水溶性伊红Y不同配置法对HE染色效果的影响

摘要：目的 分析伊红染色液的不同配制方法与染色效果间的关系，旨在探寻最佳染色液配制方法。方法 取胆囊及阑尾石蜡包埋组织蜡块标本，连续切片，分为两组，对照组采用常规染色液染色，观察组采用改良染色液染色。比较染两组染色效果、染色耗时、染色液使用时间等常规指标。结果 观察组：将浓盐酸加入伊红Y水溶液后，可见鲜红色絮状沉淀产生，其干燥物在95%乙醇中具有较好的溶解度，充分溶解后溶液呈橘红色澄明状；且镜下未见沉渣；染色效果较好，着色清晰且细腻，染色耗时较短；染色液保存3个月后仍有较好的染色效果。对照组：将冰醋酸加入伊红Y水溶液后，溶液颜色由暗红不透明变为亮红透明状，且镜下可见较多沉渣；染色耗时较长，切片染色效果较差，染色区分不清晰；染色液保存时间约为3个月。结论 改良配制方法具有较好的染色效果，值得实验室推广应用。

关键词：HE染色；伊红；配制方法；效果

常规切片技术为病理技术中的基础工作，切片质量的高低直接反映了诊断的准确性，也反映了医院诊疗水平的高低。HE染色为使用最为广泛的组织切片染色方法，其操作步骤较多，其中，染色液的配置方法和使用均为影响染色效果的因素，其可对切片染泽的稳定性、对比度等产生较大影响，必须进行科学的研究[1-2]。本文着重分析伊红染色液的配制方法与染色效果间的关系，旨在探寻最佳染色液配制方法。

1 材料和方法

1.1材料及试剂 胆囊及阑尾标本（手术室提供石蜡包埋组织蜡块）；95%乙醇（国药集团试剂厂，分析纯）；水溶性伊红Y（化学纯，上海善普化工科技有限公司）；其他试剂为实验室常规试剂，均为分析纯。

1.2染色液配制方法 水溶性伊红Y染色液分别采用常规法和改良法进行配制。常规法：称取伊红Y1g，置于250ml烧杯中，加入100ml蒸馏水，充分搅拌使溶解后静置过夜。采用定性分析滤纸过滤去除残渣，取滤液备用，使用前加入0.1ml冰醋酸。改良法：称取伊红Y1g，置于250ml烧杯中，加入100ml蒸馏水，充分搅拌使溶解后缓缓滴入浓盐酸2mL，玻璃棒搅拌5min后静置过夜。采用定性分析滤纸过滤，使用蒸馏水冲洗残留物2次。残渣连同滤纸一起放入60℃烘箱干燥4h。将干燥后的残渣置于500ml烧杯中，加入200ml95%乙醇，充分搅拌使溶解。使用前加用200ml95%乙醇稀释。

1.3组织切片制备 取胆囊及阑尾石蜡包埋组织蜡块标本，连续切片，每个组织切20张，共40张，分为两组，每组胆囊及阑尾切片各10张。染色前制片方法相同，一组采用常规染色液染色，另一组采用改良染色液染色。

1.4结果观察 染色完成后由两名高年资病理医生经显微镜（40倍）下观察染色结果，以染色鲜艳、色泽分明、对比清晰、无沉渣为切片染色效果较好。比较两组染色液染色耗时、使用时间等常规指标。

2 结果

观察组：将浓盐酸加入伊红Y水溶液后，可见鲜红色絮状沉淀产生，其干燥物在95%乙醇中具有较好的溶解度，充分溶解后溶液呈橘红色澄明状；且镜下未见沉渣；染色效果较好，着色清晰且细腻，染色耗时较短；染色液保存3个月后仍有较好的染色效果。对照组：将冰醋酸加入伊红Y水溶液后，溶液颜色由暗红不透明变为亮红透明状，且镜下可见较多沉渣；染色耗时较长，切片染色效果较差，染色区分不清晰；染色液保存时间约为3个月。

3 讨论

伊红为人工合成的醌式苯环结构的酸性染料，其外观为砖红色或紫红色的晶体状物质，为荧光酚酞类衍生物，可见黄绿色荧光。伊红Y为其中的一种晶体，为与苏木精配对染色的理想染料。因其具有较好的水溶性可在水中充分离解，离解后的阴离子可与蛋白质的阳离子充分结合，从而对细胞质进行染色。其染色结果为红色或粉红色，可与细胞核的蓝色染色形成对比，具有染色清晰、便于诊断的优点[3-4]。

传统伊红染色液的配制可产生一定的不足，如染色较浅、细胞核与细胞质染色对比不清晰、染色时间较长且较易褪色，染色不稳定等不足，给病理诊断带来了较大的困难。其原因为细胞质的染色结果与染色液的酸碱度密切相关，只有将染液的pH值调整到细胞质等电点以下即pH

本文中，笔者经过试验，通过将水溶性伊红Y水解后的残渣连同滤纸一起放入烘箱干燥，将干燥后的残渣使用95%乙醇充分溶解，增加了伊红的溶解度，保证了伊红染液的稳定性，经与常规配制方法比较，改良配制方法具有较好的染色效果，值得实验室推广应用。

参考文献：

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