蜂胶抗氧化性的实验研究

摘 要：目的：探讨蜂胶在动脉粥样硬化中的抗氧化作用。方法：组织块法培养脐动脉平滑肌细胞，按分组分别施加药物孵育24h后，分光光度计测定细胞培养液中过氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量。新西兰大白兔饲喂不同的饲料后，检测血清中低密度脂蛋白(LDL)及总SOD活力、MDA的含量。结果：在蜂胶水提液抑制AngⅡ诱导的平滑肌细胞增殖过程中总SOD活力增加，MDA含量降低，与AngⅡ组均差异显著(P0.01)；蜂胶能增加高脂血症兔的总SOD活力，降低LDL、MDA含量，与模型组相比，差异显著(P0.01)。结论：在抑制动脉粥样硬化病变过程中，蜂胶具有抗脂质过氧化作用。

关键词：蜂胶；动脉粥样硬化；抗氧化

中图分类号：R285.5

文献标识码：A

文章编号：1673-7717(2008)03-0586-03

Experiment Study on Antioxidation of Propolis

SANG Hui，SI Yan-hong ，WANG Jia-fu，SHANG Zhan-ping

(Taishan Medical College，Tai'an 271000，Shandong，China)

Abstract：Objective：To investigate antioxidation of Propolis during preventing atherosclerosis. Methods：human umbilical artery smooth muscle cell (HUASMC) were cultured by the explant method.Superoxide dismutase (SOD) and maleic dialdehyde(MDA) in HUASMC culture medium superior was measured with spectrophotometer after incubation of the cells with different dose water extract propolis(WEP) for 24h.Serum was tested for the level of low density lipoprotein (LDL)，SOD，MDA after New Zealand rabbits were fed with different feed. Results：There were obvious differences between WEP group and Ang Ⅱgroup (P

Keywords：propolis；atherosclerosis；antioxidation

蜂胶成分复杂，已鉴定出其含有黄酮类、萜烯类、脂类等多种化合物和多种维生素及微量元素等，研究[1-2]表明，黄酮类化合物不仅可以清除机体内的自由基，而且对脂质的过氧化作用有很强的抑制作用。为了探讨蜂胶在动脉粥样硬化中的抗氧化作用，本文利用在体模型及体外实验研究了蜂胶对总SOD活力及MDA含量的影响。

1材料与方法

1.1主要的试剂 胎牛血清，购于杭州四季青生物工程材料研究所；血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ，AngⅡ)购于Sigma公司，SOD、MDA试剂盒，购于南京建成生物工程研究所；蜂胶水提液( water extract propolis，WEP)系泰山松柏蜂胶，本实验室提取，WEP中总黄酮含量为3.35%。

1.2主要的仪器 755B分光光度计、全自动生化分析仪。

1.3 人脐动脉平滑肌细胞(human umbilical artery smooth muscle cell，HUASMC)的培养 采用组织贴块法进行HUASMC原代培养，融合生长至80%左右时传代，经α-肌动蛋白单克隆抗体鉴定，纯度达97.0%，取3～5代细胞进行实验。

1.4 蜂胶水提液对Ang II诱导增殖的HUASMC总SOD活力及MDA含量的影响 细胞生长融合后胰酶消化，调整细胞密度至5×104个/mL，按每孔1mL接种于24孔板上，培养48h后同步化24h。将HUASMC随机分为：对照组：5% FCS的DMEM/F12；AngⅡ组：给予100nmol/L的AngⅡ作用24h；不同浓度的 WEP组：分别给予50、100、200mg/L的WEP预处理，然后加入100nmol/L的AngⅡ作用24h。根据分组施加处理因素作用24h，收集各组细胞培养液，计数每组细胞量，以1000r/min离心培养液10min，取上清，根据试剂盒的说明处理后，在755B分光光度计上550nm处检测SOD吸光度值、532nm处检测MDA吸光度值，根据下面的公式计算总SOD活力及MDA含量。

1.5 蜂胶对高脂新西兰大白兔总SOD活力 MDA及LDL含量的影响 健康雄性新西兰大白兔(购于山东省实验动物中心)，体重(2.0±0.3)kg，根据体重随机分为：①对照组：喂饲基础颗粒饲料。②模型组：喂饲高脂饲料(基础颗粒饲料+10%猪油+1%胆固醇)。③蜂胶组：喂饲高脂饲料+蜂胶0.175g/kg。12周末结束试验，耳缘静脉采血，分离血清后，在全自动生化分析仪用酶法测定血清LDL的含量；根据试剂盒的说明，在755B分光光度计上分别检测SOD、MDA的吸光度值，根据上述公式计算总SOD活力及MDA含量。处死动物后分离主动脉，组织学观察粥样斑块状况。

1.6 统计学处理 统计学结果以均数±标准差(±s)表示，用SPSS11.0统计软件进行单因素方差分析，P

2 结 果

2.1 体外实验结果 各组细胞加药前后细胞形态学无明显变化，0.1%台盼蓝染色，计数细胞存活率均达95.0%以上，表明所加药物无细胞毒性。

蜂胶各浓度组总SOD活力升高，较Ang II组和对照组差异显著(P

2.2 在体实验结果 蜂胶组与模型组相比，总SOD活力升高，MDA和LDL含量降低，差异均具有统计学意义P0.01)；蜂胶组与对照组相比，总SOD活力低，MDA和LDL含量高，差异显著P0.05)；具体影响见表2。

组织病理学改变：HE染色后，光镜下观察：对照组内膜、中膜、外膜3层结构完整；模型组出现典型AS病理变化，动脉内皮下层明显增生、增厚，大量泡沫细胞聚集形成，伴有纤维组织、无定型物质及钙盐沉积；蜂胶组仅内皮下轻、中度增生，有少量泡沫细胞聚集，未见纤维组织和无定型物质。

3 讨 论

蜂胶是公认的天然抗氧化剂，含有丰富的黄酮类化合物、不饱和脂肪酸、维生素E、维生素C及微量元素锌、硒等物质，因而具有清除自由基、降血脂、抗氧化等作用。过氧化氢酶、SOD是生物体内的天然抗氧化剂，其主要作用是清除生物氧化产生的自由基而起保护细胞的作用，其活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力，是反应抗氧化损伤的主要指标；而自由基对细胞的损伤程度可通过脂质过氧化的降解产物―MDA含量间接推断；因此测定MDA和SOD的变化可反映药物抗氧化能力。已有研究[3-4]表明蜂胶可明显提高过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活性，阻止自由基的形成和清除自由基，降低MDA含量。因此蜂胶对自由基和脂质过氧化引起的多种疾病有治疗作用。

在动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄形成时，活性氧如超氧化物自由基(O2-)、羟自由基(OH-)、过氧化氢(H2O2)的产生和清除失衡，即活性氧产生增加，而清除活性氧的SOD、过氧化氢酶等酶的活性下降；过剩的活性氧不仅使血管内膜通透性增加，VSMC增殖，而且引起生物膜中的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，产生脂质过氧化物，脂质过氧化物与动脉粥样硬化的形成密切相关，尤其LDL经氧化修饰生成的氧化型低密度脂蛋白对动脉粥样硬化的形成起着关键的作用。有研究表明蜂胶能有效地清除机体外产生的超氧阴离子和羟基自由基[5]，抑制高脂血症SD大鼠血清中的甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白的升高[6]。本研究表明高脂饮食可以促进动脉粥样硬化的发展，而服用蜂胶后LDL的含量降低，动脉粥样硬化病变减轻。

动脉中膜的血管平滑肌细胞向内膜下迁移并异常增殖是动脉粥样硬化发生的病理基础，大量研究表明AngⅡ能刺激VSMC增加ROS生成，从而促使在体和离体培养的VSMC增殖，参与动脉粥样硬化的发生。Griendling[8] 发现100nmol/L的AngⅡ作用于VSMC 4h，即可明显增加细胞内的H2O2水平，而SOD及过氧化物酶的活性不受AngⅡ影响，这证实AngⅡ诱使的增殖反应至少部分是通过与膜结合的NAD(P)H氧化酶来源的ROS介导的[7]，本实验在此基础上研究了蜂胶水提液抑制AngⅡ诱导的平滑肌细胞增殖过程中总SOD活力及MDA含量的变化。

本研究发现，在体外实验中Ang II组总SOD活力最低，与其它各组差异显著(P

因此，体内外实验证明蜂胶能抑制动脉粥样硬化的形成，在该过程中总SOD活性提高、MDA含量降低，这表明在抑制动脉粥样硬化的形成过程，蜂胶的抗氧化性能具有重要意义。

参考文献

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注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。”