HPLC法测定仙灵乙肝丸中丹参酮IIA的含量

【摘要】目的:建立仙灵乙肝丸的质量标准。方法:采用HPLC法对仙灵乙肝丸中丹参酮IIA的含量进行测定。结果:仙灵乙肝丸中丹参酮IIA的含量在0.03756-0.37568μg的范围内,有良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为99.66%,RSD为1.11%。结论:建立了仙灵乙肝丸的质量标准,该方法操作易行,稳定可靠,用于仙灵乙肝丸中丹参酮IIA的含量,可以用于该制剂的质量控制。

【关键词】仙灵乙肝丸;丹参酮IIA;HPLC

doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.09.386文章编号:1006-1959(2010)-09-2614-02

仙灵乙肝丸是经批准生产的医院中药制剂[1](豫药制字Z05140086),处方由丹参、淫羊藿、桑寄生、巴戟天、菟丝子等九味药组成,具有清热解毒,疏肝健脾。具有较强的抗炎,改善肝功能,保肝利胆功效,用于肝气郁滞、湿邪困脾及乙型病毒性肝炎、瘀血疼痛等症。经过多年的临床应用证明其功效显著。现行质量标准中未收载含量测定项目,不能有效的控制药品质量。丹参为方中主要药味之一,具有促进组织的修复与再生,保肝改善肝微循环,抗菌作用,丹参酮IIA是其有效成分之一,为了进一步提高标准,保证制剂的稳定可靠,笔者采用高效液相法对制剂中的丹参酮IIA进行了含量测定。

1.仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪;色谱柱Agilent-C18(5μm,4.6mm×150mm),AEU-210电子天平,丹参酮IIA对照品(批号:110752-200511,中国药品生物制品检定所),仙灵乙肝丸为商丘市中医院提供(批号为100101,100104,100106)。甲醇为色谱纯,水为纯化水。

2.方法与结果

2.1色谱条件[2]。Agilent-C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-水(75:25),检测波长为270nm,柱温:25℃,流速为1.0ml・min-1,进样量10μl。

2.2对照品溶液的制备。精密称取对照品丹参酮IIA11.74mg,置50ml的棕色量瓶中,加甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,精密量取2ml,置25ml的量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。

2.3供试品溶液的制备[3]。取供试品研碎,混匀,精密称定2.0g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,用0.45μm微孔滤膜滤过,即得。

2.4阴性对照品溶液的制备。除丹参外,其他各药按供试品处方量投料按仙灵乙肝丸的制备工艺制成阴性对照品,然后按供试品的制备方法,制成阴性对照品溶液的制备。

2.5系统适应性试验:

2.5.1线性关系考察。分别吸取对照品溶液(18.24μg・ml-1)2、5、8、15、20μl各进样两次,记录峰面积分值,以丹参酮IIA峰面积积分值对进样量进行回归,得到回归曲线y=3.285x+461.721,r=0.9999。结果表明其线性关系良好,线性范围为:0.03756-0.37568μg。

图1(A)阴性对照(B)丹参酮IIA对照品(C)样品

Fig 1(A)negative sample(B)tanshinone of reference substance (C)sample

表1加样回收实验结果

2.5.2精密度试验。精密吸取上述对照品溶液10μL,重复进样6次,按上述色谱条件测定2峰面积。结果,RSD=0.73%,表明仪器精密度良好。

2.5.3重复性试验。精密称取同一批(批号:100104)样品6份,照“2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进样,测定。结果,平均含量为0.16mg/粒,RSD=1.17%,表明本方法重复性良好。

2.5.4稳定性试验。取供试品溶液(批号:100104),分别于0、1、2、4、8、12h各精密吸取10μL,按上述色谱条件测定峰面积积分值。结果,RSD=0.3%,表明供试品溶液在12h内稳定。

2.5.5加样回收率试验。取已知含量的样品6份各约0.5g,精密称重,分别精密加入一定量的丹参酮IIA对照品,照“2.3”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进样10μL,测定,计算回收率。结果(详见表1)。

3.样品含量测定

按上述含量测定方法测定样品中丹参酮IIA含量。结果(见表2)。

表2仙灵乙肝丸中丹参酮IIA的测定结果

4.结论

在供试品制备的的过程中,也曾考虑到其他样品对丹参提取以及含量测定的影响,考察了用不同提取方法的提取,比较了超声和回流[4-5],结果超声提取30分钟,丹参酮IIA仅为0.2483g/g,回流提取,效果较好,提取较完全,所以本试验供试品的处理方法为甲醇回流提取1小时,2005版一部中国药典丹参项下丹参酮IIA含量测定一致[6]。

仙灵乙肝丸是医院制剂,在长期的临床实践中证明,就有良好的疗效,但是长期以来,以薄层鉴别作为该药的标准,没有具体的质量控制标准,丹参是仙灵乙肝丸的主药之一,本实验通过用HPLC法对仙灵乙肝丸中丹参酮IIA的含量进行测定。通过以上实验,建立了仙灵乙肝丸制剂的质量控制方法,该方法稳定可靠、操作简便、专属性较强,可以作为仙灵乙肝丸制剂的质量控制标准的参考。

参考文献

[1]河南省医疗机构制剂标准.

[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005,52.

[3]叶英响.HPLC测定心舒颗粒中丹参酮IIA的含量[J].中国中药杂志,2007,32(23):2572.

[4]楼云娜,袁强.HPLC测定冠心丹参滴丸中丹参酮ⅡA的含量[J].齐鲁药事,2007,26(9):595.

[5]杨朝莲,曹敏.丹参药材中丹参酮ⅡA提取方法的探讨[J].贵阳中医药学报,2005,27(1):60.

[6]戴忠,钱忠直.HPLC法测定丹参粉针剂中丹参素及原儿茶醛的含量[J].中成药,1996,18(6):10.