紫丁香叶中总皂苷提取论文

1仪器与材料

日本岛津紫外分光光度计UV-2401PC（北京）；电子天平MettlerCE240(上海)；试剂均为分析纯；齐墩果酸标准品（供含量测定用）购于中国药品生物制品检定所；紫丁香叶为200609采摘的新鲜叶(由长春中医药大学邓明鲁教授鉴定)，干燥备用。

2方法与结果

2.1紫丁香叶总皂苷的不同提取方法

2.1.1水煎法

取干燥的紫丁香叶100g，加水文火煎煮3次。第1次12倍量水煎2h，后2次加10倍量水，煎1.5h，合并3次提取液，过滤，浓缩，80℃减压干燥，称重。同法做3次平行实验，计算平均得膏率。得膏率(%)=干膏重/生药量×100%。

2.1.2醇提法

传统的提取总皂苷的方法为乙醇提取，因此本实验选用70%乙醇回流提取。取干燥的紫丁香叶100g，用70%乙醇回流提取3次，1.5h/次，加醇量分别为12，10，8倍量。合并提取液，过滤，浓缩80℃，减压干燥，称重。同做3次平行实验，计算平均得膏率。

2.1.3超声波法

取两份干燥的紫丁香叶100g，分别加10倍量水和70%乙醇超声3次，30～40min/次，合并提取液，过滤，浓缩，减压干燥，称重。同法做3次平行实验，计算平均得膏率。

2.2紫丁香叶总皂苷含量测定方法

2.2.1对照品溶液的制备

以齐墩果酸作为标准品，精密称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品11.04mg置于25ml容量瓶中，加甲醇5ml超声处理5min，用甲醇定容至刻度，摇匀得浓度为0.44mg/ml的对照品储备液。

2.2.2测定波长的选择

精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.05ml及供试品溶液1ml于10ml具塞试管中，水浴挥干溶剂，精密加入新配制的5%香草醛－冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，加塞，摇匀，于60～65℃水浴中加热15min，取出，流水冷却至室温后，精密加入醋酸乙酯5ml，摇匀，以相同试剂为空白，在450～900nm波长范围内扫描。齐墩果酸对照品在553nm处有最大吸收，样品溶液在546nm处有最大吸收（见图1），但在550nm处也有强吸收，故选择550nm为测定波长。

2.2.3标准曲线的制备精密吸取齐墩果酸对照品溶液(mg/ml)0.05，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50ml分别加入6支具塞试管中，即各试管中标准品的量分别为0.022，0.044，0.088，0.132，0.176，0.220mg，按照“2.2.2”项下操作，按分光光度法［5］,于550nm处测定吸光度。得到吸光度与浓度的方程：A=8.3425C+0.0527,r=0.9995(n=6)。在22～220μg范围内齐墩果酸对照品显色后的吸光度与浓度呈良好线性关系。

2.2.4供试品含量测定取“2.1”项下的5组干粉各2.5g，30ml甲醇溶解，称重，超声20min，补足损失的重量，摇匀过滤，取续滤液1ml甲醇定容到100ml，作为供试品溶液。取供试品溶液1ml于10ml具塞试管中，按照标准曲线项下的操作方法测定样品的吸光度。然后根据线性方程计算其总皂苷的含量。结果见表1。表1紫丁香叶中总皂苷不同提取方法含量比较（略）

2.3正交实验法优选紫丁香叶总皂苷醇提工艺通过表1可以看出，不同提取方法直接影响着紫丁香叶总皂苷的测定结果，虽然超声波提取法是近几年发展起来的提取方法，节省时间，而且溶剂用量少，但该法出膏率低，提取得到的总皂苷含量较低，不宜采用。综合考虑，70%乙醇提取总皂苷是比较合适的提取方法。为此，设计醇提正交，以进一步优化醇提工艺。

2.3.1因素水平的确定根据实际情况，选择提取次数（A），提取时间（B），溶媒量（C），醇浓度（D）4个考察因素，每个因素各设置3个水平。因素水平见表2。

2.3.2实验方法及指标考察取紫丁香叶100g，按L9(34)正交表安排实验。共9组实验，每组两次平行实验，以总皂苷含量为指标，测定结果取其平均值。结果见表3，方差分析见表4。表2醇提因素水平（略）表3正交实验结果（略）

3讨论

目前《中国药典》尚未收录紫丁香叶，而且尚未见国内有关于紫丁香叶总皂苷含量的报道。本实验中选用皂苷类比较常见的母核结构——齐墩果酸为对照品，对总皂苷的含量进行测定，不失为一种较好的选择。

在提取时间因素的水平选择上，提取时间太长，成本高，不利于生产，时间短提取不完全。因此选择了1.0，1.5，2.0h3个提取水平；溶媒用量根据实际的浸渍情况，选择12，13，14倍量3个水平；同时预实验结果表明50%以下醇提所得总皂苷含量较低，因此选择50%，70%，90%3种醇浓度水平。表4方差分析（略）

由表3的直观分析结果可知，优选出的提取工艺为A2>C2>D3>B2。由表4的方差结果分析可知，A，C因素对醇提工艺均有显著影响，D因素对醇提有影响，而B因素对结果没有影响。因此，为节省能源，选择提取1.0h。即最佳提取工艺为A2B1C2D2，即以70%乙醇回流提取2次，1h/次，加醇量为13倍量/次。验证实验表明，此提取工艺得到满意的实验结果。

【参考文献】

［1］孙传奇．辽宁省中药资源名录［M］.沈阳：辽宁省中药资源普查办公室，1987：46.

［2］Harbome,J．B．AchemotaxonomicsurveyofflavoriodsinleavesoftheOleaceae［J］.Bot．J．Linn,soc,1980,8(2)：155.

【摘要】目的优选紫丁香叶中总皂苷的提取工艺。方法采用香草醛－冰醋酸－高氯酸显色法，用紫外分光光度计测定不同提取方法下所得紫丁香叶药材中总皂苷的含量，选出紫丁香叶总皂苷的提取工艺。进而设定正交实验，来优选最佳提取工艺。结果总皂苷的最佳提取工艺为70%乙醇回流提取2次，1h/次，加醇量为每次13倍量。结论此工艺安全、成本低，得到的总皂苷含量高，可作为提取紫丁香叶生产工艺参考。

【关键词】紫丁香叶总皂苷正交设计提取工艺