快速免疫组化检测CK5/6在乳腺肿瘤病理诊断中的应用价值

判断肌上皮的存在与否，对乳腺疾病的病理诊断和鉴别诊断具有非常重要的意义[1]。我们发现有时单纯依靠冰冻切片的形态学难以做出判断，需要进一步借助免疫组化来协助诊断。CK5/6的分子量在5400～5600，在乳腺腺管的中间腺细胞、定向干细胞和中间肌细胞的胞浆中清晰表达[2]。本课题继续探讨在乳腺肿瘤术中快速应用免疫组化技术检测CK5/6对冰冻诊断的价值，旨在乳腺肿瘤术中提供较为准确的检测结果。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2014年6月～2015年2月我院病理科22例乳腺肿瘤术中的冰冻切片，其中浸润性导管癌7例、导管原位癌3例、导管状瘤3例、状癌2例及其他良性乳腺肿瘤7例。纳入标准为：①阅冰冻HE片后，是否浸润难以确定；②良恶性难以区分。

1.2主要试剂 即用型EnVision super非生物素免疫组化检测试剂盒，鼠抗人CK5/6 单克隆抗体，阳性对照选用迈新公司提供的阳性对照片，阴性对照选用鼠IgG同比稀释液。

1.3方法

1.3.1常规免疫组化检测技术 ①石蜡切片65℃烘箱2h后，常规脱蜡水洗；②高温高压修复，PBS 清洗3min×3次；③除去PBS液，置放在4℃冰箱，滴加一抗后PBS清洗3min×3次，滴加二抗后存放在室温下孵育30min；④除去PBS液，DAB显色，高倍镜下观察；⑤自来水冲洗后进行苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明及中性树胶封固。

1.3.2快速免疫组化检测技术 ①冰冻切片甲醇固定20s后迅速入PBS清洗3次；②滴加一抗37℃孵育10min后再予PBS清洗20s 3次；③二抗37℃孵5min后予PBS清洗20s 3次；④DAB显色，苏木素复染10s，常规脱水封片。

1.4 判断结果 将阳性细胞按其数量及染色强度分为3级，按阳性细胞所占比例及分布情况记录如下：阳性细胞数50%记为强阳性（+++）。

1.5统计学处理 采用SPSS 18.0 统计软件进行数据统计分析，计数资料采用χ2检验，以P

2 结果

22例乳腺肿瘤患者的术中冰冻切片行快速EnVision免疫组化法，结果发现无明显的信号染色干扰背景，两种免疫组化检测技术诊断结果符合率高但清晰度及步骤优于组织切片常规免疫组化染色，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

3 讨论

大部分乳腺肿瘤的腺泡周围有功能性血管纤维结缔组织，乳腺整个腺管系统均被覆有腺上皮和肌细胞两层细胞。腺泡在病变情况下，细胞形态及成分比例的变化，不同病变其免疫组化表型也各有不同，特别是判断肌上皮的存在与否对乳腺疾病的病理诊断和鉴别诊断是非常重要的[3]。但在HE切片上，是很难对此做出判断的。在乳腺腺管的中间腺细胞、定向干细胞和中间肌细胞中表达CK5/6，其中85%～98%普通导管增生CK5/6强阳性，而导管原位癌和不典型导管增生中的表达明显减少，可作为导管原位癌和小叶原位癌，普通导管/小叶增生鉴别的有用标记物[4，5]。快速免疫组化法与常规法相比，步骤相应缩短。此外，因抗原非常新鲜，与一抗二抗结合的时间缩短，也不易发生抗原丢失的现象，对实验结果不会产生影响。本研究发现，快速EnVision免疫组化法检测CK5/6在乳腺肿瘤中的表达结果与常规免疫组化相比，病理诊断结果相符率较高。22例乳腺肿瘤患者的冰冻切片中，除1例导管原位癌的CK5/6的表达EnVision快速法为阴性但常规法为阳性外，其余诊断结果均基本相符。笔者分析可能是由于连续切片后，只选一片组织做检查出现无所测抗原或者是个别组织对抗体的表达差异而造成的。

病理诊断医师在巨检的时候，凭经验认为仅凭阅冰冻HE片可能难以区别良恶性，往往需要借助免疫组化结果来诊断，常规冰冻切片可以和快速免疫组化同步进行，不影响冰冻诊断的出报告时间。在阅冰冻HE片后，需要借助免疫组化结果来诊断的可以进行快速免疫组化法，能起到明确诊断的关键作用。

综上所述，笔者认为应用快速EnVision免疫组化法检测乳腺术中冰冻标本中CK5/6的表达情况，速度快且准确率高，对病理医生诊断所测乳腺标本的病理学类型发挥重要作用，并为临床医生决定手术方法和范围提供有效帮助。

参考文献：

[1] 吴秉铨， 刘彦仿. 免疫组织化学病理诊断[M]. 北京科学技术出版社， 2007： 9.

[2] 何沁， 徐华. 乳腺肿瘤冷冻切片诊断中快速EnVision 技术的价值[J]. 临床与实验病理学杂志， 2014， 23 （5）： 553-556.

[3] Moriya T， Kozuka Y. The role of immunohistochemistry in the differential diagnosis of breast lesions[J]. Pathology， 2009， 41（1）： 68-76.

[4] 陶怡菁， 吴克瑾. 检测CK5诊断乳腺恶性状病变的应用[J]. 外科理论与实践， 2010， l5（5）： 490-493.

[5] Rakha EA， Putti TC. Morphological and immunophenotypic analysis of breast carcinomas with basaland myoepithelial differentiation[J]. J Pathol， 2006， 208（4）： 495-506.编辑/冯焱