的要求,作为纯度检要指标的有关物质检查及其限度的制定,都有着十分重要的意义。本文参考了欧洲药典、美国药典、韩国药典及安全性试验等,制定了亚胺培南的有关物质可接受限度:硫霉素不得大于1.0%,其他单个杂质不得大于0.3%,总杂质(除硫霉素外)不得大于1.0%。

3.2 亚胺培南有关物质的检查方法

取本品适量,精密称定,加0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(用10%氢氧化钾调节pH至6.8)溶解,并稀释制成每1毫升中含1.0 mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取适量,用0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(用10%氢氧化钾调节pH至6.8)定量稀释制成每1毫升中含0.01 mg的溶液,作为对照溶液。照高效液相色谱法(中国药典2005版二部附录ⅤD)测定,用十八烷基键合硅胶为填充剂;流动相A为0.01 mol/L磷酸二氢钾(用10%氢氧化钾调节pH至7.3);流动相B为甲醇;流速为每分钟1.5 ml,检测波长为300 nm。按表1进行线性梯度洗脱。取20 ml供试品溶液并用10%的氢氧化钾调节pH至10.0,60℃水浴加热5 min,使产生硫霉素,硫霉素的相对保留时间为0.75,精密量取该溶液20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,理论板数按亚胺培南峰计算不低于3 000,亚胺培南峰的拖尾因子不得大于2.0,硫霉素与亚胺培南峰分离度不小于4.0。取对照溶液20 μl,注入液相色谱仪,调节仪器灵敏度,使主成分峰高为满量程的20%～25%,精密量取供试品溶液与对照溶液各20 μl,立即注入液相色谱仪。供试品溶液的色谱图中如显杂质峰,硫霉素峰面积不得大于对照溶液主峰面积(1.0%),其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.3倍(0.3%),各杂质峰面积之和(除硫霉素峰外)不得大于对照溶液的主峰面积(1.0%)(供试品溶液中任何小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰可忽略不计)。

[参考文献]

[1]郭宏.胺培南/西司他丁不良反应分析[J]. 天津药学,2002,14(2):30.

[2]阚家义,许威.注射用亚胺培南西司他汀钠含量和有关物质测定方法的改进[J].药物分析杂志,2006,26(3):390.

[3]金永寿.亚胺培南/西司他丁致精神错乱3例[J]. 中华老年医学杂志,1995,14(2):338.

(收稿日期:2010-03-08)