抗核小体抗体检测对系统性红斑狼疮诊断的意义

【摘要】 目的 探讨抗核小体抗体(AnuA)在系统性红斑狼疮(SLE)中的诊断意义及其与狼疮性肾炎(LN)的关系。方法 用免疫印迹法检测50例系统性红斑狼疮(SLE)患者、50例其他风湿性疾病患者以及30例健康体检者血清AnuA水平,同时检测血清ANA,抗dsDNA抗体、抗-Sm抗体。分析AnuA对SLE的诊断价值及其与狼疮性肾炎的关系。结果 AnuA在SLE患者的敏感性和特异性分别为70.0%和98.0%,敏感性高于抗dsDNA抗体、抗-Sm抗体,且有显著性差异;特异性与抗dsDNA抗体、抗-Sm抗体差异无显著性;AnuA在狼疮性肾炎患者中的阳性率为83.3%,在无肾损害患者中的阳性率为50.0%,二者有显著性差异(P

【关键词】系统性红斑狼疮;狼疮性肾炎;抗核小体抗体

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种累及全身多个系统、多器官、以血管炎为特征的弥漫性自身免疫病。在SLE的发病过程中不仅有T细胞参与,同时伴有B细胞的高度活化,患者血清中可以出现多种自身抗体,通过自身抗体-自身抗原的相互作用,引发一系列免疫反应,最终导致全身多个组织和器官的损害。

肾脏是系统性红斑狼疮最常累及的器官之一,LN(lupus nephritis,LN)是SLE最主要的并发症和死亡原因,自身抗体在狼疮性肾炎的发生、发展过程中占有非常重要的地位。通常认为抗dsDNA(Anti-double stranded antibody)在狼疮肾炎发病机制中起重要作用,观察发现,抗dsDNA效价增高往往先于肾疾病发生,富含抗dsDNA抗体的免疫沉着物出现在肾小球和肾小球洗脱液中。近年来先后有文献报道认为,核小体(nucleosome)可能与SLE的发病及病理变化直接相关,核小体亦成为风湿领域研究的热点。越来越多的报道显示,抗核小体抗体(Anti-nucleosome antibodies,AnuA)较已知的SLE特异性自身抗体如抗Sm抗体、抗dsDNA抗体敏感性高,且与LN联系较抗dsDNA更为密切[1-5]。本研究通过对SLE患者、其他风湿性疾病患者以及健康体检者血清AnuA水平、ANA、抗dsDNA抗体、抗-Sm抗体的测定,探讨AnuA及其与其他自身抗体联合检测对SLE诊断的意义,同时探讨其与LN发病的关系。

1 资料与方法

1.1 检测对象 2006年12月至2008年10月在辽宁中医药大学附属医院门诊及住院的自身免疫性疾病患者, SLE患者50例,其中女40例,男10例,年龄13~66岁,平均38岁,诊断均符合1997年美国风湿病学会修订的SLE分类诊断标准,病史1个月~25年,平均3年。疾病对照组50例,男5例,女45例,年龄19~76岁,平均(43±13)岁,病程2个月~30年,平均4年;其中包括类风湿性关节炎(RA)30例,系统性硬化症(SSc)10例,混合性结缔组织病(MCTD)10例,诊断均符合各自的国际诊断标准。健康体检者30例,男6名,女24名,年龄17~70岁。

1.2 标本采集 受检者均空腹抽取静脉血5 ml,3000r/min 离心10 min,分离血清,-20℃冰箱保存。

1.3 试剂及检测方法 应用Western-blot方法同时检测AnuA、抗dsDNA及抗Sm抗体ANA(抗核抗体)检测采用间接免疫荧光法。试剂盒均采用德国欧蒙公司产品,严格按试剂盒说明书操作,判定结果。

1.4 数据处理 使用SPSS 10.0统计软件,采用描述性统计方法及统汁推断,组间比较采用χ2检验进行统计分析。

2 结果

表1

各组自身免疫病患者4种自身抗体的阳性率(例,%)

组别例数ANAAnuA抗dsDNA抗Sm

SLE5048(96.00)35(70.00)28(56.00)15(30.00)

RA3015(50.00)1(3.30)3(10.00)1(3.33)

SSc1012(75.00)1(6.30)0(0.00)1(6.00)

MCTD107(70.00)0(0.00)0(0.00)0(0.00)

健康301(2.00)0(0.00)0(0.00)0(0.00)

在50例SLE患者中ANA、AnuA、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体的阳性率分别为96.0%、70.0%、56.0%、和30%,均明显高于疾病对照组,差异有统计学意义(P

表2

AnuA与ANA、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体对SLE诊断的敏感性和特异性比较

敏感性χ2P特异性χ2P

AnuA70.0--93--

ANA96.02.9010.7123118.296

抗dsDNA56.016.243

抗Sm30.017.628

4种抗体对SLE诊断的敏感性,AnuA低于ANA,但差异无统计学意义(P>0.05);AnuA高于抗dsDNA和抗Sm,且有统计学差异(P0.05),见表2。

在SLE诊断中,AnuA与抗Sm抗体、抗dsDNA抗体联合检测时敏感性显著提高,与单一检测比较有统计学差异(χ2值分别为17.628、16.243,P0.10),即自身抗体的联合检测,提高了诊断的敏感性,并不降低特异性。ANA与AnuA联合检测与单一检测比较敏感性、特异性无统计学差异(χ2值分别为2.901、18.296,P

表3

AnuA与其他自身抗体联合诊断敏感性和

特异性比较(%)

诊断方法敏感性(%)特异性(%)

单一检测AnuA70.0093.00

抗Sm30.0091.00

抗dsDNA56.0092.00

ANA96.0031.00

联合检测AnuA+抗Sm74.1795.29

AnuA+抗dsDNA82.5094.12

AnuA+ANA95.0080.00

ANA+抗Sm92.5081.18

ANA+抗dsDNA93.3381.18

表4

LN组与非LN组血清抗核小体抗体,抗dsDNA,抗Sm抗体阳性率(例,%)

组别例数

AnuAdsDNA抗体抗Sm抗体

阳性数阳性率阳性数阳性率阳性数阳性率

LN组302583.3%2066.7%1033.3%

非LN201050%840%525.0%

表5

LN患者AnuA、抗-dsDNA抗体阳性例数的比较(例)

LN组抗-dsDNA抗体+抗-dsDNA抗体-

AnuA+178

AnuA-32

LN组与非LN组血清AnuA、抗-dsDNA抗体、抗-Sm抗体阳性率比较可见:LN组患者血清AnuA、抗-dsDNA抗体阳性率与非LN组患者比较有统计学差异(P

3 讨论

SLE以患者血清中出现大量的自身抗体为主要特征,尤其是出现针对整个染色质(核小体)及其某些成分如组蛋白、dsDNA的自身抗体,核小体是真核生物细胞染色的基本单位,当细胞受到致病因素作用时,细胞发生线粒体肿胀,细胞膜破裂并导致核小体的释放。近年来,核小体的致病作用愈来愈引起人们的重视。越来越多的证据表明,DNA并非是引起SLE的免疫原,而由组蛋白和DNA组成的核小体很可能是SLE发病中最重要的自身抗原,启动最终的自身免疫反应。

核小体是人类SLE主要自体抗原之一,在诱导SLE、LN发生和发展,抗核抗体反应中起重要作用。1978年Hannested等[7]首先描述了AnuA。1993年Burlingame等[3]第一次以鼠模型显示AnuA由T辅助细胞免疫反应产生。SLE患者细胞凋亡异常及凋亡产物清除障碍导致的核小体过度释放、AnuA及抗dsDNA抗体的产生很可能是本病免疫异常的主要诱发环节之一[7,8]。核小体又可通过与靶细胞表面特异性受体的交互作用引起细胞坏死,从而使炎症加剧[9]。Berden等[10]认为细胞凋亡是机体产生核小体的唯一途径,同时凋亡过程还为这些自身抗原提供修饰,增强其免疫原性,当机体清除能力下降时,便激发自身免疫反应。生理情况下,凋亡形成少量核小体迅速被邻近单核巨嗜细胞吞噬,故不诱导炎症反应,不能在外周血清中检出凋亡核小体。病理情况下,大量细胞发生坏死或凋亡,产生核小体不能被及时清除,大量释放到细胞间质中,诱导机体产生一系列自身抗体,早期以AnuA为主,后期出现抗dsDNA抗体[11]抗组蛋白抗体[12-14]。而细胞凋亡和自身抗体是互相作用互相加强的,一些自身抗体进入细胞内,甚至到达细胞核,引起功能紊乱,诱发凋亡。

本研究显示,血清中AnuA对于SLE诊断具有较高的敏感性和特异性。国外学者 [15]发现,AnuA对SLE敏感性和特异性分别为64.2%和98.8%。国内研究[15]亦提出AnuA可出现于SLE疾病进程的各个时期,对SLE诊断的敏感性(69.9%)高,特异性(97.9%)强,可能是SLE诊断的标记性抗体之一。本研究中,AnuA对SLE的敏感性和特异性分别为70%、93%,与以往报道[16]相比,敏感性和特异性接近。与其他自身抗体比较诊断敏感性方面虽不及ANA但高于抗dsDNA、抗Sm抗体,其特异性很好,与抗dsDNA、抗Sm抗体相近且高于ANA。AnuA与抗dsDNA联合时,诊断SLE敏感性为74.17%;AnuA与抗Sm联合时,诊断SLE敏感性为82.50%,较单一抗体诊断,敏感性显著提高,且不降低特异度。故AnuA阳性可作为SLE敏感而特异指标之一,增加AnuA检测作为常规使用在联合诊断SLE中有重要价值。

LN是SLE最主要的的并发症和死亡原因,抗-dsDNA抗体是公认的与肾损害密切相关的自身抗体。近年来有研究显示,将纯化的核小体注入健康小鼠,诱导LN的发生,提示核小体与LN的发生密切相关。在LN的肾小球基底膜的沉积物中发现有核小体和AnuA复合物,这些免疫复合物沉积在肾小球基底膜,固定并活化补体,所释放的趋化因子吸引中性粒细胞,释放炎性介质导致LN的发生[17,18]。本研究结果显示,在50例SLE患者中,AnuA和抗-dsDNA抗体在LN患者组的阳性率显著高于SLE无LN组(P

综上所述,AnuA是诊断SLE的一个标记性抗体,它与LN的发生密切相关,在检测其他抗体的同时检AnuA是对SLE诊断、治疗的必要补充。

参 考 文 献

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