HPLC法测定炎宁胶囊中对香豆酸含量的分析

摘 要：目的：研究炎宁胶囊中对香豆酸的含量测定方法。方法：用60%乙醇超声提取，以Agilent XDB C18色谱柱为固定相，甲醇：0.3%磷酸=45∶55为流动相，检测波长为308nm。结果：阴性样品无干扰，方法专属性良好；在0.59～11.8μg/ml范围内，对香豆酸的峰面积与进样量有良好的线性关系，R2=0.9999；平均回收率为102.5%，RSD为0.22%；供试品溶液在24小时内稳定性良好。结论：方法快速，简便准确，可用于该制剂的稳定性考察及成品质量控制。

关键词：高效液相色谱法；炎宁胶囊；对香豆酸；含量测定

炎宁胶囊的主要成分有鹿茸草、白花蛇舌草、鸭跖草。其中鹿茸草用于咳嗽，吐血，赤痢，带下，牙龈炎，乳腺炎，疖肿。白花蛇舌草清热解毒、消痛散结、利尿除湿。尤善治疗各种类型炎症。鸭跖草清热解毒，利水消肿。治水肿，脚气，小便不利，感冒，丹毒，腮腺炎，黄疸肝炎，热痢，疟疾，鼻衄，尿血，血崩，白带，咽喉肿痛，痈疽疔疮。炎宁颗粒由以上三味药精制而成，其中所含的对香豆酸是其主要的有效成分之一[1]。为了能更有效地控制其质量，文章采用高效液相色谱法建立了对香豆酸的含量测定方法。

1 仪器与试药

仪器： Agilent 1200 Series 高效液相色谱仪；Agilent DAD检测器， Agilent 化学工作站。

试药：甲醇，色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

对香豆酸对照品（由上海永恒生物科技有限公司提供，供含量测定用）。

2 测定波长的选择

对对香豆酸进行紫外波长扫描，结果在308nm处有最大吸收波长，在此吸收波长下，对对香豆酸进行含量测定。对香豆酸的紫外扫描图见图1。

图1 对香豆酸UV光谱图

3 色谱条件

色谱柱：Agilent XDB C18色谱柱（5？滋m，250×4.6mm），检测波长308nm，流动相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55，流速0.8ml/min。在此条件下，样品能得到较好的分离，理论板数按对香豆酸计算均不得低于3000。见图2（a）是样品液相色谱图， （b）是对照品溶液液相色谱图。

4 对照品溶液制备

精密称取五氧化二磷减压干燥至恒重的对香豆酸标准品11.8mg，加甲醇使溶解，并定容至25mL，精密移取上述溶液2.5mL加甲醇稀释至100mL，摇匀，即得。作为对照品贮备液。

5 供试品溶液的制备

取本品内容物约0.5g，精密称定，置50mL量瓶中，加60%乙醇超声（40kHz，30℃）10min溶解，放置至室温后定容，如有泡沫，滴加少量甲醇使泡沫消失，摇匀，过0.45？滋m微孔滤膜，即得。

6 线性关系考察

精密吸取对照品贮备液0.5、2、4、6、8、10ml分别置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，即得对香豆酸标准系列溶液。分别进样10？滋l，按上述色谱条件测定对香豆酸峰面积。以峰面积为纵坐标，木犀草素进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果见表1。

表1 标准曲线测定结果

线性回归方程：y=101.15x-5.5434 R2=0.9999，在0.59～11.8μg/ml范围之内呈良好的线性关系。

图3 对香豆酸标准曲线

7 精密度

取批号为20100101样品，按供试品溶液制备方法制备，以上述色谱条件进样（相同体积重复进样6次），对香豆酸峰面积的相对标准偏差为%。结果见表2。

表2 精密度试验结果

8 稳定性

精密称取批号为20100101样品，按供试品溶液制备方法制备，以上述色谱条件分别在间隔0小时、1小时、2小时、4小时、8小时、24小时后进样测定。对香豆酸峰面积的相对标准偏差为0.12%，结果见表3。

表3 稳定性试验结果

由此可见，供试品溶液在24小时内基本稳定。

9 重现性

精密称取同一批号20100101样品6份，按供试品溶液制备方法制备，依上述色谱条件进样，测定对香豆酸的峰面积。其平均值为0.290mg/g，相对标准偏差为0.47%。结果见表4。

表4 重现性试验结果

10 回收率

精密称取已知含量的样品6份，分别精密加入对香豆酸对照品适量，按供试品溶液制备方法制备，并按上述条件测定对香豆酸的含量，计算回收率，结果平均回收率为102.5%，RSD为0.22%。结果见表5。

表5 回收率试验结果

11 样品测定

按文章所述方法对三批样品进行含量测定，结果见表6。

12 结束语

在试验过程中，曾采用乙腈-水（45：55）、甲醇-0.1%冰醋酸（85：15）等多种流动相，结果色谱峰分离效果均不理想而未被采用。文中选用的流动相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55分离效果较好。实验中还考察了不同柱温（10、20、30、40℃）对色谱分离效果的影响，结果各柱温对分离效果无明显区别、保留时间的影响有明显区别。因此确定室温即可。

本课题采用高效液相色谱法测定炎宁胶囊中主要药效成分对香豆酸的含量，具有操作简便，结果准确可靠，重现性好的优点。

参考文献

[1]张才华，郭兴杰，薛秀峰，等.HPLC测定白花蛇舌草注射液中对香豆酸的含量[M].中国药学杂志，2004.