不同剂量竹叶对关木通中马兜铃酸A溶出量的影响实验研究

作者：王亮，丁里玉，丁芳，李春香，朱晓卉，郝蕾

【摘要】 目的观察不同剂量竹叶对关木通中马兜铃酸a溶出量的影响。方法采用反相高效液相色谱法测定不同剂量竹叶配伍关木通中马兜铃酸a的溶出量。结果关木通马兜铃酸a溶出量为0.106 mg/ml；竹叶与关木通1∶4配伍其溶出量为0.041 mg/ml。结论中药竹叶可明显降低关木通马兜铃酸a溶出量61％；竹叶与关木通以1∶4配比对其马兜铃酸a的溶出量降低最明显。

【关键词】 竹叶； 关木通； 配伍； 马兜铃酸a； 肾毒性

abstract：objectiveto observe the effects of the dissolution of aristolochic acid a in aristolochiae manshuriensis by different doses of bamboo leaf.methodsthe dissolution of aristolochic acid a in different dose bamboo leaf mixed with aristolochiae manshuriensis was determined by rp-hplc.results①the dissolution of aristolochic acid a was 0.106 mg/ml in aristolochiae manshuriensis.②the dissolution of aristolochic acid a was 0.041 mg/ml in bamboo leaf mixed with aristolochiae manshuriensis(the ratio of bamboo leaf and aristolochiae manshuriensis was 1:4).conclusion①bamboo leaf can obviously reduce the dissolution of aristolochic acid a to 61%.②when the ratio of bamboo leaf and aristolochiae manshuriensis is 1:4,the reduction of dissolution of aristolochic acid a is the most significant.

key words：bamboo leaf; aristolochiae manshuriensis; compatibility; aristolochic acid a; nephrotoxicity

20世纪90年代，国内外文献曾报道关木通所含马兜铃酸对肾脏有损害，甚则可致肾衰竭，一些国家也因此禁止部分中药靠岸进入该国。2003年国家中医药管理局颁布了有关马兜铃属植物中药如关木通、青木香等禁止临床使用的通知。作为药物就有一定的药性，用之合理则治病，反之则致病，即“水能浮舟，也能覆舟”，中药也是如此。中药在中医理论指导下，以复方配伍形式，广泛应用临床，在中国已有数千年的历史，因其效果显著，且无明显副作用得到国内外广大医患的认可。而今马兜铃属植物中药出现肾毒性，原因何在？对此我们考察了国内外大量有关文献，发现有关“关木通肾毒”报道存在着与传统中药的应用不相符的现象，如配伍（植物药+化学药）、剂量（超过药典剂量）及用药时间（持续数月至数年）等，故于2002年开始进行单味药关木通与传统复方导赤散、导赤散拆方、龙胆泻肝丸等一系列相关的动物和马兜铃酸溶出量的实验研究，结果显示复方中关木通含量在与单味药关木通相同的前提下，复方组肾损害明显减轻；其马兜铃酸a含量也明显低于单味药。为了进一步找到降低关木通中马兜铃酸溶出量的药物，我们在原有研究的基础上，进行了不同剂量的竹叶对关木通中马兜铃酸a溶出量影响的实验研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器安捷伦高效液相色谱仪agilent1100， agilent1100色谱工作站，vwd紫外检测器；kq-500dv型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药马兜铃酸a 标准品（中国药品生物制品鉴定所，批号746-9002）；甲醇（色谱纯） （tedia）；冰醋酸（分析纯）；双蒸水（自制）。本实验所用中药如关木通、竹叶均购自石家庄乐仁堂药房，经河北医科大学药学院生药教研室聂凤?教授鉴定为马兜铃科植物木通马兜铃aristolochia manshuriensis kom.,俗称关木通。

2 方法与结果

2.1 单味药关木通中马兜铃酸a溶出量的检测［1,2］

2.1.1 关木通供试药液的制备关木通500g加水10倍煎煮沸腾40 min后，倾出药液；再加水6倍煎煮沸腾30 min后，倾出药液；后把两次药液混匀,过滤待测（每毫升相当含1g生药关木通）。

2.1.2 关木通中马兜铃酸a溶出量的检测分别取马兜铃酸a对照品药液(中国药品生物制品鉴定所，批号746-9002)、关木通供试药液（每毫升相当于1g生药关木通）。采用rp-hplc法测定结果：关木通中马兜铃酸a的溶出量为0.106mg/ml。

2.2 不同配比量竹叶对关木通中马兜铃酸a溶出量的影响［3～6］

2.2.1 不同配比量竹叶与关木通供试液的制备根据导赤散拆方实验结果，竹叶加关木通组马兜铃酸a溶出量最低，故本实验分别取竹叶与关木通1∶1，1∶2，1∶3，1∶4 等4个不同比例组加水浸泡、煎煮、浓缩、取汁方法同前（每毫升相当于1g生药关木通）。

2.2.2 检测不同剂量竹叶与关木通配伍中马兜铃酸a的溶出量分别取马兜铃酸a对照品药液（同前）、竹叶与关木通不同配比4个供试液组，均采用rp-hplc法测定，结果按大小次序排列：1∶2组0.087mg/ml，1∶3组0.082mg/ml，1∶1组0.070mg/ml，1∶4组0.041mg/ml。

3 讨论

关木通因其有肾毒已被停用，世人皆知［7，8］。中药用于临床是以复方形式出现，而今单味药或植物药与化学药组合等不符合中医用药规律现象比比皆是，与肾损害是否有关尚不十分清楚，故需慎重对待。为此我们做了相关实验，旨在探讨关木通与何种中药配伍对所含马兜铃酸a溶出量的影响。

3.1 复方导赤散及其拆方对关木通马兜铃酸a溶出量的影响20世纪90年代虽有中药关木通所含马兜铃酸a可导致肾损害的报道，但有关含关木通的复方是否有同样肾损伤未见报道。因此我们选用宋代·钱乙的导赤散进行肾毒性及马兜铃酸a溶出量的实验。结果发现在同等剂量下，复方导赤散组不论是肾毒性，还是马兜铃酸a溶出量均明显低于单味药关木通组。李时珍《本草纲目》记载“药有利也有弊”，而“复方有利而无弊”，是说中药通过君臣佐使配伍组方，不仅把“利”（疗效作用）可提高到最大限度，且可把“弊”（毒副作用）降低到最小。本实验采用rp-hplc法检测结果也充分证实了这一点，导赤散中马兜铃酸a溶出量较单味药关木通组明显降低了41％。提示导赤散四药组合具有显著抑制其马兜铃酸a溶出的作用。导赤散四药拆方重新组合的6个试验组结果显示，凡配有竹叶组其马兜铃酸a溶出量明显减少；凡配有生地组其马兜铃酸a溶出量降低不明显或增加。竹叶加关木通组马兜铃酸a溶出量最低，为0.041 mg/ml；较导赤散组降低35％。该实验说明竹叶对关木通中马兜铃酸a溶出具有显著抑制的作用。

3.2 不同配比量竹叶对关木通中马兜铃酸a溶出量的影响剂量是药物的常用有效量，也是药物作用的标识。如果剂量未达到最低有效量，则药效不佳；反之剂量过大，则不安全，会产生毒副作用。由此可见，在药物组合不变的前提下，剂量大小不仅决定药物的药效，也决定着其毒副作用。为了进一步寻求竹叶与关木通最佳配比量，故我们选择了4个不同配比量进行实验研究。结果发现，随着竹叶的配伍比例的变化而关木通中马兜铃酸a的溶出量也发生着变化。以马兜铃酸a溶出量来看，竹叶与关木通4个不同配比量组均明显低于单味药关木通组；竹叶与关木通配比量为1∶2，1∶3时，溶出量虽低于单味药关木通组，但无统计学意义；而竹叶与关木通配比量为1∶1，1∶4时，溶出量明显低于单味药关木通组30％以上；其中1∶4配比最低。由此可见，竹叶虽有抑制其马兜铃酸a溶出的作用，但与其配比例关系十分密切。本实验提示关木通虽含有马兜铃酸a，但若经过1/4竹叶的配伍，其马兜铃酸a溶出量则会明显降低，随之对肾脏损害毒副作用也会明显得到抑制或消失。换言之，关木通虽有毒，但通过合理配伍，科学用量，其副作用是可以避免的。

3.3 关木通肾毒性是相对的该实验结果提示临床选用任何中药，只要遵循中医“有证用药”的原则，合理配伍、合理用量，其不良反应或毒性是可以避免的。中药关木通，虽含有损伤肾脏的成分马兜铃酸a，但只要合理配伍，合理用量，其肾毒是可以被抑制或避免的。关于配伍竹叶可以抑制关木通中马兜铃酸a溶出的作用机制还有待于进一步深入研究。

【参考文献】

［1］李春香,丁里玉,李国川.复方配伍减低关木通肾毒性的实验研究［j］.中医杂志,2006,47(9):694.

［2］李春香,丁里玉,李国川.配伍减低关木通中马兜铃酸a溶出量的研究［j］.河北医科大学学报,2006,27(5):354.

［3］李锐,李春香.导赤散拆方与马兜铃酸相关性研究概况［j］.中医杂志,2006,47(12):200.

［4］李春香,朱晓卉,丁 芳.配伍降低关木通肾毒性的研究现状［j］.河北中医药学报,2005,20(2):35.

［5］丁英钧,王彦田,李春香.关木通肾毒性与剂量、时间的相关性研究［j］.中医杂志,2005,46(1):58.

［6］丁英钧,许庆友,李春香.复方配伍减轻关木通肾毒性的实验研究［j］.中药药理与临床,2004,20(3):4.

［7］丁英钧,王彦田,李春香.关木通与其复方肾毒性比较及相关毒性成分测定［j］.中国药理学通报,2004,20(9):1079.

［8］李春香,赵玉庸,陈志强.导赤散与单味关木通对动物肾毒性的比较研究［j］.中医杂志,2003,44(3):219