饮料、果汁中棒曲霉素的测定

【摘 要】检测果汁中棒曲霉素。方法：采用NY/T1650-2008和NY/T 2008-2007对果汁中的棒曲霉素进行了测定。结果：对20批次的果汁按上述方法进行了测定，均未检出。

【关键词】果汁;棒曲霉素;测定;高效液相色谱法

棒曲霉素属于真菌毒素，又称展青霉素。是由几种真菌如展青素（Pcnicillium patulum）或棒曲霉（As-pergillus clavatus）等产生的一种次级代谢产物，主要污染苹果和山楂及其制品。有抗革兰氏阳性、阴性菌活性，展青霉是一种有毒的真菌代谢产物，它是一种神经毒物，主要损害中枢神经系统，且具有肾脏和消化系统毒性，致癌性，致畸，致突变作用和免疫毒性。对蛋白质、核酸组成，酶活性、细胞呼吸和细胞膜传递增多有抑制作用。因此，及时对食品及其原料中的真菌毒素进行检测，防止真茵毒素污染的食品进入食物链，是预防真菌毒素对人和动物带来危害的主要手段。日本曾发生奶牛的展青霉素中毒，出现上行性神经麻痹，中枢神经系统水肿及灶状出血。但动物实验并不一定引起神经系统的损害。本实验室采用NY/T1650-2008和NY/T 2008-2007对果汁中的棒曲霉素进行了测定，试验结果如下：

1.材料与方法

1.1材料

方法中所用试剂，除另有说明外，均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682 规定的一级水。

乙腈：色谱级。

果胶酶,活性不低于1500TU/g，储存于2-8℃的冰箱中。

四氢呋喃溶液；吸取8mL四氢呋喃溶液：吸取8mL 四氢呋喃稀释至1000mL水中， 充分摇匀。

棒曲霉素标准液：100mg/L，0-4℃条件下贮存。

净化柱：Mycrosep228 Atlapat 柱（内装涂硅胶土、硅胶、硅酸镁载体、无水硫酸钙）。

分析天平：感量为0.0001g和0.01g。

高效液相色谱仪，配有紫外检测器。

氮吹仪。

1.2实验方法

展青霉素标准储备液：准确移取1.00mL展青霉素标准溶液（2.4）于10mL容量瓶中，用乙腈（4.1）稀释定容，充分混匀。该溶液每毫升含展青霉素标准物质10.0ug，有效期6 个月。

羟甲基糠醛标准储备液：准确称取0.02g 羟甲基糠醛标准物质于50mL 烧杯中，用甲醇溶解并定容至100mL，混匀。该溶液每毫升含羟甲基糠醛标准物质0.2mg。置于0-4℃冰箱中保存。羟甲基糠醛标准工作液：准确吸取1.0mL羟甲基糠醛标准储备液（2.7），用甲醇稀释定容至10mL，混匀。该溶液每毫升含羟甲基糠醛标准物质20.0ug。置于0-4℃冰箱中保存。

棒曲霉素混合标准工作液；分别移取1.00mL 展青霉素标准储备液（2.5）和1.00mL 羟甲基糠醛标准工作液（2.8）于离心管中，氮气吹至近干，用四氢呋喃溶液（2.3）转移至10mL 容量瓶中，定容至刻度，每毫升含青霉素标准物质1.00ug、羟甲基糠醛标准物质2.00ug，置于0-4℃冰箱中保存。

提取：试样中加入21mL乙腈于漩涡振荡器振荡2min后，静置分层，直接读取上清液体积V1。

净化： 移取约8mL提取液于试管中，过Mycrosep 228Atlapat 净化柱，收集净化液，准确移取5mL于10mL 试管中，40℃条件下用氮气吹至近干，加入0.50mL 四氢呋喃溶液，混匀，过滤膜，试液供测定。

测定：色谱柱：C18，5ug,250mm×4.6mm（i.d），或性能相当者。

流动相：四氢呋喃溶液（4.3）。

流速：1.0mL/min。

检测波长：276nm。

柱温：30℃。

进样量：10ul。

准确移取棒曲霉素混合标准工作液和样品待测溶液，分别进样，外标法定量。同时做空白试验。

图1 对照品图

图2 样品图

结果计算：试样中棒曲霉素的含量以质量分数ω 计，单位为微克每千克或微克每升（ug/kg ugL）表示，按公式计算：

式中：

As-试溶液中展青霉素的峰面积；

Astd-标准溶液中展青毒素的峰面积；

ρstd-展青霉素标准溶液的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；

V1-试样提取液的体积，单位为毫升（mL）；

V2-收集试样净化液的体积，单位为毫升（mL）,

V2＝0.5mL；

V3-试样最终定容体积，单位为毫升（mL）,V3＝0.5mL；

m-试样质量或体积，单位为克或毫升（g/mL）

2.试验结果

对20 批次的果汁按上述方法进行了测定，均无阳性结果。

3.讨论

高效液相法检测方法比较昂贵和耗时，因为检测过程中需要使用大量的有机溶剂、贵重的设备和繁杂的样品净化。且样品不容易处理干净，常常有干扰。检测方法具有高选择性，灵敏、快速、一次可检测多个样品、对样品的纯度要求不高、操作简单等特点，特别适合于大批量样本的检测［1］。我国在国家标准食品中真菌毒素限量GB2761-2005中规定，棒曲霉素/展青霉素在苹果、山楂制品中的最大限量是50ug/kg。2009年,我国制定预防和降低苹果汁及其他饮料的苹果汁配料中展青霉素污染的操作规范GB/T23585-2009，该标准于2009年8月1日起实施。国际食品法典委员会CAC的食品中污染物和毒素通用标准中规定，棒曲霉素/ 展青霉素苹果汁中的最大限量也是50ug/kg，其中此限量值适用于含苹果汁成分的其他饮料。本次试验回收率在85%～120%，线性相关系数大于0.9995，最低检出限为10ug/kg[2]。

【参考文献】

［1］赵珊,李凤琴,陈丽娟.多功能柱净化――高效液相色谱法测定果汁中展青霉素［J］.卫生研究.2007，36（5）:634-636.

［2］殷居易,倪梅林,谢东华.高效液相色谱测定浓缩苹果汁展青霉素的残留量［J］.分析科学学报.2007，23（1）:119-121.