不同等级枸杞中枸杞多糖的含量测定与比较

关键词　枸杞枸杞多糖含量测定

枸杞多糖是近年来从传统补益中药枸杞子(Lyci-umchinenseMill)中分离出的一种酸性杂多糖，其含量多少与枸杞疗效有较直接关系。因此枸杞多糖的研究已成为当前枸杞研究的热门课题，但大多是对其药理作用的研究，而对其提取工艺及应用新技术方面的研究少见报道。常见的商品枸杞品种较多，仅依赖其外观，颗粒大小，甜度来确定其内在质量缺乏科学的依据。所以，我们选择枸杞多糖来判断常见商品枸杞等级的内在质量，采用超声提取法提取枸杞多糖，苯酚一浓硫酸比色法对其含量进行测定。为临床及中药厂家用药选择提供参考依据。

1 实验材料、试剂及仪器

1.1 药材样品来源：产地见表1，药材购于浙江省宁波四明大药房。

1.2　试剂：苯酚、碳酸氢钠、铝片、石油醚(60～90℃)、乙醚、80％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、丙酮、硫酸均为分析纯，标准溶液用葡萄糖为基准试剂。

1.3　仪器：T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)、SK8210LHC超声波仪(45KHZ上海科导)、HH-6电热数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)、RE 2000旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)、BS224S电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)、DHG-9023A型电热恒温鼓风干燥箱(常州国华电器有限公司)。

2　实验方法与结果

2.1 苯酚试剂的制备：称取100g苯酚、0.05g碳酸氢钠和0.01g铝片，置圆底烧瓶中加热蒸馏，收集180℃的馏分。冷却后取馏分10g，加蒸馏水150ml溶解，置棕色瓶中保存。

2.2　标准曲线的制备：精密称取干燥恒重的葡萄糖0.1006g，配成100ml溶液，摇匀得到葡萄糖标准溶液，从中精密吸取0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml，分别加入6ml苯酚溶液和30ml浓硫酸，30℃恒温0.5h，冷水浴冷却至室温，定容至50ml，按分光光度法于490nm波长处测定吸光度。以不加样为空白对照，以葡萄糖浓度C(ug／m1)为横坐标，吸光度A为纵坐标，经线性回归处理得回归方程：A=0.0322x-0.0038，r=0.9989(n=6)，样品在2.00～20.00ug／m1的范围内线性良好

2.3　枸杞多糖的提取与精制：分别称取宁夏枸杞粉末特级、一级、二级、三级各100g，均用石油醚(60～90℃)500ml回流脱脂2次，每次1h。再用80％乙醇回流提取2次，每次2h；以除去单糖和低聚糖。将药渣加500ml水90℃水浴提取2次，合并2次提取液。旋转薄膜蒸发仪上减压浓缩至150ml，加少量活性炭脱色，过滤。滤液加5倍量95％乙醇，放置过夜，抽滤后的沉淀以100ml水溶解重复醇沉1次。沉淀以95％乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，60℃干燥，即得枸杞多糖依次为35.73g、34.6lg、32.75g、31.48g。

2.4　精密度实验：精密吸取上述的葡萄糖标准溶液0.60ml，置于有塞试管中，照标准曲线的制备方法显色后。于490nm波长处测定吸光度A，求得RSD-0.83％(n=5)，可见本实验精密度较好。

2.5　稳定性试验：取枸杞多糖溶液按标准曲线的制备方法显色后，于490nm每隔30分钟测定1次吸光度A，连续4h考察其稳定性。结果显示：样品溶液在4h内吸光度基本保持不变，求得RSD=0.51％(n=5)，可知显色稳定可进行测定。

2.6 回收率试验：取宁夏枸杞特级，精密称取枸杞多糖粉末0.1017g，加入葡萄糖0.0182g，加80％的乙醇液50ml，45kHz超声提取2次，每次25min。过滤，滤渣加水50ml于45kHz超声提取20min，过滤，再加水50ml重复超声提取1次，合并2次提取液，然后定容于250ml容量瓶中，从中精密吸取10.00ml，照标准曲线制备项下的方法测定吸光度，计算回收率。

2.7　含量测定：精密称取枸杞多糖粉末0.3025g，加80％的乙醇100ml，45kHz超声提取2次，每次25min。过滤，滤渣加水50ml于45kHz超声提取20min，过滤，再加水50ml重复超声提取1次，合并2次提取液，然后定容于250mi容量瓶中，从中精密吸取10.00ml，照标准曲线制备项下的方法测定吸光度，并计算多糖含量，得到结果如下。

3　讨论

由上述对枸杞多糖含量的测定结果来看，超声提取法可有效提高目标成分的得率，从而提高了药材的利用率。此外，超声提取法还能大大缩短提取时间，节约能源；用超声波提取1h比传统方法提取6h的提取率还要高；而且超声提取法不用加热，避免了高温对枸杞多糖结构的影响。与传统方法相比，超声提取法具有快速、高效的显著优点。将其应用于宁夏枸杞多糖的提取，为进一步综合开发利用宁夏枸杞资源奠定基础，可望促进宁夏枸杞产业化的发展。

从测定结果可以看出，不同的等级枸杞中枸杞多糖含量差别较大。其中以宁夏枸杞特级最高达到12.84％，这与传统的质量判断相符。宁夏枸杞三级中枸杞多糖含量最低，为9.86％。近年来由枸杞配方的中药产品逐年增多，大多数取其补益和增强免疫功能的作用。其功效与枸杞多糖含量有密切的关系，本实验结果能给有关厂家选择用药等级及适当调整枸杞用药剂量以保证其产品质量提供参考依据。