尿毒康合剂改善慢性肾功能衰竭大鼠的实验研究

罗　清　顾向明　苏小茹　钟希文　王书芹　林　慧　梁　食

摘　要：目的：探讨尿毒康合剂改善慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾组织的影响。方法：用SD大鼠随机分成5组：1组正常组、2组模型组、3组尿毒康高剂量组、4组尿毒康低剂量组、5组尿毒清对照组。除1组外其余4组灌服腺嘌呤，21天后收集1组和2组24h尿及从眼底采血测124h尿蛋白定量(UTP)、血清尿素氮(BUN)、血肌肝(cr)、血红蛋白(Hb)及微量白蛋白(UMA)，证实造成大鼠肾衰模型。22天后3、4、5组开始给药治疗，1、2组给予生理盐水。51天后收集5组大鼠24h尿液，同时处死大鼠，采血及取肾。同时称肾重、体重。检测UTP、BUN、Cr、Hb、UMA、Ca、P等指标。HE染色观察肾脏病理结构。结果：治疗前后尿毒康高低剂量组大鼠肾功能功能指标及血红蛋白等与模型组相比较，均具有显著性，且同时能抑制cRF大鼠肾小球系膜细胞及基质增生，改善病理状态。减轻肾小管一间质损害。结论：尿毒康合剂能够降低CRF大鼠UTP、Cr、BUN、P、UMA水平、升高血中Hb、Ca等水平。从而增强机体的排毒能力，减轻肾损伤，改善CRF大鼠的肾功能及免疫功能。

关键词：尿毒康合剂；慢性肾功能衰竭；动物模型；肾组织病理

中图分类号：11285.5 文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)07－1421－03

慢性肾功能衰竭(CRF)是临床常见病，且预后差。近年西医学治疗因透析与肾移植的应用，虽有较大进展，但价格昂贵，受到很大限制，寻找延缓CRF进展的有效措施是当前医学研究的重要课题。尿毒康合剂是本院传统的经验方，经多年临床验证，CRF患者经尿毒康合剂治疗后血浆sIL－2R水平明显下降，Scr降低，肌肝清除率Ccr上升，临床症状明显改善。为进一步验证其疗效，并探讨其机制，笔者采用腺嘌呤法建立CRF动物模型，进行研究，为其临床延缓CRF提供理论依据，现介绍如下。

1 实验材料

1．1　实验动物SD雄性健康大鼠60只，体重180－250g。由广州中医药大学实验动物中心提供。

1．2　实验药物尿毒康合剂：尿毒康合剂是本院名中医经验方，由本院制剂室研制生产。尿毒清颗粒剂：5g/袋，由广州市国盈新药特药批发部提供。腺嘌呤(Adenine)：由广州展晨生物科技有限公司提供。

1．3　主要仪器 SE－9000全自动血细胞分析仪(日本)、AERD SET全自动生化分析仪(美国)、C－500尿液分析仪(德国)。Olymyus.BX－50电子显微镜。

2　实验方法

2．1　分组SD雄性大鼠购入后，适应性喂养1周，称重。随机分成5组，正常组、模型组、尿毒康低剂量组、尿毒康高剂量(低剂量组的4倍)组、尿毒清阳性对照组。每组12只。

2．2　追模方法除正常组外，其余4组用腺嘌呤给大鼠灌胃，腺嘌呤用前用生理盐水配成浓度25％，按250ms/(kg・d)给予，正常组给予等量生理盐水灌胃，造模用药21天，第22天正常组和模型组用代谢笼收集24h尿。测尿蛋白含量，并从眼底静脉从取血1.5－2mL，测BUN、Scr、Hb、UMN，结果证实造模成功。造模过程共有9只大鼠死亡。

2．3　给药方法及取材造模结束后，即第23天开始治疗，尿毒清颗粒研后配成20％溶液。大鼠给药剂量确定按每千克体重占有体表面积比值算得。尿毒康低剂量组为临床等效组，按0.009mL/(g・d)(相当于原生药量0.55g)灌胃；高剂量组用时将低剂量浓缩成4倍后，按0.009mW(g・d)(相当于原生药量2.2g)灌胃。尿毒清颗粒用时用生理盐水配成20％溶液，按0.002g/(g・d)[0.01mL[/(g・d)]灌胃。正常组和模型组给予2mL生理盐水灌胃，共治疗31天，治疗过程中大鼠自由进食、水。

2．4　统计学处理计量资料用t检验，计数资料用X2检验(spss10.0)。

3　实验结果

3．1 大鼠造模后BUN Scr Hb UMN 24h尿蛋白定量检测，两组经统计学处理，有显著性差异(P＜0.01)，说明造模成功。

3．3　治疗后各组大鼠Hb24h尿蛋白定量体重肾重。

3．4　HE染色显微镜下观察结果正常组：肾小球、肾小管结构正常，无病理改变，肾小管内无结晶物沉淀。模型组：肾小球萎缩，数量减少，肾球囊扩大，肾小管扩张，肾近曲管、远曲管集合上皮细胞浊肿，变性，管腔内有红染均质样物质及结晶，部分腺上管上皮细胞胞浆内有棕黄色沉积物。间质纤维组织增生，有慢性炎细胞浸润。低剂量组：肾小球有充血，肾球囊轻度扩大，肾小管扩张，肾近曲小管、远曲管和集合管上皮肿胀，管腔内可见结晶，间质有慢性炎细胞浸润。高剂量组：肾小球充血不明显，肾球囊无扩大，肾小球结构基本接近正常，肾小管内有少许结晶，未见棕黄色物沉积。尿毒康组：肾小球充血，肾球囊扩大。部分肾小管扩张。肾近曲管、远曲管和集合管上皮细胞轻度浊肿，变性，肾小内有结晶，间质纤维组织增生，慢性炎细胞浸润。

4　讨　论

关于慢性肾衰竭的机制，现代医学在提出“健存”肾单位和矫枉失衡学的基础上，又提出了肾小球高过滤学说，异常高浓度的腺嘌呤通过黄嘌呤氧化酶的作用变成极难溶于水的2，8一二羟基嘌呤，后者沉积在肾小管，影响氮质化合物的排泄，导致氮质血症、毒素蓄积及电介质、氨基酸代谢紊乱，最终引起肾功能衰竭。本实验观察到随着食用腺嘌呤时间的延长，大鼠日益消瘦，倦缩拱背，精神萎顿，体毛脱落，血清检测，血BUN、UTP、CR、水平进行性升高；Hb、Ca明显下降，出现严重贫血症状，肾脏重量是正常大鼠的3－4倍，肾组织内大量二羟基腺嘌呤沉积，大部分肾小管完全破坏呈淋巴细胞灶性浸润，局部纤维增生。由此可说明笔者复制的慢性肾衰大鼠模型成功。

尿毒康合剂由黄芪、丹参、大黄、红花、地榆等药物组成。是本院名老中医传统经验方，具有排毒、化瘀、益气生血功能。对慢性肾功衰竭疗效较好。经多年临床验证，慢性肾衰患者经尿毒康合剂治疗后血浆SIL－2R水平明显下降，Scr降低，肌肝清除率Ccr上升，临床症状明显改善。现代药理研究证明，黄芪中多糖和皂苷，能显著增加血液中白细胞总数，促进中性粒细胞及巨噬细胞的吞噬和杀菌能力，从而促进机体的免疫能力。增加人胎肾和乳鼠肾细胞与人胎肺二倍体细胞体外培养的传代数，使每代细胞的存活时间延长。大黄能显著降低血肌酐、尿素氮，减少肝肾组织中合成尿素，还抑制体蛋白，特别是肌蛋白的分解并促进尿素有肌酐的排泄。其中的大黄蒽醌和大黄酸蒽酮葡萄糖苷可直接抑制大鼠肾小球系膜细胞生长及系膜细胞DNA、蛋白质的合成，对肾大部分切除大鼠血清中促肾因子的升高有抑制作用，同时还具有改善CRF患者氮质血症，抑制肾脏代偿性肥大和高代谢状态，纠正CRF患者脂质代谢紊乱，及清除CRF患者过多的氧自由基，从而延缓CRF进展的作用。丹参中有效成分紫草酸镁β具有降低血尿素氮、肌酸酐、甲基胍、胍基琥珀酸和无机磷酸盐，伴以增加尿中尿素、肌酸酐和电解质分泌作用。诸药合用，共凑攻补兼施，通腑泻浊，扶正祛邪之功。本实验证实，尿毒康合剂能够降低CRF大鼠UTP、Cr、BUN、P、UMA水平、升高血中Hb、Ca等水平。从而增强机体的排毒能力，减轻肾损伤，改善CRF大鼠的肾功能及免疫功能。本实验病理学结果也证实，尿毒康合剂可减少腺嘌呤在肾小管中的沉积，对肾小管上皮细胞破坏减轻，对健存的肾单位有明显的保护作用，减轻肾的损伤，能有效延缓CRF进展。