生脉注射液对家兔心肺复苏后多器官功能障碍防治的研究

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2013.09.012

基金项目：国家自然科学基金（30870351）；吉林省科技发展计划项目（200705201）

作者单位：130021 长春，吉林大学第一医院ICU

通信作者：王育珊，Email：

【摘要】目的 观察生脉注射液对心搏骤停家兔复苏后血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平和多器官功能指标的干预作用。方法 本实验在吉林大学基础医学院生理学实验室完成。将成年中华大耳白兔30只按随机数字表法分成盐水组和生脉组各15只，建立窒息法致心搏骤停动物模型，生脉组在复苏开始即刻给予2 ml/kg生脉注射液静注、复苏后10 min再次给予相同剂量一次，盐水组给予等量盐水注射。观察两组家兔自主循环恢复（ROSC）率，以及6、12、24、48 h不同时间点的存活率；以酶联免疫吸附（ELISA）法检测家兔复苏前与复苏后12、24、48 h血清中TNF-α水平；以生化学方法检测上述时间点心肌肌酸激酶同功酶（CK-MB）、谷丙转氨酶（ALT）、肌酐（Cr）、动脉血氧分压（PaO2）、血糖（Glu）等器官功能指标。统计分析采用成组t检验或χ2检验，以P0.05）。两组家兔窒息前TNF-α水平比较差异无统计学意义（P>0.05），在ROSC后12、24、48 h不同时间点，生脉组家兔血清TNF-α水平明显低于盐水组（P

【关键词】心搏骤停；心肺复苏；肿瘤坏死因子-α；生脉注射液；全身炎症反应综合征；多器官功能障碍综合征

Effects of Shengmai Injection on multiple organ failure in post cardiopulmonary resuscitation rabbits ZHANG Dong，LI Hong-xiang，CHEN Ying，WANG Yu-shan. Intensive Care Unit，The First Hospital of Jilin University，Changchun 130021，China

Corresponding author： WANG Yu-shan，Email：

【Abstract】Objective To observe the effect of Shengmai Injection （a Chinese herbal medicine preparation） on the serum levels of TNF-α used as indicators of organ function in post cardiopulmonary resuscitation rabbits. Methods Rabbit cardiac arrest model was made with asphyxia by clamping the trachea of rabbit. A total of 30 rabbits were randomly（random number） divided into two groups， namely the normal saline group （n=15） and the Shengmai injection group （n=15）. Rabbits in Shengmai injection group were injected with 2 ml/kg Shengmai Injection immediately at the beginning of cardiopulmonary resuscitation （CPR）， and the same dose of Shengmai injection given 10 min after CPR. Rabbits in saline group were injected with the same volume of physiological saline instead at the same intervals as previous group. The rate of restoration of spontaneous circulation （ROSC） and survival rates at 6， 12， 24 and 48 h after ROSC were observed. The serum levels of TNF-α were measured by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Biochemical methods were used to detect myocardial MB-isoenzyme of creatine kinase （CK-MB）， alanine aminotransferase （ALT）， creatinine （Cr）， glucose （Glu） and arterial partial pressure of oxygen （PaO2） before resuscitation and 12， 24 and 48 h after ROSC simultaneously in the two groups. Results There was no statistically significant difference in the ROSC rate and survival rate after resuscitation between the two groups（P>0.05）. Before asphyxia， there was no significant difference in the level of TNF-α found between the two groups（P>0.05）， but at 12， 24 and 48 h after ROSC， the levels of TNF-α in Shengmai group were much lower than those in Saline group （P

【Key words】Cardiac arrest；Cardiopulmonary resuscitation；Tumor necrosis factor-α；Shengmai Injection；Systemic inflammatory response syndrome；Multiple organ dysfunction syndrome

心搏骤停自主循环恢复后由于全身缺血-再灌注损伤会导致SIRS的发生[1]，伴随出现酷似严重脓毒症的免疫和凝血功能紊乱[2]，若不能阻断累积氧债造成的血管内皮细胞活化和改善各脏器功能，则不可避免会发生复苏后多器官功能障碍综合征（post resuscitation multiple organ dysfunction syndrome，PR-MODS）。而PR-MODS正是心搏骤停患者自主循环恢复率提高的同时却未能相应带来总体预后改善的重要原因。如何阻断心肺复苏后SIRS、MODS的发生和发展是复苏后综合治疗的重要环节，中医药研究有可能成为心脏骤停后治疗的最具有前景方向[3]。研究表明生脉注射液有利于心搏骤停后自主循环恢复，具有稳定血流动力学，强心、扩冠及改善微循环，减轻缺血-再灌注损伤等作用[4-5]，但生脉注射液对心肺复苏后SIRS和MODS影响的相关报道少见。因此，本研究拟观察生脉注射液对心肺复苏后家兔血清TNF-α水平及主要器官功能指标的影响，进一步探讨其在心搏骤停复苏后多器官功能障碍防治中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 实验材料

本实验在吉林大学基础医学院生理学实验室完成。选择健康成年清洁级家兔30只（中华大耳白兔），体质量2.0～2.5 kg，雌雄不拘，由吉林大学白求恩医学部动物实验中心提供[SCXK-（吉）-2007-0004]，采用随机数字表法分成盐水组和生脉组各15只。主要实验仪器包括BL-420S生物机能实验系统、有创动脉血压压力转换器、动物用呼吸机HX-300S（以上均由成都泰盟科技有限公司提供），小儿气管插管（2.5号）、静脉留置针、一次性无菌注射器以及兔专用实验台等其他常规动物实验器械。品为3%戊巴比妥钠溶液。生脉注射液（国药准字Z22026098）20 ml/支，由吉林省集安益盛药业股份有限公司提供。

1.2 实验方法

家兔术前6 h禁食不禁水，经耳缘静脉留置静脉留置针，注射3%戊巴比妥钠（30 mg/kg）麻醉后固定，四肢放置心电导联，进行心电图监护及描记。颈部备皮，在甲状软骨下正中切开皮肤约6 cm，分离左侧颈动脉并置管，接有创血压监测管及压力转换器与BL-420S生物机能实验系统相连接，记录血压。经口气管插管，保持自主呼吸通畅，在血压、呼吸、心率平稳后观察记录5 min，在呼气末夹闭气管致心脏停搏，气管夹闭7 min后松开夹闭的气管，给予心肺复苏术（参照动物心肺复苏的Utstein模式指南）[6]，呼吸机辅助呼吸（控制呼吸、吸入氧体积分数100%、呼吸频率30次/min、潮气量15～20 ml/kg），并于胸骨正中胸外心脏按压至少150次/min，按压深度为兔胸廓前后径的1/3，另一人同时快速静推肾上腺素0.02 mg/kg（视自主循环恢复情况每3～5 min给药一次，可重复3次），其中生脉组在复苏开始即刻给予2 ml/kg生脉注射液经耳缘静脉缓慢静推、自主循环恢复后10 min再次给予相同剂量一次，盐水组给药时间和盐水剂量与生脉组相同。连续监测并记录心电图、颈动脉血压，至自主循环恢复或复苏15 min无效者停止心肺复苏。对自主循环恢复的动物，连续监测颈动脉血压和心电图，通过耳缘静脉留置针给予平衡盐溶液维持静点，对复苏后循环不稳定的家兔酌情给予多巴胺、肾上腺素、多巴酚丁胺等药物，同时以呼吸机辅助通气，密切观察家兔角膜反射、咀嚼反射、肢体疼痛反应、自主呼吸的恢复，在自主循环恢复6～8 h后血压、心率以及自主呼吸稳定至少1 h以上的动物模型逐步撤机拔管，撤除颈动脉置管，局部结扎，逐层缝合颈部各层组织，连续观察至48 h处死，留取标本。

1.3 观察、检测指标和相关标准

1.3.1 观察和检测指标 ①观察盐水组和生脉组家兔ROSC率，以及6、12、24、48 h不同时间点的存活率。②两组家兔TNF-α的测定：以酶联免疫吸附（ELISA）法检测复苏前与复苏后12、24、48 h存活家兔血清中TNF-α水平。具体操作按照试剂盒说明进行，试剂盒购自美国ADL。③主要脏器功能检测：留取两组复苏前与复苏后12、24、48 h不同时间点存活家兔的动脉血标本3 ml，采用7600自动生化分析仪检测心肌肌酸激酶同功酶（CK-MB）、谷丙转氨酶（ALT）、肌酐（Cr）；GEM Premier3000血气分析仪检测动脉血氧分压（PaO2）、血糖（Glu）；每次抽血后给予等量生理盐水注射。

1.3.2 相关实验室诊断标准[6] 心搏骤停标准：①监护出现MAP

1.4 统计学方法

计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，两组间数值比较采用成组t检验，不同时点间的比较采用方差分析（LSD-t），计数资料采用率表示，率的比较采用χ2检验，应用SPSS 13.0统计软件，以P

2 结果

2.1 生脉组和盐水组家兔预后比较

生脉组和盐水组的ROSC率均为100%，复苏后不同时间点的存活率之间差异无统计学意义（P>0.05），见表1。表1 生脉组和盐水组家兔预后比较[n=15，（例，%）]

Table 1 Comparison of prognosis between Shengmai group and saline group[n=15，（例，%）]

2.2 比较生脉组和盐水组家兔心搏骤停复苏前后血清中TNF-α水平的变化

生脉组和盐水组家兔窒息前TNF-α水平差异无统计学意义（P>0.05），在ROSC后12、24、48 h不同时间点，生脉组家兔血清TNF-α水平明显低于盐水组，两组之间比较，差异具有统计学意义（P

Table 2 Comparison of serum TNF-α between Shengmai group and saline group before and after resuscitation（x±s）

注： 与同期盐水组比较，aP

复苏后两组家兔均出现反映器官功能障碍生化指标的改变。结果显示，盐水组ROSC后12 h即有CK-MB明显升高，ROSC后24～48 h出现ALT、Cr和Glu的明显升高（P

表3 生脉组和盐水组家兔复苏前后主要脏器功能指标变化比较（x±s）

Table 3 Comparison of indicators organ function between Shengmai group and saline group before and after resuscitation（x±s）

注：与窒息前比较，aP

研究表明最早在心搏骤停后3 h可出现血中各种细胞因子、可溶性受体和内皮素的浓度升高，而且这些指标改变的程度和预后不良具有一定相关性[7-8]。肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是一种来源广泛且具有多种生物活性的细胞因子，常常参与炎性反应和免疫应答等病理过程，是炎症的启动因子，若持续释放或产生过多可进一步诱导IL-6、IL-8、IL-10等细胞因子的产生，引起连锁和放大效应即瀑布效应，最终会导致多器官功能衰竭综合征的发生甚至死亡[9]。如果能抑制心搏骤停复苏后升高的TNF-α的水平，那么就有可能减轻机体的SIRS反应和进一步阻断MODS的发生、发展进程[10]。

生脉注射液具有广泛的免疫药理活性，以及有调节机体免疫功能的作用，临床应用中发现除可改善心衰患者临床症状外，还可降低血清TNF-α水平[11]。另外，在对2型糖尿病肾病治疗研究中也发现生脉注射液可以抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-6的产生[12]。因此，为探讨生脉注射液在心搏骤停复苏后是否具有相似的药理作用，本研究检测了心搏骤停家兔复苏前后不同时间点血清TNF-α水平的变化，结果显示，盐水组和生脉组窒息前血清TNF-α水平差异无统计学意义，但在ROSC后12、24、48 h不同时间点，生脉组家兔的血清TNF-α水平明显低于盐水组（P

另外，本研究也观察了在心搏骤停复苏后生脉注射液对临床上常见代表器官损伤或功能障碍生化指标的影响。结果显示，与窒息前比较，两组家兔在复苏后不同时间点均出现反映多器官功能障碍生化指标的改变。其中在ROSC后24 h生脉组的CK-MB、ALT和Cr升高水平要明显低于盐水组（P0.05），提示生脉注射液虽可不同程度地改善复苏后家兔心、肝、肾等器官功能指标，但对存活率无明显影响。考虑其原因是由于影响复苏后家兔预后的因素较多，不仅与多个器官的功能恢复相关，而且可能受心搏骤停时间长短、研究样本量大小等诸多因素的制约。

由于目前反映脑功能的血清学标志物不十分明确，并且不适宜开展临床常规检测，所以本研究具有一定局限性。虽然本研究提示生脉注射液对心搏骤停复苏后心、肝、肾具有不同程度的多器官保护作用，但具体的分子生物学机制仍有待进一步深入探讨。

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（收稿日期：2013-04-03）