六君子汤对白细胞减少症模型小鼠免疫和造血功能的影响

[摘要] 目的：观察中药六君子汤对小鼠免疫和造血功能的影响。方法：用注射给予环磷酰胺的方法建立小鼠白细胞减少症模型后，六君子汤灌胃给药15 d，观察外周血白细胞、骨髓有核细胞数、淋巴细胞转化指数、网织红细胞以及细胞肿瘤因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)指标的变化。结果：与模型组比较，六君子汤各剂量组均可促进小鼠外周血白细胞、网织红细胞、骨髓有核细胞数、淋巴细胞转化指数、TNF、IL-6活性指标的恢复和升高,差异具有统计学意义。结论：六君子汤有显著改善机体免疫功能和刺激骨髓造血功能的作用。

[关键词] 六君子汤；白细胞减少症；免疫；造血功能；小鼠

[中图分类号] R289 [文献标识码]B[文章编号]1673-7211（2008）11（c）-065-02

Effects of traditional LiuJunZi Decoction on immunity and hematopoietic function of leukopenia animal model in mice

YUAN Xiao-hui

(The First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi154002,China)

[Abstract] Objective: To study the effects of LiuJunZi Decoction on function of immune system and bone marrow in mice．Methods: Leucopenia animal model was made by injection of cyclophosphamide． The LiuJunZi Decoction was administrated orally．The white blood cell(WBC) counts，reticulocyte count，the number of nucleated bone marrow cells(NNBMC)，T cell transformation indices(TCTI)，activity of tumor necrosis factor(TNF) and interleukin-6(IL-6) in blood of leucopenia mice after chemotherapy were observed respectivel． Results: WBC，reticulocyte count，NNBMC and TCTI reduced remarkable，activity of TNF and IL-6 in blood were decreased obviously．These hematopoiesis indexes and the activity of TNF,IL-6 increased after oral administration of LiuJunZi Decoction. Conclusion: LiuJunZi Decoction can significantly ameliorate immune function and stimulate hematopoietic function in mice．

[Key words] LiuJunZi Decoction；Leukopenia；Hematopoietic function；Immunity；Mice

六君子汤方出自《妇人良方》，是由党参、茯苓、白术、甘草、陈皮、法夏等六味药组成。其功能主治为健脾益气、燥湿化痰、和胃消痞、降逆止呕，能兴奋中枢系统，减轻疲乏感，有促使红细胞、血色素，及白细胞升高的作用，可加强免疫功能，纠正肠胃功能紊乱，并有保肝效果[1]。经临床治疗观察，对白细胞减少症有较好疗效[2]。为探讨该制剂对动物的骨髓保护、修复受损造血机能的作用，我们观察了六君子汤对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少症的影响，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 药品常规制备中药煎剂六君子汤。

1.1.2 试剂与仪器TNF、IL-6试剂盒(总医院科技开发中心放免所)；RPMI1640培养液(USA.14072)；MTT(四甲基偶氮唑盐，Sigam公司)；PBS液(武汉亚法生物技术有限公司)；淋巴细胞分离液(比重1.077±0．001，上海试剂三厂)；植物血凝素(PHA 950117，广州医药工业研究所)；Elx800型酶标仪(美国)；GC-1200 r放射免疫计数器(中国安徽科大创新股份有限公司)。

1.1.3 动物昆明小鼠100只，体重(20±2) g，雌雄各半，由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 实验方法将小鼠随机分成5组，每组20只，即正常组、病理模型组、六君子汤小、中、大剂量组[给药剂量按临床成人每日量的3～7倍折算约为40、60、80 g/（kg・d）]。动物除正常对照组外进行腹腔注射环磷酰胺50 g/kg，1次/d，共7 d，建立化疗白细胞减少症模型(白细胞下降至2.0×109～3.0×109/L)。建模成功后即日起持续灌胃给药，1次/d，每次1.5 ml, 共15 d。正常组、病理模型组给等容量体积生理盐水。

1.2.2 检测指标及方法造血功能指标测定：白细胞、网织红细胞、骨髓有核细胞按常规测定计数。血淋巴细胞转化实验：心室取血，抗凝，用RPMI1640对倍稀释，加等量淋巴细胞分离液，经2 000 r/min离心20 min，分离淋巴细胞并洗涤3次，加入适量RPMI1640培养液进行细胞计数，稀释细胞至8×106个/L。取细胞悬液加入经灭菌处理的96孔微量细胞培养板内，每个样本6孔，每孔180 μl，其中3孔加20 μl植物血凝素，另3孔加20 μl培养液作对照组，每孔总量为200 μl；另设3孔作空白对照组。将培养板置37℃体积分数5％的CO2培养箱里培养72 h。采用MTT比色法测定小鼠淋巴细胞转化指数；检测细胞因子TNF、IL-6：分别于造模后5、10、15 d取外周血，按试剂盒操作说明行放免学检查。

1.3 统计学方法

所有数据均采用双侧统计检验方法，组间比较、均值比较用t检验，P＜0.05为有统计学意义。所有数据分析用SPSS 13.0统计软件操作。

2 结果

2.1 六君子汤对小鼠外周血网织红细胞和白细胞计数的影响

与正常组比较，模型组5 d后网织红细胞数和白细胞计数均显著下降(P＜0.01)，后均逐渐回升，于15 d基本恢复基线值。与模型组比较，在5、10和15 d时，六君子汤3个剂量组的网织红细胞数和白细胞计数于显著升高(P＜0.05或P＜0.01)，但3个剂量组组间没有差异，见表1。

2.2 六君子汤对小鼠骨髓有核细胞数和淋巴细胞转化的影响

与正常组比较，模型组5 d后骨髓有核细胞数降低明显(P＜0.01)，随后逐渐升高；六君子汤3个剂量组小鼠骨髓有核细胞数于5、10和15 d均高于模型组( P＜0.05或P＜0.01)，见表2。与正常组比较，小鼠造模后淋巴细胞转化指数明显下降(P＜0.01)；六君子汤3个剂量组与模型组比较，于5、10 d淋巴细胞转化指数均升高(P＜0.05或P＜0.01)，见表2。

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2.3 六君子汤对小鼠TNF和IL-6的影响

与正常组比较，模型组血中IL-6活性降低(P＜0.01)；六君子汤3个剂量组与模型组比较，于5、10 d时IL-6活性明显增高(P＜0.05或P＜0.01)，见表3。小鼠造模后TNF活性降低(P＜0.01)，后逐渐回升，于15 d基本恢复；六君子汤3个剂量组与模型组比较，于5、10 d时TNF活性增高(P＜0.05或P＜0.01)，且表现出剂量依赖关系，见表3。

3 讨论

白细胞减少症属中医血虚、虚劳范畴，属气血不足、脾胃、肝肾两虚的病证。中医认为，脾胃为后天之本，有运化水谷之功，脾虚则气血生化无源；肾藏精，主骨生髓为先天之本，肾气虚则髓不能满，血不能化生，故而表现出气血损伤、脾胃虚弱、肝肾亏虚等证候[3]。六君子汤为甘温平调脾胃之剂，乃补中稳妥之方，治气虚痰饮结聚，脾胃不和变生诸症者均宜。“壮者气行则愈，怯者著而为病。”人以胃气为本，劳倦伤脾，脾胃气虚，一息不运，便有积聚。人参甘温益胃致冲和之气，白术微苦甘温培补中宫，茯苓清治节，甘草调五脏，陈皮辅以行气，则补品不至泥而不行，加半夏疏脾土之湿浊，更妙在茯苓甘淡渗利，能助参术之健运，且茯而下济，兼可通阳[4]。

本实验结果显示，六君子汤能促进病理模型小鼠外周血白细胞、网织红细胞、骨髓有核细胞数的恢复，特别是在造模后第5、10天效果更为显著，明显表现出其调节造血系统、升高白细胞、刺激机体的造血能力。同时，研究还表明六君子汤不仅能单独刺激小鼠淋巴细胞的转化能力，而且还诱导小鼠细胞因子的释放，实验中病理小鼠血液中IL-6、TNF活性表现出明显降低，在运用六君子汤治疗后第5、10天具有显著升高IL-6、TNF水平。IL-6是一种主要由免疫活性细胞分泌的多功能因子，不仅具有免疫调节及抗肿瘤作用，且能促进细胞的增殖分化、加速血小板的再生，具有显著的造血调控作用[5]；还有研究报道：TNF对白细胞计数和血小板计数的减少有促进恢复的作用[6]。本研究提示六君子汤具有全面调节机体的免疫力作用。综上表明，六君子汤对化疗所致免疫力低下及造血系统损伤有较好的治疗效果。

[参考文献]

[1]贾彦焘.中医治疗放化疗后白细胞减少的研究进展[J].中国医学研究与临床,2004,2(16):58-60.

[2]陈昌南.联合用药治疗化疗引起的白细胞减少与严重感染[J].江门医药卫生,2001,2:27.

[3]喻生保,辛小红,邓勇.化疗不良反应的中医治疗[J].实用中西医结合临床,2003,3(4):44-46.

[4]陈奇.中药药理研究・方法学[M].北京:人民卫生出版社,1994.480.

[5]肖锦松,崔风军.玉竹、菟丝子醇提物对烧伤小鼠免疫功能的影响[J].中国中药杂志,1990,15(9):45-47.

[6]周华云,周剑影,王国权,等.白细胞介素-6及肿瘤坏死因子对受照小鼠造血恢复的影响[J].辐射防护,2001,21(4):232-237.

(收稿日期：2008-06-06)

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