艾滋病病毒检测方法研究

艾滋病病毒会对人体免疫系统造成较为严重的侵袭，使得人体出现较多的疾病。而艾滋病预防控制工作的重点就在于正确地诊断出HIV感染[1]， 只有确定了传染源，才能够对艾滋病传播进行更好的控制。而只有通过检测HIV的病毒分离培养、核酸、抗原、特异性抗体等之后，才能够确诊是否感染HIV [2]，从目前来看，实验室检测HIV的主要方法依旧是血清学实验。本文就艾滋病病毒检测方法研究进展进行探讨。

1 HIV 抗体检测

确证试验和初筛试验是目前较为常用的HIV 抗体检测技术，确证试验包括放射免疫沉淀实验、条带免疫实验、免疫印迹试验；筛查试验包括明胶颗粒凝集试验、胶体金免疫渗滤实验、免疫荧光、酶联免疫吸附试验（ELISA）。

2 HIV核酸测定

目前临床上检测HIV最为敏感的方法就是HIV核酸测定，多用于对病毒载量（HIV RNA 拷贝数）进行测定。人若感染HIV 后，血浆中病毒载量会与病情发展速度呈正相关关系。在艾滋病发病晚期和艾滋病初期感染时，HIV 病毒载量通常都是处于最高水平，但是也能够在慢性潜伏期检出。连接酶酶促链式反应、核酸序列依赖性扩增、分支DNA 信号放大系统、逆转录多聚酶链反应是四种测定方法。虽然病毒核酸检测方法的灵敏度较高，但是由于HIV 基因存在着较大的多样性，会让检测的敏感性存在着较大的限制。此外，在检测病毒核酸时，通常对于操作人员要求较高，操作复杂，检测试剂昂贵，检测仪器昂贵，既不能快速检测大量患者，又不能推广应用于基层医院[3]。

3 HIV的分离培养

HIV的分离培养通常都采用将受检者标本（、血浆、全血、PBMC及其他体液）与靶细胞（PBMC）共培养的方法，样本可采用、血浆、全血、PBMC及其他体液，但是新鲜抗凝全血是其首选样本。HIV分离培养结果为阴性，则不能排除HIV感染；但是只要结果为阳性，那么就说明其为HIV感染。HIV的分离培养可辅助诊断HIV感染，也可检测HIV表型耐药性，还可以用于研究HIV生物学特征[4]。

4 滤纸干血片法（DBSS）

近年来，传统方式的样本储存、样本运输、样本采集等方面的困难都被DBSS HIV-1 抗体检测方法所弥补。DBSS HIV-1 抗体检测方法能够定量检测HIV-1DNA RNA，生物稳定性较佳，实验的特异性和敏感性也不会随着而降低[5]。

5 免疫功能检查

通 常都采用非流式细胞仪测定法和流式细胞仪测定法来计数CD8+T淋巴细胞和CD4+淋巴细胞，检测设备多采用流式细胞仪，HIV感染者免疫状况可以通过CD4+T淋巴细胞计数来进行评价， 以此来作为临床治疗和分级指标的辅助条件； 可判断是否需要预防性治疗及预后状况，也能够对HIV感染者的感染风险和疾病进展进行有效地评估。据研究，CD4T淋巴细胞/CD8T淋细胞越低，那么则证明免疫缺陷越严重。

6 抗原检测

p24 抗原检测技术是目前临场上较为常见的HIV 抗原检测。 p24抗原在病毒的成熟过程和包装过程中往往都会起到较为重要的作用，是HIV的主要结构蛋白。缺失 p24，会造成无法正常组装病毒的情况，p24 抗原是较好地检测机体是否感染 HIV的病原学标志。 HIV在感染后2～3w就能够被有效地检测出来，抗原高峰期则是在感染后1～2 月。 随着时间的推移，HIV 感染者就会进入到无症状期，p24 抗原浓度会出现大幅度地降低，直至难以测出。当血清中HIV 抗原再度增长，那么就说明HIV感染者已濒临艾滋病发作期，免疫系统被破坏，病毒大量繁殖。HIVp24在艾滋病的基础研究、新疫苗的评价、药物疗效评价、鉴定新生儿感染、早期诊断HIV 感染、判断预后、监测病程进展等方面具有极为重要的作用。

HIVp24 抗原检测主要包括IFA（免疫荧光分析技术）、RIA（放射免疫分析）、ELISA（酶联免疫吸附试验）三种技术，其中，对HIV 感染检测最为敏感的常规方法就是测定 p24 抗原技术，以夹心法 ELISA 为基础。

7 HIV耐药性检测

HIV 耐药变异株随着HAART（高效抗逆转录病毒联合疗法）的广泛开展而不断出现，还很容易出现药物交叉耐药的现象。从目前来看，表型检测法和基因型检测法是检测各种HIV-1耐药性的主要方法。

8 HIV-1新近感染检测

总之，特异度高、灵敏度高的分析方法能够便于早期诊断HIV，有利于对疾病进程进行监测和预测，避免漏检，缩短检测的窗口期。随着医疗技术的快速发展，HIV 的实验室检测正朝着自动化、准确、敏感、快速、简便的方向不断发展。

参考文献：

[1] 姜拥军，王亚男，张子宁，等. 艾滋病病毒感染者/艾滋病病人临床实验室检测方法研究[J]. 中华检验医学杂志. 2013，26（03）：102-104.

[2] 赵立庆，雷素萍，李连学，等. ELISA法检测尿液中HIV-1抗体的研究分析[J]. 中国艾滋病性病. 2013，33（05）：130-136.

[3]Weber B， Berger A， Rabenau H， et al . Evaluation of a New Combined Antigen and Antibody Human Immunodeficiency Virus ScreeningAssay ，VIDAS HIV DUO Ultra[J]. J Clin Microbiol ， 2012， 40（4）： 1420-1426.

[4]Celum CL， Coombs RW， Jones M， et al. Risk factors for repeatedly reactive HIV-1 EIA and indeterminate western blots. A population-based case-control study[J]. Arch Intern Med ， 2014， 154（5）： 1129-1137.

[5]Weber B，Fall EH，Berger A，et al.Reduction of diagnostic windowby new fourth-generation human immunodeficiency virus screening assays[J]. Journal of Clinical Microbiology，2012，68（14）：130-135.

[6]Schüpbach J，Flepp M，Pontelli D，et al.Heatmediated immune complex dissociation and enzymelinked immunosorbent assay signal amplification render P24 antigen detection in plasma as sensitive as HIV 1 RNA detection by polymerase chain reaction，AIDS，1996，10（10）：1085-1090.编辑/许言